药物的杂质检查详解课件

第四章第四章 药物的药物的杂质检查杂质检查第四章 药物的杂质检查1主要内容主要内容v概述（杂质定义、来源、种类、限量检查）质定义、来源、种类、限量检查）v一般杂质检查方法一般杂质检查方法v特殊杂质检查方法特殊杂质检查方法主要内容概述（杂质定义、来源、种类、限量检查）2第一节概第一节概 述述 v杂质的定义v杂质的来源杂质的来源v杂质的种类杂质的种类v杂质检查的意义杂质检查的意义v杂质限量杂质限量第一节概 述 杂质的定义3一、杂质的定义一、杂质的定义v杂质（杂质（forinforin、impuritiesimpurities）是指）是指：v1.药物中存在的无治疗作用药物中存在的无治疗作用v2.或影响药物的稳定性和疗效或影响药物的稳定性和疗效v3.甚至对人体健康有害的物质。甚至对人体健康有害的物质。一、杂质的定义杂质（forin、impurities）是指：4二、药物中杂质的来源二、药物中杂质的来源（2）试剂、溶剂、催化剂类 v1、生产过程中引入、生产过程中引入：（1）原料不纯或部分未反应完全的原料造成）原料不纯或部分未反应完全的原料造成（2）合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成）合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成（3）需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造）需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成成（4）所用金属器皿及装置等引入杂质）所用金属器皿及装置等引入杂质二、药物中杂质的来源（2）试剂、溶剂、催化剂类 1、生52 2 贮藏过程中引入贮藏过程中引入 (1)保管不善或贮存时间过长保管不善或贮存时间过长(2)包装不当包装不当2 贮藏过程中引入 (1)保管不善或贮存时间过长(26三、杂质的分类三、杂质的分类 v药物中的杂质按来源分为药物中的杂质按来源分为：v一般杂质：如氯一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。v特殊杂质：指某特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。三、杂质的分类 药物中的杂质按来源分为：7三、杂质的分类三、杂质的分类v药物中的杂质按结构分为药物中的杂质按结构分为：v无机杂质：如氯无机杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金化物、硫酸盐、铁盐、重金属等。属等。v有机杂质：有机药物中引入的原料、中间体、有机杂质：有机药物中引入的原料、中间体、副产物、分解产物，异构体和残留溶剂副产物、分解产物，异构体和残留溶剂。三、杂质的分类药物中的杂质按结构分为：8三、杂质的分类三、杂质的分类v药物中的杂质按性质分为药物中的杂质按性质分为：信号杂质：本身一般无害，但其含量的多少可信号杂质：本身一般无害，但其含量的多少可 反映出药物的纯度水平，如含量过高，表明反映出药物的纯度水平，如含量过高，表明药物的纯度差。如氯化物、硫酸盐等。药物的纯度差。如氯化物、硫酸盐等。有害杂质：如砷盐、重金属、氰化物对休体有有害杂质：如砷盐、重金属、氰化物对休体有害，在质量标准中要严格控制。害，在质量标准中要严格控制。三、杂质的分类药物中的杂质按性质分为：9试题举例试题举例v中国药典（中国药典（2010年版）中规定的一般杂质检查年版）中规定的一般杂质检查中不包括的项目是中不包括的项目是v A.硫酸盐检查硫酸盐检查v B.氯化物检查氯化物检查 v C.溶出度检查溶出度检查v D.重金属检查重金属检查v E.砷盐检查砷盐检查 试题举例中国药典（2010年版）中规定的一般杂质检查中不包括10四、杂质检查的意义四、杂质检查的意义（一）杂质是影响药物纯度的主要因素，因此（一）杂质是影响药物纯度的主要因素，因此药品纯度主要由药品质量标准中的检查相下药品纯度主要由药品质量标准中的检查相下的杂质检查来控制，包括杂质名称、检查方的杂质检查来控制，包括杂质名称、检查方法、允许限量。纯度控制又称杂质限量控制。法、允许限量。纯度控制又称杂质限量控制。（二）严格按照（二）严格按照中国药典中国药典规定的杂质检查规定的杂质检查项目进行检查，凡项目进行检查，凡中国药典中国药典未规定检查未规定检查的杂质，一般不需要检查。的杂质，一般不需要检查。（三）化学试剂不考虑生理毒副作用，不能用（三）化学试剂不考虑生理毒副作用，不能用化学制剂规格代替药用规格。化学制剂规格代替药用规格。四、杂质检查的意义（一）杂质是影响药物纯度的主要因素，因此药11药物纯度与化学试剂纯度的比较药物纯度与化学试剂纯度的比较v1、等级划分不同：药物的纯度考虑杂质的生理、等级划分不同：药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：作用，药品只有两个等级：合格或不合格。合格或不合格。v化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（）、分析纯（AR）、化学纯（）、化学纯（CP）、色）、色谱纯、光谱纯。谱纯、光谱纯。药物纯度与化学试剂纯度的比较1、等级划分不同：药物的纯度考虑12药物纯度与化学试剂纯度的比较药物纯度与化学试剂纯度的比较2、要求不同：药物纯度主要从用药安全、有效及稳定性角度考虑；化学试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用产生的影响，以及根据使用范围和使用目的来加以规定。