氧化还原滴定法基本原理课件

第四章第四章 药典中常见定量药典中常见定量分析方法概述分析方法概述第四章药典中常见定量分析方法概述1 1药物的定量分析药物的定量分析n n准确测定药品有效成分或指标性成分的含准确测定药品有效成分或指标性成分的含量，是评价药品质量、判断药物优劣的重量，是评价药品质量、判断药物优劣的重要手段。要手段。n n分类：化学分析法分类：化学分析法 仪器分析法仪器分析法重量分析重量分析滴定分析滴定分析色谱法色谱法分光光度法分光光度法电化学分析电化学分析药物的定量分析准确测定药品有效成分或指标性成分的含量，是评价2 2第一节第一节 化学分析法化学分析法一、重量分析法一、重量分析法基本原理：以质量为测定值的定量分析方法基本原理：以质量为测定值的定量分析方法应用：挥发法应用：挥发法 萃取法萃取法 沉淀法沉淀法第一节化学分析法一、重量分析法3 3第一节第一节 化学分析法化学分析法二、酸碱滴定法二、酸碱滴定法基本原理：以酸、碱中和反应为基础的滴定基本原理：以酸、碱中和反应为基础的滴定分析法分析法应用：直接滴定法应用：直接滴定法 剩余滴定法剩余滴定法第一节化学分析法二、酸碱滴定法4 4第一节第一节 化学分析法化学分析法三、氧化还原滴定法三、氧化还原滴定法基本原理：以氧化还原反应为基础的滴定分基本原理：以氧化还原反应为基础的滴定分析法析法应用：应用：碘量法碘量法 溴量法溴量法 铈量法铈量法 亚硝酸钠法亚硝酸钠法 高锰酸钾法高锰酸钾法 重铬酸钾法重铬酸钾法第一节化学分析法三、氧化还原滴定法5 5碘量法碘量法n n基本原理：以碘的氧化性或基本原理：以碘的氧化性或I-的还原性进行的还原性进行的氧化还原滴定分析法的氧化还原滴定分析法n n应用：直接碘量法应用：直接碘量法 间接碘量法间接碘量法n n测定范围：强氧化性和强还原性物质测定范围：强氧化性和强还原性物质剩余碘量法剩余碘量法置换碘量法置换碘量法碘量法基本原理：以碘的氧化性或I-的还原性进行的氧化还原滴定6 6溴量法溴量法n n基本原理：以溴的氧化作用和溴代作用为基本原理：以溴的氧化作用和溴代作用为基础的滴定分析法基础的滴定分析法n n溴：溴酸钾溴化钾溴：溴酸钾溴化钾n n应用：主要用来测定能和溴发生溴代反应应用：主要用来测定能和溴发生溴代反应或能被溴氧化的药物的含量或能被溴氧化的药物的含量溴量法基本原理：以溴的氧化作用和溴代作用为基础的滴定分析法7 7铈量法铈量法n n基本原理：以硫酸铈为滴定液的氧化还原基本原理：以硫酸铈为滴定液的氧化还原滴定法滴定法n n指示剂：邻二氮菲指示剂：邻二氮菲n n应用：氧化性弱于高锰酸钾，中国药典应用：氧化性弱于高锰酸钾，中国药典用来测定硝苯地平、葡萄糖酸亚铁及其用来测定硝苯地平、葡萄糖酸亚铁及其制剂、硫酸亚铁片的含量制剂、硫酸亚铁片的含量铈量法基本原理：以硫酸铈为滴定液的氧化还原滴定法8 8亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法n n基本原理：利用亚硝酸钠在盐酸存在下可与具基本原理：利用亚硝酸钠在盐酸存在下可与具有芳香第一胺的化合物发生重氮化反应，定量有芳香第一胺的化合物发生重氮化反应，定量生成重氮盐，根据滴定时消耗亚硝酸钠的量来生成重氮盐，根据滴定时消耗亚硝酸钠的量来计算药物含量的方法。计算药物含量的方法。n n应用：用来测定含有芳香第一胺或水解后能生应用：用来测定含有芳香第一胺或水解后能生成芳香第一胺的化合物成芳香第一胺的化合物n n指示终点：永停法指示终点：永停法亚硝酸钠滴定法基本原理：利用亚硝酸钠在盐酸存在下可与具有芳香9 9第一节第一节 化学分析法化学分析法四、非水溶液滴定法四、非水溶液滴定法基本原理：在非水溶剂中进行滴定的滴定分基本原理：在非水溶剂中进行滴定的滴定分析方法。析方法。应用：应用：碱量法碱量法 酸量法酸量法第一节化学分析法四、非水溶液滴定法1010第一节第一节 化学分析法化学分析法五、沉淀法五、沉淀法基本原理：以沉淀为基础的滴定分析法基本原理：以沉淀为基础的滴定分析法应用：用于无机卤化物以及能与应用：用于无机卤化物以及能与Ag或或SCN-形成沉淀的离子的测定。形成沉淀的离子的测定。银量法银量法第一节化学分析法五、沉淀法1111第一节第一节 化学分析法化学分析法六、配位滴定法六、配位滴定法基本原理：以配位反应为基础的滴定分析法基本原理：以配位反应为基础的滴定分析法配位剂：乙二胺四乙酸配位剂：乙二胺四乙酸（EDTA）应用：主要用于金属离子的测定应用：主要用于金属离子的测定第一节化学分析法六、配位滴定法1212第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法分光光度法分光光度法 通过测定物质在特定波长处或一定波通过测定物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性定量分析。