自体细胞免疫治疗进展课件

自体细胞生物免疫治疗自体细胞生物免疫治疗在临床上的应用在临床上的应用 赣州市肿瘤医院内科 刘 轩.7/19/20241 细胞免疫治疗细胞免疫治疗肿瘤生物免疫治疗 定义、发展历史、组成肿瘤生物免疫治疗的特点国内外研究现状细胞过继免疫治疗 定义、发展历史DC-CIK治疗各种肿瘤生物治疗的展望.7/19/20242肿瘤生物免疫治疗发展历史肿瘤生物免疫治疗发展历史肿瘤生物免疫治疗概念于1953年首次提出。1975年NCI提出生物应答调节剂（BRM）概念。由于BRM不能被临床医生接受，或者BRM 没有确切表达此疗法特点等原因，BRM逐渐被生物治疗所取代。国内经历了对肿瘤生物治疗从认识到狂热推广，形成LAK，TIL浪潮，细胞因子热，树突状细胞疫苗热及治疗风之后，发展到DC/CIK细胞治疗，逐渐到理性规范化和深入研究阶段。2014年CSCO对肿瘤免疫治疗重点关注。抗PD-1、PDL-1,伊匹单抗等药物通过对T淋巴细胞的重激活达到抗肿瘤效果，对脑胶质瘤、恶性黑色素瘤等很多肿瘤取得了良好效果。两条腿走路？.7/19/20243肿瘤生物治疗三大里程碑肿瘤生物治疗三大里程碑生物应答调节剂的提出与过继细胞治疗方法的应用肿瘤抗原肽疫苗的发现基因治疗方案的确定.7/19/20244细胞免疫治疗定义细胞免疫治疗定义 肿瘤细胞免疫治疗是指根据非正常细胞免疫学原理，诱发人体自身产生大量具备免疫杀伤作用的特异性细胞毒T淋巴细胞，对肿瘤细胞进行精确性、特异性、靶向性、主动式攻击，杀灭体内的肿瘤细胞。2000年在美国举行的“国际肿瘤生物和免疫治疗年会”的总结报告指出：”生物治疗是目前医疗界已知的唯一一种有生物治疗是目前医疗界已知的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段，望完全消灭癌细胞的治疗手段，21世纪是肿瘤生物治疗世世纪是肿瘤生物治疗世纪纪“.7/19/20245目前肿瘤三大常规治疗的局限性目前肿瘤三大常规治疗的局限性.7/19/20246生物治疗生物治疗化化疗放放疗手手术肿瘤瘤综合治合治疗第四大肿瘤治疗模式第四大肿瘤治疗模式作为第三代生物治疗作为第三代生物治疗技术，技术，CIK/DCCIK/DC免疫治免疫治疗由于其明确的治疗疗由于其明确的治疗优势已成为继手术、优势已成为继手术、放疗、化疗之后的第放疗、化疗之后的第四大肿瘤治疗模式。四大肿瘤治疗模式。肿瘤瘤综合治合治疗.7/19/20247肿瘤细胞免疫治疗特点肿瘤细胞免疫治疗特点增强机体抗肿瘤免疫促进机体造血功能诱导肿瘤细胞凋亡利用药物前体转化酶，增强肿瘤细胞药物敏感性，降低化疗全身毒副作用抑制肿瘤血管的形成.7/19/20248过继细胞免疫历史过继细胞免疫历史1982年，Rosenberg等提出淋巴细胞因子诱导的杀伤细胞概念，并对LAK细胞临床应用进行了深入的探讨：杀伤力不够，需要细胞数量多（3X1010-11），由于扩增能力有限，需要在输注细胞的同时，大剂量应用IL-2，产生了不良反应：顽固性体液储留Rosenberg提出肿瘤侵润淋巴细胞（TIL），其肿瘤杀伤力较LAK有了明显的提高，并且无需大剂量IL-2的联合应用，但细胞获取的问题限制了TIL的应用。1989年一个研究小组，用CD3单抗扩增小鼠脾细胞获得一个细胞群，命名为CD3激活的杀伤细胞（CD3-AK)，并且在体外显示出较LAK更高的杀伤力。1991年Stanford大学骨髓移植中心的Schmidt-Wolf等以IFN-r,IL-1,IL-2,CD3-mb共培养PBMC，得到了一个强大抗肿瘤活性的细胞群，命名为细胞因子诱导的杀伤细胞，其达到近似疗效所需的细胞数较之LAK细胞小1个数量级，而且体内应用时无需联合使用重组IL-2，因此CIK细胞的临床应用前景备受瞩目。.7/19/20249细胞过继免疫治疗细胞过继免疫治疗 是指向肿瘤患者输注具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤细胞或激发机体免疫反应来杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的1.