药典二部色谱法讲义--课件

1 1中国药典二部色谱法概况中国药典二部色谱法概况药品检验所药品检验所 1ppt课件想了解色谱法总体要求有变化吗？色谱法总体要求有变化吗？仪器要求改了吗？仪器要求改了吗？操作要求改了吗？操作要求改了吗？判断标准改了吗？判断标准改了吗？品种标准中有对色谱法的新要求吗？品种标准中有对色谱法的新要求吗？新增要求控制？新增要求控制？修订原有方法？修订原有方法？新要求带来影响新要求带来影响2ppt课件主要内容主要内容u色谱法的基本概念色谱法的基本概念u 色谱法在中国药典中的沿革色谱法在中国药典中的沿革 u 中国药典中国药典2010年版色谱法内容概况年版色谱法内容概况u 展望展望3ppt课件何为色谱法4ppt课件色谱法是利用混合物中各组分的理化性质的差异(吸附力、溶解度、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力等)，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相叫固定相，另一相流过此固定相叫作流动相。由于各组分受流动相作用产生的推力和受固定相作用产生的阻力的不同，使各组分产生不同的移动速度，使得结构上只有微小差异的各组分得到分离。再配合相应的光学、电学、电化学和或其他相关检测手段，对各组分进行定性和定量分析的方法。色谱法的基本概念5ppt课件色谱法的基本概念分离原理分离原理l吸附色谱法吸附色谱法l分配色谱法分配色谱法l离子交换色谱法离子交换色谱法 l排阻色谱法排阻色谱法分离方法分离方法l纸色谱法纸色谱法l薄层色谱法薄层色谱法l柱色谱法柱色谱法 l高效液相色谱法高效液相色谱法l气相色谱法气相色谱法6ppt课件色谱法的基本概念 特点特点l分辨效力分辨效力l分析效率分析效率l灵敏度灵敏度l操作及应用操作及应用 局限性局限性l标准物质标准物质l化学结构化学结构7ppt课件色谱法在中国药典中的沿革lV A V A 纸色谱法纸色谱法(1985)(1985)lV B V B 薄层色谱法薄层色谱法(1985)(1985)lV C V C 柱色谱法柱色谱法(1985)(1985)lV D V D 高效液相色谱法高效液相色谱法(1985)(1985)lV E V E 气相色谱法气相色谱法(1985)(1985)lV F V F 电泳法电泳法(1990)(1990)lV G V G 毛细管电泳法毛细管电泳法(2000)(2000)lV H V H 分子排阻色谱法分子排阻色谱法(2000)(2000)lV J V J 离子色谱法离子色谱法(2010)(2010)8ppt课件高效液相色谱法在中国药典二部的应用9ppt课件中国药典2010年版色谱法内容概况lV A V A 纸色谱法纸色谱法lV B V B 薄层色谱法薄层色谱法lV C V C 柱色谱法柱色谱法lV D V D 高效液相色谱法高效液相色谱法lV E V E 气相色谱法气相色谱法lV F V F 电泳法电泳法(1990)(1990)lV G V G 毛细管电泳法毛细管电泳法(2000)(2000)lV H V H 分子排阻色谱法分子排阻色谱法(2000)(2000)lV J V J 离子色谱法离子色谱法(2010)(2010)10ppt课件V A 纸色谱法系系以以纸纸为为载载体体，纸纸上上所所含含水水分分或或其其他他物物质质为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。l 鉴别鉴别l 纯度检查纯度检查l 含量测定含量测定11ppt课件V B 薄层色谱法系系将将供供试试品品溶溶液液点点样样于于薄薄层层板板上上，经经展展开开、检检视视后后所所得得的的色色谱谱图图，与与适适宜宜的的对对照照物物按按同同法法所所得得的的色色谱谱图图作作对对比比，用用于于药药品品的的鉴鉴别别或或杂质检查的方法。杂质检查的方法。