进行定性定量分析。第二节紫外可见分光光度法分光光度法1313第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法一、基本原理一、基本原理 单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度成正比，即朗伯比质的浓度和液层的厚度成正比，即朗伯比尔定律尔定律第二节紫外可见分光光度法一、基本原理1414第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法Alg1/T=ECL吸收系数吸收系数E1%：当溶液浓度为：当溶液浓度为1（g/ml），），液层厚度为液层厚度为1cm时的吸光度时的吸光度A A：吸光度：吸光度：吸光度：吸光度T T：透光度：透光度：透光度：透光度C C：100ml100ml溶液中所含被测物质的重量（溶液中所含被测物质的重量（溶液中所含被测物质的重量（溶液中所含被测物质的重量（g g）L L：液层厚度（：液层厚度（：液层厚度（：液层厚度（cmcm）1cm1cm第二节紫外可见分光光度法Alg1/T=ECL1cm1515第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法二、应用及注意事项二、应用及注意事项有机化合物分子结构中含有共轭体系、有机化合物分子结构中含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外（芳香环等发色基团，均可在紫外（200400nm）或可见光区（）或可见光区（400760nm）产生）产生吸收，或在一定条件下加入显色剂或经处吸收，或在一定条件下加入显色剂或经处理显色后产生吸收理显色后产生吸收第二节紫外可见分光光度法二、应用及注意事项1616第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法二、应用及注意事项二、应用及注意事项n n除另有规定的，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空除另有规定的，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空除另有规定的，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空除另有规定的，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用白对照，采用白对照，采用白对照，采用1cm1cm的石英吸收池的石英吸收池的石英吸收池的石英吸收池n n供试品溶液的读数以在供试品溶液的读数以在供试品溶液的读数以在供试品溶液的读数以在0.30.30.70.7之间的误差较小之间的误差较小之间的误差较小之间的误差较小n n当当当当pHpH有影响时，应将供试品和对照品的有影响时，应将供试品和对照品的有影响时，应将供试品和对照品的有影响时，应将供试品和对照品的pHpH调成一致调成一致调成一致调成一致第二节紫外可见分光光度法二、应用及注意事项1717第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法二、应用及注意事项二、应用及注意事项n n对照品比较法对照品比较法n n吸收系数法吸收系数法n n计算分光光度法计算分光光度法n n比色法比色法第二节紫外可见分光光度法二、应用及注意事项1818第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法仪器的校正和检定仪器的校正和检定n n波长：汞灯，氘灯波长：汞灯，氘灯n n吸收度的准确度：可用重铬酸钾的硫酸溶吸收度的准确度：可用重铬酸钾的硫酸溶液检定液检定n n杂散光的检查：配成碘化钠或亚硝酸钠溶杂散光的检查：配成碘化钠或亚硝酸钠溶液，检查透光率液，检查透光率第二节紫外可见分光光度法仪器的校正和检定1919第二节第二节 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法对溶剂的要求对溶剂的要求n n在在在在220220240nm240nm范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过0.400.40n n在在在在241241250nm250nm范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过0.200.20n n在在在在251251300nm300nm范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过范围内，吸收度不得超过0.100.10n n在在在在300nm300nm以上时不得吸收度超过以上时不得吸收度超过以上时不得吸收度超过以上时不得吸收度超过0.050.05第二节紫外可见分光光度法对溶剂的要求2020第三节第三节 高效液相色谱高效液相色谱第三节高效液相色谱2121基本原理基本原理 采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱分析方法。