自然杀伤细胞(nature killer cells,NK)2.淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine-activated killer cells,LAK)3.肿瘤侵润淋巴细胞(tumor infiltrating cells,TIL)4.CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3 antibody-activated killer cell,CD3-AK)5.细胞因子诱导的杀伤细胞(cytocine induced killer cells,CIK)6.数突状细胞（dentritic cell,DC).7/19/202410CIK是一群异质性细胞群，多数带有T细胞特征，部分带有NK细胞特征，88%的CD56+细胞共表的CD3+，效应细胞是CD3+CD56+；未经培养的PBMC中，CD3+CD56+的比例是1-5%。培养后，它的绝对和相对数量明显增加（细胞数量扩大1000倍，群体中的比例扩大10倍）；实验证明，CD3+CD56+主要来源于PBMC中的T细胞（CD3+CD56-），而非NK细胞（CD3-CD56+）。.7/19/202411通过表面通过表面CD3受体结合而被激活，导致胞浆毒性颗粒释放而产受体结合而被激活，导致胞浆毒性颗粒释放而产生溶瘤作用生溶瘤作用CIK细胞被激活后，分泌细胞因子实现对肿瘤细胞的抑制或杀细胞被激活后，分泌细胞因子实现对肿瘤细胞的抑制或杀伤作用伤作用通过通过LFA-1/I-CAM-1系统与靶细胞结合实行非系统与靶细胞结合实行非MHC限制性杀限制性杀伤伤通过释放颗粒酶和穿孔素对靶细胞实行非通过释放颗粒酶和穿孔素对靶细胞实行非MHC限制性杀伤限制性杀伤CIKCIK细胞抗肿瘤机制细胞抗肿瘤机制直接杀伤直接杀伤间接杀伤间接杀伤通过激活通过激活Fas-FasL系统，诱导肿瘤细胞凋亡。系统，诱导肿瘤细胞凋亡。诱导肿瘤细胞凋亡诱导肿瘤细胞凋亡CIK细胞分泌的细胞因子能显著刺激初始型细胞分泌的细胞因子能显著刺激初始型T细胞增殖，细胞增殖，有效激活机体的免疫系统，提高病人自身抗肿瘤的能力。有效激活机体的免疫系统，提高病人自身抗肿瘤的能力。激活机体免疫系统激活机体免疫系统 .7/19/202412.7/19/202413CIKCIK细胞杀伤肿瘤细胞电镜照片细胞杀伤肿瘤细胞电镜照片CIK细胞粘附到癌细胞细胞膜上攻击癌细胞，使其细胞膜破裂，最终癌细胞碎解.7/19/202414CIKCIK细胞抗肿瘤的优势细胞抗肿瘤的优势增殖速度快，主要效应细胞CD3+CD56+细胞的增殖可达1000倍。杀瘤活性高：其杀伤活性远高于其它细胞疗法，如：LAK。杀瘤谱广：CIK细胞对消化道肿瘤、肺癌、肾癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、肝癌、白血病等均表现出强大的杀伤活性。对耐药肿瘤同样可以起到杀伤的作用。杀瘤活性不受某些免疫抑制剂的影响（如环孢素A（CSA）和FK506）。能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡。对正常骨髓造血前体细胞毒性很小。.7/19/202415CIKCIK细胞回输前后患者外周血效应细胞亚群的变化细胞回输前后患者外周血效应细胞亚群的变化 CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD3+CD56+回输前 73.13.4 36.43.1 34.55.2 6.52.0 10.83.6回输后 76.28.5 38.2.49.8 40.09.8 20.17.2 15.74.9摘自：解放军医学杂志摘自：解放军医学杂志20042004年年4 4月月2929卷第卷第4 4期，自体期，自体CIKCIK细细胞治疗肝癌的安全性和有效性评价。（施明等）胞治疗肝癌的安全性和有效性评价。（施明等）.7/19/202416临床有效性的研究临床有效性的研究1、2000年YamazakiT 等人在柳叶刀杂志报道了CIK预防肝癌根治性肿瘤切除术后复发的随机对比临床研究。统计显示，经过CIK治疗的病人肝癌复发的危险降低了41%，3年无复发率为48%(对照组：33%)。2、天津医科大学附属肿瘤医院任秀宝等应用DC-CIK治疗非小细胞肺癌并进行了3年临床研究。术后42例生物治疗+化疗组与同期42例常规化疗对照组对比2年总生存率显著提高94.7，对照组为78.8%7.0%（P0.05)。3、上海第二军医大曹雪涛、万涛教授等2008年完成了150例转移性晚期大肠癌应用肿瘤抗原负载DC细胞治疗的临床研究，研究结果CR+PR达到46.2%，显著高于随机对照化疗组22.5%。4、苏州大学附属第三医院蒋敬庭等进行CIK治疗29例老年人中晚期胃癌患者副反应分析。结果回输患者PR8例，MR9例，SD7例，PD5例，总缓解率58.6%5、广州中山大学附属第三医院司徒杰等报道了9例肾癌患者CIK治疗的情况。应用CIK治疗后，肾癌患者体内的T细胞亚群比例有治疗前的抑制状态恢复到正常比例，患者随访最长4年均无复发及转移。.7/19/202417经肝动脉栓塞化疗序贯联合射频消融和细胞因子诱导的杀伤细经肝动脉栓塞化疗序贯联合射频消融和细胞因子诱导的杀伤细胞治疗肝细胞癌的随机研究胞治疗肝细胞癌的随机研究中山大学肿瘤医院影像介入中心，华南肿瘤学国家重点实验室赵明、吴沛宏、曾益新等中山大学肿瘤医院影像介入中心，华南肿瘤学国家重点实验室赵明、吴沛宏、曾益新等目的：目的：随机对照研究一组原发性肝癌病例治疗对照组：肝动脉栓塞化疗（TACE）序贯联合CT导向下射频消融（RFA）研究组：肝动脉栓塞化疗（TACE）序贯联合CT导向下射频消融（RFA）+CIK评价两种方法在原发性肝癌治疗中的疗效和抗病毒作用方法：64例原发性肝癌患者经TACE序贯联合RFA治疗后68周，经临床评价无明确残留病变后分组l研究组：33例首先连续完成4次CIK细胞经静脉/肝动脉回输，每次间隔时间为13周；再每4周1次，共行4次CIK细胞经静脉/肝动脉回输随访1年以上并每12个月评价肿瘤情况l对照组：31例出院每12月评价肿瘤情况，随访1年以上结果结果：2组病例1年生存期均达到100%。随访6个月，1年无瘤生存率两组差异无统计学意义。HBV-DNA含量在治疗前后两组差异有统计学意义P0.01。中华医学杂志2006年7月，第86卷，第26期.7/19/2024181010106 6/L/LP0.01治疗前治疗前治疗后治疗后治疗前治疗前治疗后治疗后对照（对照（A）组）组治疗（治疗（B）组）组人人数数中华医学杂志2006年7月，第86卷，第26期患者治疗前后血清患者治疗前后血清HBV DNA含量变化含量变化.7/19/202419提高提高急性白血病患者急性白血病患者完全缓解病人的完全缓解病人的 无病生存期无病生存期 陆道培教授领导的研究小组用自体CIK或自体DC-CIK治 疗 了 111例 经 化 疗 或（和）自 体 造 血 干 细 胞 移 植（ASCT）治疗后完全缓解（CR）的急性白血病患者。96例CR患者再接受CIK或DC-CIK治疗后，5年无病生存率（DFS）为66%，明显高于在该医院接受单纯化疗或ASCT治疗的患者。1415例残留的白血病染色体和（或）基因标志均转阴。无一例发生严重不良反应。