12ppt课件V B 薄层色谱法 仪器与材料仪器与材料l薄层板薄层板(增增 “高效薄层板的粒径一般为高效薄层板的粒径一般为5757m m”)l点样器点样器l展开容器展开容器l显显色色剂剂(“碘碘蒸蒸气气中中显显色色”修修改改为为“适适宜宜试试剂剂的的蒸蒸气气中熏蒸显色中熏蒸显色”)l显色装置显色装置l检视装置检视装置13ppt课件V B 薄层色谱法 操作方法操作方法l薄层板制备薄层板制备 (110110活化活化3030分钟分钟)l点点样样 (点点样样基基线线距距底底边边2.0cm2.0cm，点点样样直直径径为为24mm24mm(高高效效薄薄层层板板为为12mm)12mm)，点点间间距距离离可可视视斑斑点点扩扩散散情情况况以以不不影影响响检检出出为为宜宜，一一般般为为1.02.0cm 1.02.0cm(高高效效薄薄层层板板可可不不小小于于5mm)5mm)l展展开开(“待待展展开开至至规规定定距距离离(一一般般为为1015cm)1015cm)”调调整整为为“待待展展开开至至适适宜宜的的展展距距(如如：20cm20cm的的薄薄层层板板，展展距距一一般般为为1015cm1015cm；10cm10cm的的高高效效薄薄层层板板，展展距距一一般般为为5cm5cm左左右右)”l显色与检视显色与检视14ppt课件V B 薄层色谱法 系统适用性试验系统适用性试验l检检测测灵灵敏敏度度 (系系指指杂杂质质检检查查时时，供供试试品品溶溶液液中中被被测测物能被检出的最低量。物能被检出的最低量。)l比比移移值值(R Rf f)(除除另另有有规规定定外外，比比移移值值(R Rf f)应应在在0.20.80.20.8之间。之间。)l分分离离效效能能 (鉴鉴别别时时，在在对对照照品品与与结结构构相相似似药药物物的的对对照照品品制制成成的的混混合合溶溶液液；杂杂质质检检查查时时，杂杂质质对对照照品品用用供供试试品品自自身身稀稀释释对对照照溶溶液液溶溶解解、用用待待测测组组分分的的对对照照品品溶溶液液溶溶解解、供供试试品品以以适适当当的的降降解解方方法法获获得得的的溶溶液液。应应显显示两个清晰分离的斑点示两个清晰分离的斑点)”15ppt课件V B 薄层色谱法 测定法测定法l鉴鉴别别 (同同浓浓度度对对照照品品溶溶液液、供供试试品品溶溶液液与与对对照照品品溶溶液液等体积混合等体积混合)l杂杂质质检检查查 (杂杂质质对对照照品品法法、供供试试品品溶溶液液的的自自身身稀稀释释对对照照法法、或或两两者者并并用用 。通通常常应应规规定定杂杂质质的的斑斑点点数数和和单单一一杂杂质质量量，当当采采用用系系列列自自身身稀稀释释对对照照溶溶液液时时，也也可可规规定定估计的杂质总量估计的杂质总量)16ppt课件烟酰胺P85617ppt课件V B 薄层色谱法 1 12 2 3 3 4 41 1、烟酰胺溶液、烟酰胺溶液2 2、烟酸溶液、烟酸溶液3 3、碱破坏溶液、碱破坏溶液4 4、混合溶液、混合溶液18ppt课件V C 柱色谱法l 吸附柱色谱吸附柱色谱l 分配柱色谱分配柱色谱19ppt课件V D 高效液相色谱法系系采采用用高高压压输输液液泵泵将将规规定定的的流流动动相相泵泵入入装装有有填填充充剂剂的的色色谱谱柱柱，对对供供试试品品进进行行分分离离测测定定的的方方法法。注注入入的的供供试试品品，由由流流动动相相带带入入柱柱内内，各各组组分分在在柱柱内内被被分分离离，并并依依次次进进入入检检测测器器，由由积积分分仪仪或或数数据据处处理理系系统统记记录录和和处处理理色色谱谱信信号。号。20ppt课件V D 高效液相色谱法 (1)(1)色谱柱色谱柱l反反相相 (非非极极性性:C:C1818、C C8 8、CNCN、NHNH2 2)()(组组分分的的出出峰峰顺序：极性大的先出峰，极性小的后出峰。顺序：极性大的先出峰，极性小的后出峰。)l正正相相 (极极性性：硅硅胶胶)主主要要用用于于分分离离溶溶于于有有机机溶溶剂剂的的极极性性至至中中等等极极性性的的分分子子型型化化合合物物(极极性性：固固定定相相 流动相流动相)l离子交换离子交换l分子排阻分子排阻l对映异构体对映异构体21ppt课件V D 高效液相色谱法 (1)(1)色谱柱色谱柱p除除另另有有规规定定外外，普普通通分分析析柱柱的的填填充充剂剂粒粒径径一一般般在在310310m m之之间间，粒粒径径更更小小(约约2 2m)m)的的填填充充剂剂常常用用于填装微径柱于填装微径柱(内径约内径约2mm)2mm)。