剂的色谱柱进行分离测定的色谱分析方法。供试品经进样阀注入，由流动相带动通过色谱供试品经进样阀注入，由流动相带动通过色谱柱，各成分在柱内被分离后，依次通过检测器，其柱，各成分在柱内被分离后，依次通过检测器，其成分情况转变为其色谱信号情况，并由记录仪、积成分情况转变为其色谱信号情况，并由记录仪、积分仪或计算机记录、显示而作为检验成分的依据。分仪或计算机记录、显示而作为检验成分的依据。基本原理采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有2222对仪器的一般要求对仪器的一般要求n n色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 常用的填充柱为化学键合硅胶，反相系统使用常用的填充柱为化学键合硅胶，反相系统使用常用的填充柱为化学键合硅胶，反相系统使用常用的填充柱为化学键合硅胶，反相系统使用非极性填充剂，最为常用的是十八烷基键合硅胶；非极性填充剂，最为常用的是十八烷基键合硅胶；非极性填充剂，最为常用的是十八烷基键合硅胶；非极性填充剂，最为常用的是十八烷基键合硅胶；正相系统使用极性填充剂，常用的是硅胶正相系统使用极性填充剂，常用的是硅胶正相系统使用极性填充剂，常用的是硅胶正相系统使用极性填充剂，常用的是硅胶n n检测器检测器检测器检测器 常用的为紫外检测器常用的为紫外检测器常用的为紫外检测器常用的为紫外检测器n n流动相流动相流动相流动相 反相：流动相中有机溶剂不低于反相：流动相中有机溶剂不低于反相：流动相中有机溶剂不低于反相：流动相中有机溶剂不低于5%5%对仪器的一般要求色谱柱2323高效液相色谱的基本定性参数高效液相色谱的基本定性参数1、保留时间（、保留时间（tR）2、死时间（、死时间（t0）3、保留体积（、保留体积（VR）4、死体积（、死体积（V0）高效液相色谱的基本定性参数1、保留时间（tR）24245、柱效参数：、柱效参数：a.区域宽度：在一定条件下，区域宽度越区域宽度：在一定条件下，区域宽度越大（峰越胖），柱效越低。大（峰越胖），柱效越低。i)标准偏差：拐点处的峰宽之半。标准偏差：拐点处的峰宽之半。ii)半峰宽：色谱峰峰高一半处的峰宽。半峰宽：色谱峰峰高一半处的峰宽。iii)峰宽：通过色谱峰两侧的拐点作切线峰宽：通过色谱峰两侧的拐点作切线在基线上所截的距离。在基线上所截的距离。5、柱效参数：2525b.理论塔板数和理论塔板高度：理论塔板数和理论塔板高度：i)可由色谱峰的保留时间和区域宽度计算可由色谱峰的保留时间和区域宽度计算ii)理论塔板高度理论塔板高度组分的保留时间越长，组分的保留时间越长，、Wh/2、W越小，越小，则理论塔板数越大，柱效越高。则理论塔板数越大，柱效越高。n=(tR/)2=5.54(tR/Wh/2)2H=2/Lb.理论塔板数和理论塔板高度：组分的保留时间2626系统适用性试验系统适用性试验按药典各品种项下要求对仪器进行适按药典各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求或规定分试验和调整，应达到规定的要求或规定分析状态下色谱柱的析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度最小理论板数、分离度重复性和拖尾因子重复性和拖尾因子。系统适用性试验按药典各品种项下要求对仪器进行2727（1）色谱柱的理论板数（）色谱柱的理论板数（n）：）：在选定的条件下，注入供试品溶液或药典在选定的条件下，注入供试品溶液或药典各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主要成分或内标物质峰的保留时间量出供试品主要成分或内标物质峰的保留时间tR和和半峰宽，按半峰宽，按n=5.54(tR/wA/2)2计算色谱柱的理论板数。计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于药典各品种项下规定的最如果测得理论板数低于药典各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。达到要求。