主要不良反应为畏寒、寒战、发热、疲乏，均在24小时内消失。.7/19/202420Figure 1 Survival rates of patients after cytokine-induced killer cells immunotherapy pluschemotherapyandchemotherapyalone.CIK:Cytokineinducedkiller.CIK治疗胃癌频率与疗效IncreasingthefrequencyofCIKcellsadoptiveimmunotherapymaydecreaseriskofdeathingastriccancerpatients(156例)Jing-TingJiang,.Xue-GuangZhang苏州大学WorldJGastroenterol2010December28;16(48):6155-6162.7/19/202421肿瘤综合基础优化治疗一线选择！肿瘤综合基础优化治疗一线选择！CIK/DCCIK/DC免疫治疗与三大常规治疗方法的对比优势免疫治疗与三大常规治疗方法的对比优势.7/19/202422联合治疗方案联合治疗方案联合治疗的意义联合治疗的意义术后后+CIK/DCl快速恢复手快速恢复手术造成的免疫造成的免疫损伤；l特异性清除特异性清除术后微小残余后微小残余肿瘤病灶，防治瘤病灶，防治转移与复移与复发；l增增强强对化化疗药物敏感性，减少放物敏感性，减少放疗毒副作用；毒副作用；l增增强强放放疗敏感性，减少放敏感性，减少放疗毒副作用；毒副作用；l抵抗化抵抗化疗药物的免疫抑制作用；物的免疫抑制作用；l支持骨髓功能衰竭后的免疫重建；支持骨髓功能衰竭后的免疫重建；放放疗+CIK/DC化化疗+CIK/DC常常规治治疗无效无效CIK/DC单用用 u直接直接杀伤肿瘤瘤细胞；胞；u活化后活化后产生大量炎性生大量炎性细胞抑制瘤、胞抑制瘤、杀瘤；瘤；u诱导肿瘤瘤细胞凋亡；胞凋亡；u促促进T细胞增殖活化；胞增殖活化；u提高机体免疫力；提高机体免疫力；CIK/DCCIK/DC联合治疗联合治疗方案方案.7/19/202423DC/CIK细胞细胞DC和CIK是肿瘤免疫治疗的两个重要部分，前者DC(树突状细胞)识别抗原、激活获得性免疫系统，后者CIK(细胞因子活化杀伤细胞)通过发挥自身细胞毒性和分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞，二者联合确保了一个高效和谐的免疫体系。两者联合可以显著抑制肿瘤细胞的生长、增殖，帮助机体恢复同肿瘤细胞作斗争的能力，最大限度地调动人体的免疫功能，尽可能减少体内残存肿瘤细胞的数量，明显改善患者的生活质量，有效提高肿瘤患者的生存期，是一种更先进、更有效的治疗手段。.7/19/202424DC/CIK细胞治疗原理细胞治疗原理生物DC-CIK细胞治疗，是在体外培养造血干细胞，诱导其分化为树突状细胞（DC），再用经抗原刺激的树突状细胞（DC）诱导CIK细胞产生特异性肿瘤杀伤作用的治疗技术。即将树突状细胞（DC）与CIK细胞进行共同培养而成的杀伤性细胞群体（DC-CIK），使其抗肿瘤的活性大大提高后，再把这些本来就来源于病人自身并在体外激活了的抗肿瘤细胞回输到病人体内，让这支经过特殊训练的“特种部队”去杀灭肿瘤细胞 .7/19/202425DC/CIK细胞治疗特点细胞治疗特点1、DC-CIK细胞增殖能力强，保证充足数量的肿瘤杀伤细胞，且细胞杀伤活性也大大增强。研究证实CD3单克隆抗体诱导激活的T淋巴细胞在体外可克隆扩增5104倍，且在体外培养能保持活跃的生长态势达4周之久。正常的CIK细胞经过体外培养可回输给患者有效细胞数量是11010。2、DC-CIK具有识别肿瘤的机制，对正常的细胞无毒性作用，对正常骨髓造血前体细胞没有毒性。3、抗瘤谱广，对绝大多数肿瘤均有杀伤作用。