p使使用用微微径径柱柱时时，输输液液泵泵的的性性能能、进进样样体体积积、检检测测池池体体积积和和系系统统的的死死体体积积等等必必须须与与之之匹匹配配；如如有有必必要要，色色谱谱条条件件也也需需作作适适当当的的调调整整。当当对对其其测测定定结结果果产产生生争争议议时时，应应以以品品种种项项下下规规定定的的色色谱条件的测定结果为准。谱条件的测定结果为准。22ppt课件V D 高效液相色谱法 (2)(2)检测器检测器选择性选择性 紫外、荧光、电化学紫外、荧光、电化学通用型通用型 蒸发光散射、示差折光蒸发光散射、示差折光23ppt课件V D 高效液相色谱法 (3)(3)流动相流动相p反反相相色色谱谱系系统统的的流流动动相相首首选选甲甲醇醇-水水系系统统(采采用用紫紫外外末末端端波波长长检检测测时时，首首选选乙乙腈腈-水水系系统统)，如如经经使使用用不不合合适适时时，再再选选用用其其他他溶溶剂剂系系统统。应应尽尽可可能能少少用用含含有有缓缓冲冲液液的的流流动动相相，必必须须使使用用时时，应尽可能选用含较低浓度缓冲液的流动相。应尽可能选用含较低浓度缓冲液的流动相。p其其中中，调调整整流流动动相相组组分分比比例例时时，以以组组分分比比例例较较低低者者(小小于于或或等等于于50%)50%)相相对对于于自自身身的的改改变变量量不不超超过过30%30%且且相相对对于于总总量量的的改改变变量量不不超超过过10%10%为为限限，如如30%30%相相对对改改变变量量的的数数值值超超过过总总量量的的10%10%时时，则改变量以总量的则改变量以总量的10%10%为限为限 。24ppt课件V D 高效液相色谱法系统适用性试验系统适用性试验l 理论板数理论板数l 分离度分离度l 重复性重复性l 拖尾因子拖尾因子25ppt课件V D 高效液相色谱法测定法测定法l 内标法内标法l 外标法外标法l 加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法l 不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法l 面积归一化法面积归一化法26ppt课件司帕沙星P22127ppt课件消旋山莨菪碱P86628ppt课件硫酸卡那霉素P967氨基糖苷类抗生素蒸发光散射检测法29ppt课件阿米卡星P388柱前衍生化法30ppt课件V E 气相色谱法系系采采用用气气体体为为流流动动相相(载载气气)流流经经装装有有填填充充剂剂的的色色谱谱柱柱进进行行分分离离测测定定的的色色谱谱方方法法。物物质质或或其其衍衍生生物物气气化化后后，被被载载气气带带入入色色谱谱柱柱进进行行分分离离，各各组组分分先先后后进进入入检检测测器器，用用数数据据处处理理系统记录色谱信号。系统记录色谱信号。31ppt课件V E 气相色谱法l载气源载气源l进样部分进样部分l色谱柱色谱柱l柱温箱柱温箱l检测器检测器l数据处理系统数据处理系统32ppt课件V E 气相色谱法检测器检测器应用应用火火 焰焰 离离 子子 化化 检检 测测 器器（FIDFID）有机化合物有机化合物热导检测器（热导检测器（TCDTCD）无机气体、有机化合物无机气体、有机化合物氮磷检测器（氮磷检测器（NPNPD D）氮、磷化合物氮、磷化合物火焰光度检测器（火焰光度检测器（FPDFPD）硫、磷化合物硫、磷化合物电子捕获检测器（电子捕获检测器（ECDECD）卤素等化合物卤素等化合物质谱检测器质谱检测器（MSMS）结构确证结构确证33ppt课件V E 气相色谱法 各各品品种种项项下下规规定定的的色色谱谱条条件件，除除检检测测器器种种类类、固固定定液液品品种种及及特特殊殊指指定定的的色色谱谱柱柱材材料料不不得得改改变变外外，其其余余如如色色谱谱柱柱内内径径、长长度度、载载体体牌牌号号、粒粒度度、固固定定液液涂涂布布浓浓度度、载载气气流流速速、柱柱温温、进进样样量量、检检测测器器的的灵灵敏敏度度等等，均均可可适适当当改改变变，以以适适应应具具体体品品种种并并符符合合系系统统适适用用性性试试验验的的要要求求。