（1）色谱柱的理论板数（n）：2828（2）分离度：分离度：定定量量分分析析时时，为为便便于于准准确确测测量量，要要求求定定量量峰峰与与其其他他峰峰或或内内标标峰峰之之间间有有较较好好的的分分离离度度，分离度分离度R的计算公式为：的计算公式为：R=2（tR2-tR1）/(w1+w2)式中式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间为相邻两峰中后一峰的保留时间tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间为相邻两峰中前一峰的保留时间w1及及w2为相邻两峰的峰宽为相邻两峰的峰宽分离度要求：大于分离度要求：大于1.5（2）分离度：2929（3 3）重复性）重复性 取个品种项下的对照溶液，连续进样取个品种项下的对照溶液，连续进样5 5次，峰次，峰面积测量值的相对标准偏差不大于面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%2.0%也可按各品种校正因子测定项下，配制相当也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于于80%,100%80%,100%和和120%120%的对照溶液，加入规定量的内的对照溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样至标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样至少少2 2次，计算平均校正因子。其相对标准偏差应不次，计算平均校正因子。其相对标准偏差应不大于大于2.0%2.0%。（3）重复性3030（4）拖拖尾尾因因子子：为为保保证证测测量量精精度度，特特别别当当采采用用峰峰高高法法测测量量时时，应应检检查查待待测测峰峰的的拖拖尾尾因因子子（T）是是否否符符合合药药典典各各品品种种项项下下的的规规定定或或不不同同浓浓度度进进样样的的校校正正因因子子误误差差是是否否符符合要求。拖尾因子计算公式为：合要求。拖尾因子计算公式为：T=w0.05h/2d1式中式中w0.05h为为0.05峰高处的峰宽峰高处的峰宽d1为峰极大至峰前沿之间的距离为峰极大至峰前沿之间的距离除另有规定外，除另有规定外，T应在应在0.95-1.05间间（4）拖尾因子：为保证测量精度，特别当采用峰高法测3131定量分析定量分析HPLC定量分析的参数是色谱峰定量分析的参数是色谱峰高和峰面积，定量依据是高和峰面积，定量依据是样品中组分样品中组分的量与峰高或峰面积成正比的量与峰高或峰面积成正比。常用的。常用的定量方法有外标法、内标法和内加法。定量方法有外标法、内标法和内加法。1、定量分析参数的选择：峰高，峰面积、定量分析参数的选择：峰高，峰面积定量分析HPLC定量分析的参数是色谱峰高和峰32322、外标法：、外标法：用与待测组分同质的标准品作对照品，以用与待测组分同质的标准品作对照品，以对照品的量对比求算试样含量的方法。又可分对照品的量对比求算试样含量的方法。又可分为外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法。为外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法。在在HPLC中，因进样量大，且用六通阀定中，因进样量大，且用六通阀定量进样，误差相对较小，所以外标法是量进样，误差相对较小，所以外标法是HPLC常用的定量分析方法。常用的定量分析方法。a.工作曲线法：工作曲线法：用对照品配制系列浓度的对照品溶液，准用对照品配制系列浓度的对照品溶液，准确进样，测量峰面积或峰高，对浓度确进样，测量峰面积或峰高，对浓度C绘制标绘制标准曲线，利用此曲线或它的回归方程式计算样准曲线，利用此曲线或它的回归方程式计算样品溶液的含量。品溶液的含量。2、外标法：3333b.外标一点法：外标一点法：用一种浓度的对照品溶液对比求算样品含量用一种浓度的对照品溶液对比求算样品含量的方法，只有在工作曲线通过原点，即截距为零的方法，只有在工作曲线通过原点，即截距为零时，才可用外标一点法进行定量分析。时，才可用外标一点法进行定量分析。2、内标法：、内标法：选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法。内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法。内标法的关键时选择合适的内标物。内标法的关键时选择合适的内标物。b.外标一点法：3434内标物的要求：内标物的要求：1内标物应是样品中不含有的物质内标物应是样品中不含有的物质2纯度要高纯度要高3与待测组分有相似的理化性质，因而保留与待测组分有相似的理化性质，因而保留时间与待测组分接近时间与待测组分接近4与样品中各组分能完全分离且不与样品反与样品中各组分能完全分离且不与样品反应应内标法可分为工作曲线法、内标一点法、内标法可分为工作曲线法、内标一点法、内标二点法及校正因子法等。