细菌的人工培养课件

细菌的人工培养细菌的人工培养细菌培养基种类和制备培养基培养基培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。物的营养基质。培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理；常规高压蒸汽灭菌：常规高压蒸汽灭菌：1.05kg/cm2,121.315-30分钟；分钟；0.56kg/cm2,112.615-30分钟分钟按按物物理理状状态态不不同同划划分分solid medium固体培养基固体培养基liquid medium液体培养基液体培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般使其成为固体状态，琼脂含量一般为为1.5%-2.0%1.5%-2.0%琼脂含量一般为琼脂含量一般为0.2%-0.7%不加不加任何任何凝固剂凝固剂semisolid medium半固体培养基半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分离、固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏鉴定、活菌计数及菌种保藏 观察微生物的运动特征、分类鉴定观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定及噬菌体效价滴定 大规模工业生产及在实验室进行微大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究生物的基础理论和应用方面的研究 按按用用途途不不同同划划分分基础培养基基础培养基鉴别培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基的基本营养物质的培养基用来将某种或某类微生物从混杂的微生用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基物群体中分离出来的培养基用于鉴别不同类型微生物的培养基用于鉴别不同类型微生物的培养基选择培养基选择培养基在基础培养基中加入某些特殊营养物在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基质制成的一类营养丰富的培养基微生物产生某种代谢产物，与培养基中微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化产生明显的特征变化牛肉膏蛋白胨培养基是最常用牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的基础培养基的基础培养基加富培养基加富培养基特殊营养物质包括血液、血清、酵母特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等浸膏、动植物组织液等在培养基中加入相应的特殊营养物质或在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长有利于所需微生物的生长临床常用的培养基临床常用的培养基n n基础培养基：肉汤，普通琼脂平板n n营养培养基：血液琼脂培养基，巧克力血培养基血液琼脂培养基，巧克力血培养基n n选择培养基：SS琼脂培养基琼脂培养基n n鉴别培养基：EMB琼脂培养基琼脂培养基n n特殊培养基：厌氧培养基细菌接种细菌接种分离培养分离培养Lag PhaseStationary PhaseDeath PhaseLogarithmic growth phase细菌在培养基中生长现象细菌在培养基中生长现象n n固体培养基：菌落colony平板接种平板接种杂菌污染杂菌污染巧巧克克力力平平板板鉴别及选择培养基鉴别及选择培养基n nEMBEMB琼脂平板上大肠菌琼脂平板上大肠菌菌落具有金属光泽菌落具有金属光泽n nSSSS琼脂平板上大肠菌为琼脂平板上大肠菌为粉红菌落粉红菌落n n半固体培养基观察细菌动力无动力无动力 有动力有动力细菌在液体培养基中生长现象细菌在液体培养基中生长现象表表面面生生长长 沉沉淀淀生生长长 混混浊浊生生长长 斜面接种斜面接种纯培养纯培养双糖铁培养基培养结果双糖铁培养基培养结果n nH2SH2Sn nTriple Sugar Iron agar slant(TSI slant)Triple Sugar Iron agar slant(TSI slant)UseUse:Forthe:ForthedifferentiationofmembersofthedifferentiationofmembersoftheEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaebaseontheirbaseontheirfermentationoflactose,sucroseandglucoseandtheproductionoffermentationoflactose,sucroseandglucoseandtheproductionofH2S.H2S.n nControl organismsControl organisms:EscherichiacoliEscherichiacoli:A/A(G):A/A(G)ShigellaShigella flexneriflexneri:K/A:K/AProteusProteusvugarisvugaris:K/A,H2S:K/A,H2SPseudomonasPseudomonasaeruginosaaeruginosa:K/N:K/Nn nIncubateIncubate:Aerobic35C,24hrs:Aerobic35C,24hrsShelf lifeShelf life:8weeks:8weeksPrice(Baht)Price(Baht):5(returntube):5(returntube)Lowenstein-JensenMediumn n结核分枝杆菌菌落颗粒状粗糙,干燥尿素酶琼脂斜面尿素酶琼脂斜面positiveKlebsiella pneumoniaeProteus mirabilisnegativeEscherichia colin n n nMacConkeyMacConkey agar plate(MC)agar plate(MC)n