4、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感，肿瘤杀伤活性不受环孢菌素A（CsA）、他克莫司（FK506）等免疫抑制剂的影响。5、是典型的个体化生物治疗模式。将DC-CIK细胞回输后，既能直接杀伤肿瘤细胞，又能使机体免疫能力提高，产生特异的抗肿瘤作用，从而对肿瘤治疗施以双重作用。6、由于DC-CIK细胞是活化的自体细胞，应用起来非常安全.7/19/202426DC/CIK细胞治疗适应症细胞治疗适应症由于DC-CIK细胞对绝大多数肿瘤均有杀伤作用，在多种肿瘤的治疗中展示了应用前景。如各种肉瘤、黑色素瘤、恶性淋巴瘤、肾癌、非霍奇金氏淋巴瘤及高分化腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、消化道肿瘤（胃癌、结肠癌、食道癌）、胰腺癌、喉癌、头颈部肿瘤、淋巴瘤（T细胞淋巴瘤除外）、白血病、多发性骨髓瘤等。有些肿瘤，如各种肉瘤、黑色素瘤、肾癌等对化疗不敏感，因此DC-CIK细胞治疗是其主要治疗方式。.7/19/202427DC/CIK细胞治疗禁忌症细胞治疗禁忌症孕妇或正在哺乳的妇女T细胞淋巴瘤患者不可控制的严重感染患者对IL-2等生物制品过敏的患者艾滋病患者正在进行全身放疗、化疗的患者晚期肿瘤造成的恶病质、外周血象过低者.7/19/202428治疗过程治疗过程采集外周血50-80ml或是血细胞分离机采集单个核细胞；实验室培养、诱导、激活；DC细胞：第7天多点皮内或静脉注射；CIK细胞：第910天静脉回输。整个疗程10天左右。.7/19/202429 回输图示.7/19/202430CIK/DCCIK/DC细胞治疗流程细胞治疗流程第一步：外周血细胞采集第二步：CIK/DC诱导第三步：抗原负载/扩增第四步：CIK/DC回输.7/19/202431CIK/DC细胞治疗流程细胞治疗流程.7/19/202432质量控制质量控制外周血培养前进行无菌培养；回输前48小时进行无菌培养；回输细胞活性和免疫活性检测；细胞活性95%免疫活性20%DC细胞，CD86+85%、HLA-DR+85%CIK细胞，CD3+CD56+20%.7/19/202433不良反应不良反应与手术、放疗、化疗相比，生物治疗的特点之一是副作用小。DC-CIK最常见的副作用是发热，多数可自行缓解，也可给予解热镇痛药推人。目前认为生物治疗中患者中毒发热时机体免疫功能正常感应的结果，该反应对治疗有益。少数有胸闷、恶心，未见肝肾功能衰竭等个体反应.7/19/202434治疗费用治疗费用整个治疗费用均纳入农医保每个疗程大约2万,第三个月一次 .7/19/202435展望展望-1综合治疗：肿瘤的发生和发展是一个多基因、多阶段、多因素和多途径的复杂过程。肿瘤的预防和治疗同样也涉及多学科、多手段，最终解决只有依靠多个学科，多种技术所形成的总体优势和合力才能解决。细胞过继免疫治疗作为一种新的治疗手段，治疗方案和标准，尚待进一步规范和统一，完整作用机制、最好的给药方式、最佳的应用时机等问题有待进一步探讨。.7/19/202436展望展望-2毫无疑问，细胞过继免疫治疗与手术、化疗、放疗、甚至中药治疗有机的结合、合理安排将给肿瘤治疗带来曙光。细胞治疗必将成为肿瘤治疗中最有潜力的发展方向，如何通过DC/CIK治疗和其它手段结合，提高治疗效果和改善生存质量，无疑将有助于更好的发挥细胞治疗的作用，推动细胞治疗的健康有序发展。基因工程改造的肿瘤识别性基因工程改造的肿瘤识别性基因工程改造的肿瘤识别性基因工程改造的肿瘤识别性T T细胞细胞细胞细胞 表达嵌合抗原受体表达嵌合抗原受体表达嵌合抗原受体表达嵌合抗原受体(CAR)T(CAR)T细胞过继免疫研究细胞过继免疫研究细胞过继免疫研究细胞过继免疫研究。.7/19/202437.7/19/202438