内标二点法及校正因子法等。3535使用内标的作用：使用内标的作用：可以抵消仪器稳定性差，进样量不可以抵消仪器稳定性差，进样量不够准确等原因带来的定量分析误差。如够准确等原因带来的定量分析误差。如果在样品预处理前加入内标物，则可抵果在样品预处理前加入内标物，则可抵消方法全过程引起的误差。消方法全过程引起的误差。使用内标的作用：3636Ai/As=a+bCi将与对照品溶液中相同量的内标物加至样将与对照品溶液中相同量的内标物加至样品溶液中，分别测量样品中品溶液中，分别测量样品中I组分与内标物峰组分与内标物峰面积（或峰高），以两者峰面积或峰高之比代面积（或峰高），以两者峰面积或峰高之比代入回归方程式计算出样品中入回归方程式计算出样品中i组分的含量。组分的含量。a.工作曲线法：工作曲线法：与外标法相似，只是在各种浓度的对照品与外标法相似，只是在各种浓度的对照品溶液中加入相同量的内标物。分别测量溶液中加入相同量的内标物。分别测量I组分组分与内标物与内标物S的峰面积的峰面积A（或峰高（或峰高h)，以峰面积，以峰面积比比Ai/As与与Ci绘制工作曲线，或求出回归方程绘制工作曲线，或求出回归方程式。式。Ai/As=a+bCi3737b.内标对比法：内标对比法：只配制一个浓度的对照品溶液，然后在只配制一个浓度的对照品溶液，然后在样品与对照品溶液中加入相同量的内标物，样品与对照品溶液中加入相同量的内标物，分别进样。按下式计算样品浓度。分别进样。按下式计算样品浓度。与外标法相似，只有线性关系好且截距与外标法相似，只有线性关系好且截距a为为零时才可用内标一点法定量。零时才可用内标一点法定量。(Ci)样样（Ai/As）样样（Ai/As）对对xCi对照对照b.内标对比法：与外标法相似，只有线性关系3838c.内标校正因子法：内标校正因子法：在在HPLC分析中，等量的不同物质在相同分析中，等量的不同物质在相同实验条件下，在同一检测器上的响应值经常不实验条件下，在同一检测器上的响应值经常不同，为了校正这种响应的差别，引入了校正因同，为了校正这种响应的差别，引入了校正因子的概念。子的概念。f定义为定义为：被测组分单位峰面积（或峰高）：被测组分单位峰面积（或峰高）所相当物质的量与参比物质（内标物）单位峰所相当物质的量与参比物质（内标物）单位峰面积（或峰高）所相当物质的量的比值。面积（或峰高）所相当物质的量的比值。c.内标校正因子法：39391）校正因子（）校正因子（f）=A s/m s A r/m r2）含量（）含量（m x)=f X Ax A s/m s1）校正因子（f）=As/msAr/mr24040d.内加法：内加法：将待测组分将待测组分i的纯品加至待测样品溶液中，的纯品加至待测样品溶液中，测定增加纯品后的溶液比原样品溶液中测定增加纯品后的溶液比原样品溶液中i组分的组分的峰面积增量，求算峰面积增量，求算i组分的含量。此法不需要内组分的含量。此法不需要内标物，又能克服由于进样量不准确所带来的定标物，又能克服由于进样量不准确所带来的定量分析误差。量分析误差。mi=Ai/Ai*mimi是纯物质是纯物质i的加入量，的加入量，Ai是相应增加的峰面是相应增加的峰面积积d.内加法：mi=Ai/Ai*4141梯梯度度洗洗脱脱HPLC的色谱洗脱技术有的色谱洗脱技术有等强度等强度和和梯度洗梯度洗脱脱两种两种。等强度洗脱等强度洗脱：在同一分析周期内流动相组成保持恒定，在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱4242梯度洗脱：梯度洗脱：在一个分析周期内程序控制流动相在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等。值等。分析组分数目多、性质相差较大的复杂样品时分析组分数目多、性质相差较大的复杂样品时须采用梯度洗脱技术，使所有的组分都在适宜须采用梯度洗脱技术，使所有的组分都在适宜的条件下获得分离。的条件下获得分离。优点：优点：能缩短分析时间，提高分离度、改善峰能缩短分析时间，提高分离度、改善峰形，提高检测灵敏度。形，提高检测灵敏度。缺点：缺点：常引起基线漂移和降低重现性。常引起基线漂移和降低重现性。梯度洗脱：在一个分析周期内程序控制流动相4343第四节第四节 气相色谱法气相色谱法 采用气体为流动相（载气）流经装有填充采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物汽化后，被载气带入色谱物质或其衍生物汽化后，被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，用记录柱进行分离，各组分先后进入检测器，用记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。