一一般般色色谱谱图图约于约于3030分钟内记录完毕。分钟内记录完毕。34ppt课件V E 气相色谱法 测定法测定法l内标法内标法l外标法外标法l面积归一化法面积归一化法l标准溶液加入法标准溶液加入法 (当当采采用用顶顶空空进进样样时时，由由于于供供试试品品和和对对照照品品处处于于不不完完全全相相同同的的基基质质中中，故故可可采采用用标标准准溶溶液液加加入入法法以以消消除除基基质质效效应应的的影影响响；当当标标准准溶溶液液加加入入法法与与其其他他定定量量方方法法结结果果不不一一致时，应致时，应以标准加入法结果为准以标准加入法结果为准。)35ppt课件对对于于生生产产过过程程中中引引入入的的有有机机溶溶剂剂，应应在在后后续续的的生生产产环环节节予予以以有有效效去去除除。除除正正文文已已明明确确列列有有“残残留留溶溶剂剂”检检查查的的品品种种必必须须依依法法进进行行该该项项检检查查外外，其其他他未未在在“残残留留溶溶剂剂”项项下下明明确确列列出出的的有有机机溶溶剂剂与与未未在在正正文文中中列列有有此此项项检检查查的的品品种种，如如生生产产过过程程中中引引入入或或产产品品中中残残留留有有机机溶溶剂剂，均均应应按按附附录录“残残留留溶溶剂剂测测定定法法”检检查查并并应应符符合合相相应应溶溶剂剂的的限限度度规规定定。（凡例（凡例 十七）十七）V E 气相色谱法36ppt课件头孢泊肟酯P198残留溶剂37ppt课件V F 电泳法是是指指带带电电荷荷的的供供试试品品(蛋蛋白白质质、核核苷苷酸酸等等)在在惰惰性性支支持持介介质质(如如纸纸、醋醋酸酸纤纤维维素素、琼琼脂脂糖糖凝凝胶胶、聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶)中中，在在电电场场的的作作用用下下，向向其其对对应应的的电电极极方方向向按按各各自自的的速速度度进进行行泳泳动动，使使组组分分分分离离成成狭狭窄窄的的区区带带，用用适适宜宜的的检检测测方方法法记记录其电泳区带图谱并计算其含量的方法。录其电泳区带图谱并计算其含量的方法。38ppt课件V G 毛细管电泳法是是指指以以弹弹性性石石英英毛毛细细管管为为分分离离通通道道，以以高高压压直直流流电电场场为为驱驱动动力力，依依据据供供试试品品中中各各组组分分的的淌淌度度(单单位位电电场场强强度度下下的的迁迁移移速速度度)和和(或或)分分配配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。39ppt课件盐酸头孢吡肟P67140ppt课件V H 分子排阻色谱法是是根根据据待待测测组组分分的的分分子子大大小小进进行行分分离离的的一一种种液液相相色色谱谱技技术术。分分子子排排阻阻色色谱谱法法的的分分离离原原理理为凝胶色谱柱的分子筛机制。为凝胶色谱柱的分子筛机制。41ppt课件头孢拉定P19542ppt课件V J 离子色谱法系系采采用用高高压压输输液液泵泵系系统统将将规规定定的的洗洗脱脱液液泵泵入入装装有有填填充充剂剂的的色色谱谱柱柱进进行行分分离离的的色色谱谱分分析析方方法法。注注入入的的供供试试品品由由洗洗脱脱液液带带入入色色谱谱柱柱内内进进行行分分离离后后，经经过过抑抑制制器器或或衍衍生生系系统统进进入入检检测测器器，由由积积分分仪仪或或数据处理系统记录色谱信号。数据处理系统记录色谱信号。43ppt课件一、离子色谱的基本原理一、离子色谱的基本原理4444生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下44ppt课件4545生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下45ppt课件一、离子色谱技术的基本原理一、离子色谱技术的基本原理4646生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下46ppt课件淋洗液在线发生器不用化学试剂，只用水（RFICRFIC）1.