nUseUse:Fortheselectiveisolation,cultivationanddifferentiationof:Fortheselectiveisolation,cultivationanddifferentiationofcoliformsandcoliformsand entericpathogensbasedontheabilitytofermentlactose.Lactoseentericpathogensbasedontheabilitytofermentlactose.Lactosefermeningfermening organismsappearasredtopinkcolonies.Lactose-organismsappearasredtopinkcolonies.Lactose-nonfermentingnonfermentingorganismsorganismsappearascolorlessortransparentcoloniesappearascolorlessortransparentcoloniesn nControl organismsControl organisms:EscherichiacoliEscherichiacoli:Pinkcolonies(lactosefermentation):Pinkcolonies(lactosefermentation)ProteusmirabilisProteusmirabilis:Colorlesscolonies,nospreading:Colorlesscolonies,nospreadingEnterococcusEnterococcussp.:Nogrowthsp.:Nogrowthn nIncubateIncubate:Aerobic,35C,24hrs.:Aerobic,35C,24hrs.Shelf life Shelf life:4weeks:4weeksPrice(Baht)Price(Baht):12(returnplate),15(disposableplate):12(returnplate),15(disposableplate)人工培养细菌的意义人工培养细菌的意义n n在医学中的应用：在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。诊断；细菌鉴定；生物制品。诊断；细菌鉴定；生物制品。诊断；细菌鉴定；生物制品。n n在工农业生产中的应用在工农业生产中的应用 ：n n在基因工程中的应用在基因工程中的应用手指消毒前后细菌检测手指消毒前后细菌检测飞沫中细菌检查飞沫中细菌检查紫外线杀菌作用紫外线杀菌作用滤过除菌法滤过除菌法 Filtrationvv赛氏滤器赛氏滤器赛氏滤器赛氏滤器vv薄膜滤器薄膜滤器薄膜滤器薄膜滤器分枝杆菌染色n n示范n n结核分枝杆菌：抗酸染色法结核分枝杆菌：抗酸染色法n n操作n n病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法 结核分枝菌细胞壁结构结核分枝菌细胞壁结构甘露磷酸肌醇甘露磷酸肌醇脂阿拉伯甘露聚糖实验过程实验过程取痰液涂片（略厚）干燥固定石炭酸复红染色810分钟后用3%的盐酸酒精脱色约12分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止水洗后，用碱性美蓝复染1分钟水洗，印干镜检抗酸染色法抗酸染色法(acid-fast stain)过程：过程：n n取痰液涂片（略厚）涂片（略厚）干燥固定以5石炭酸复红染色810分钟后用3%的盐酸酒精脱色约12分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止水洗后，用碱性美蓝复染1分钟水洗，印干镜检n n分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)。形态：形态：细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。染色性：染色性：不易着色，齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质蓝色。结核分枝杆菌结核分枝杆菌(M.tuberculosis)n nKovacsKovacs reagent reagent UseUse:Fordeterminationofbacteriathatpossesthe:Fordeterminationofbacteriathatpossestheenzymeenzymetryptophanasetryptophanasearecapableofcleavingarecapableofcleavingtryptophantryptophan,thereby,therebyproducingproducingindoleindole,pyruvicpyruvicacidandammonia.acidandammonia.IndoleIndolecanbecanbedetectedindetectedintryptophantryptophanmediumbyobservingthedevelopmentofmediumbyobservingthedevelopmentofredcolorafteraddingasolutioncontainingredcolorafteraddingasolutioncontainingp-dimethylamino-p-dimethylamino-benzaldehydebenzaldehyde.(.(KovacsKovacsreagent)reagent)n nControl organismsControl organisms:EscherichiacoliEscherichiacoli:Red(:Red(IndoleIndolepositive)positive)KlebsiellaKlebsiella sp.:remainedyellow(sp.:remainedyellow(IndoleIndolenegative)negative)n nShelf lifeShelf life:1year:1yearPrice(Baht)Price(Baht):400per100ml:400per100ml