第四节气相色谱法采用气体为流动相（载气）4444对仪器的一般要求对仪器的一般要求n n载气载气载气载气 氦气、氮气和氢气氦气、氮气和氢气氦气、氮气和氢气氦气、氮气和氢气n n进样进样进样进样 直接进样和顶空进样直接进样和顶空进样直接进样和顶空进样直接进样和顶空进样n n色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 填充柱和毛细管柱填充柱和毛细管柱填充柱和毛细管柱填充柱和毛细管柱n n检测器检测器检测器检测器 常用常用常用常用FIDFID对仪器的一般要求载气4545第五节第五节分析方法的验证分析方法的验证 1 1、准确度（、准确度（accuracyaccuracy）指分析方法所得的测定结果与真实值或参考值接近的程度。指分析方法所得的测定结果与真实值或参考值接近的程度。一般以回收率表示。一般以回收率表示。原料药可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，也可以原料药可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，也可以将验证方法的测定结果与另一已建立的准确可靠方法的测定结果将验证方法的测定结果与另一已建立的准确可靠方法的测定结果进行对比来确定。进行对比来确定。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。至少用至少用9 9个测定结果进行评价。个测定结果进行评价。第五节分析方法的验证1、准确度（accuracy）46462、精密度（、精密度（precision）指在规定的测试条件下，同一均匀样品进行多次测定，所指在规定的测试条件下，同一均匀样品进行多次测定，所得的结果彼此符合的程度。精密度通常以偏差、标准偏差或相得的结果彼此符合的程度。精密度通常以偏差、标准偏差或相对标准差（对标准差（RSD）来表示。）来表示。一个分析方法的精密度好，说明方法稳定，测定的结果重一个分析方法的精密度好，说明方法稳定，测定的结果重复性好，但方法的精密度好，准确度不一定高。复性好，但方法的精密度好，准确度不一定高。重复性重复性：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度。密度。中间精密度中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度。同设备测定结果之间的精密度。重现性重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。：在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。2、精密度（precision）47473、专属性（、专属性（specificity）：）：指在其它成分（如杂质、辅料等）可能存在的指在其它成分（如杂质、辅料等）可能存在的情况下，分析方法能准确地测出被测组分的能力。情况下，分析方法能准确地测出被测组分的能力。4、检测限（、检测限（limit of detection,LOD）指分析方法在规定的实验条件下所能检出被测组指分析方法在规定的实验条件下所能检出被测组分的最低量。分的最低量。非仪器分析目视法非仪器分析目视法信噪比法信噪比法3、专属性（specificity）：48485、定量限（、定量限（limitofquantitation,LOQ）指分析方法可定量测定样品中测定组分的最低量。定量指分析方法可定量测定样品中测定组分的最低量。定量限与检测限的区别在于，它所规定的最低浓度，应满足一限与检测限的区别在于，它所规定的最低浓度，应满足一定的精密度和准确度的要求。一般以信噪比定的精密度和准确度的要求。一般以信噪比10：1确定为定确定为定量限。量限。6、线性（、线性（linearity）指分析方法在一定范围内获得的检测结果和样品中测定指分析方法在一定范围内获得的检测结果和样品中测定组分的浓度成正比关系的程度。组分的浓度成正比关系的程度。5、定量限（limitofquantitation,L49497、范围（、范围（range）能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。用的高低限浓度或量的区间。8、耐用性（、耐用性（ruggedness）指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。承受程度。7、范围（range）5050同学们，下课啦！5151