环保：不直接接触化学试剂2.使用方便：只用水和鼠标，省时省力3.3.重现性好：消除试剂杂质的干扰、配制溶液的误差和操作误差，结果更可靠。4.4.增加ICIC的应用效能，提高灵敏度和分离度，改善重现性，扩展应用，优良的不同时间和不同实验室之间的可比性。5.普通等浓度泵即可作梯度淋洗，梯度淋洗和等浓度淋洗同样简单方便，延长泵的使用寿命。4747生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下47ppt课件检测方式p电导检测具有电导性化合物的通用型检测器离子色谱最常用的检测器p安培法在特定的条件下可对某些化合物直接进行氧化还原反应p紫外可见光度法紫外直接吸收或可见光光度法测定选择性强可进行柱后衍生后衍生p荧光法HPLCp质谱4848生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下48ppt课件一、离子色谱技术的基本原理一、离子色谱技术的基本原理4949生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下49ppt课件一、离子色谱技术的基本原理一、离子色谱技术的基本原理5050生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下50ppt课件一、离子色谱技术的基本原理一、离子色谱技术的基本原理5151生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下51ppt课件样品的前处理p0.22，0.45um滤膜去除颗粒状杂质pC18预处理小柱、On-Guard RP柱去除有机分子p石墨化碳黑柱去除色素pOn-Guard P柱去除土壤中腐殖酸、苯环类的化合物pOn-Guard H、Na柱去除溶液中的金属离子pOn-Guard Ag柱去除溶液中的Cl-离子，主要测定高氯（海水）物质中的NO2-，NO3-等离子p在线离线除糖氨基酸样品分析时，除去糖对氨基酸检测时的干扰5252生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下52ppt课件离子色谱法应用 5353生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下53ppt课件三、离子色谱在药品分析中的应用三、离子色谱在药品分析中的应用5454生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下54ppt课件三、离子色谱在药品分析中的应用三、离子色谱在药品分析中的应用5555生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下55ppt课件三、离子色谱在药品分析中的应用三、离子色谱在药品分析中的应用5656生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下56ppt课件三、离子色谱在药品分析中的应用5757生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下57ppt课件三、离子色谱在药品分析中的应用三、离子色谱在药品分析中的应用5858生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下58ppt课件5959生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下帕米膦酸二钠注射液59ppt课件三、离子色谱在药品分析中的应用三、离子色谱在药品分析中的应用6060生命至上生命至上生命至上生命至上 技泽天下技泽天下技泽天下技泽天下60ppt课件61ppt课件