药物纯度与化学试剂纯度的比较2、要求不同：药物纯度主要从用药13 五、杂质限量五、杂质限量v指药物中指药物中允许杂质存在的最大量允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万，通常用百分之几或百万分之几（分之几（ppmppm）来表示）来表示v限量检查法：不检查药物的绝对含量，而检查其是否超过限量检查法：不检查药物的绝对含量，而检查其是否超过限量。限量。vv杂质量杂质量杂质量杂质量 杂质限量杂质限量杂质限量杂质限量 杂质量杂质量杂质量杂质量药品合格药品合格药品合格药品合格药品不合格药品不合格药品不合格药品不合格 五、杂质限量指药物中允许杂质存在的最大量，通14杂质的限量检查v在不影响疗效和不发生毒副作用的原则下，既保证药物质量，又便于制造、贮藏和制剂生产，对于药物中可能存在的杂质，允许有一定限度。杂质的限量检查在不影响疗效和不发生毒副作用的原则下，既保证药15五、杂质限量五、杂质限量v杂质限量检查方法：1、对照法：取限量的待检杂质对照品溶液与一定量供试品溶液在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过规定。例：氯化物检查；硫酸盐；铁盐；重金属；砷盐检查等。五、杂质限量杂质限量检查方法：16平行原则v使用对照法检查药物的杂质，必须遵循平行原则：供试液和对照液应在完全相同的条件下反应，如加入的试剂、反应的温度、放置的时间等均应相同。平行原则使用对照法检查药物的杂质，必须遵循平行原则：供试液和17五、杂质限量五、杂质限量2、灵敏度法：在规定量的供试品溶液中加入试剂，在一定条件下反应，观察有无正反应出现，以不出现正反应为合格。即以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂技限量（不需对照品）。例：纯化水中的氯化物检查：在50mL纯化水中加入硝酸5滴及硝酸银试液1mL，不发生浑浊为合格。五、杂质限量2、灵敏度法：在规定量的供试品溶液中加入试剂，在18五、杂质限量五、杂质限量3、比较法：取一定量供试品，在规定条件下测定待检杂质结果（吸光度、旋光度）与规定数据（限量）比较，判断供试品中杂质限量。（不需对照品）。例：盐酸去氧肾上腺素中酮体的检查：取本品，加水制成1mL中含2.0mg的溶液，以水为空白，在310nm波长处测定吸光度，不得大于0.02。五、杂质限量3、比较法：取一定量供试品，在规定条件下测定待检19杂质限量的计算杂质限量的计算 允许杂质存在的最大量允许杂质存在的最大量v杂质限量杂质限量 供试品量供试品量杂质限量的计算 允许杂质存在的最大量20药物的杂质检查详解课件21试题举例检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为 A.0.20g B.2.0g C0.020g D.1.0g E.0.10g试题举例22已知：已知：c1 g/ml110 6 g/mlV2ml L0.0001%已知：c1 g/ml1106 g/mlV23试题检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？A.0.2ml B.0.4ml C2mlD.1ml E.20ml试题24药物的杂质检查详解课件25第二节第二节 一般杂质检查一般杂质检查v一般杂质：广泛分布于药物中的杂质。如氯化物、一般杂质：广泛分布于药物中的杂质。如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。易炭化物、炽灼残渣等。v重金属、砷盐重金属、砷盐第二节 一般杂质检查一般杂质：广泛分布于药物中的杂质。如氯26 二、重金属检查法二、重金属检查法v重金属重金属：在实验条件下：在实验条件下能与显色剂能与显色剂如如S2-作用显色的金属。作用显色的金属。如银、铅、汞、铜等。如银、铅、汞、铜等。v铅在多数药物的生产中容易积累，在体内会积蓄中毒，因铅在多数药物的生产中容易积累，在体内会积蓄中毒，因此重金属检查时常以铅为代表。此重金属检查时常以铅为代表。v中国药典（中国药典（20002000年版）共收载四法：硫代乙酰氨法、炽灼年版）共收载四法：硫代乙酰氨法、炽灼残渣法、硫化钠法、微孔滤膜法。残渣法、硫化钠法、微孔滤膜法。二、重金属检查法重金属：在271.第一法 硫代乙酰胺法（1 1）、原理）、原理 ：对照法对照法 适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。1.第一法 硫代乙酰胺法（1）、原理：对照法 适用于28 （2）.测定条件测定条件v用用硝酸铅硝酸铅配制标准铅贮备液（配制标准铅贮备液（加硝酸防止加硝酸防止Pb2+水解水解），标准），标准铅溶液临用前稀释而成，铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液标准硝酸铅溶液10 g/ml，适宜比，适宜比色范围为色范围为2ml溶液中含溶液中含1020 g的的Pb2+。v本法用本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为值为33.5。v显色剂：从显色剂：从ChP（1990）开始改用）开始改用硫代乙酰硫代乙酰胺做胺做显色剂显色剂。（2）.测定条件用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防29 （1）供试品如有色，需经处理后方可检查。）供试品如有色，需经处理后方可检查。A.外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰 的有色溶液。的有色溶液。B.内消色法：内消色法：C.改用第四法，微孔滤膜过滤法改用第四法，微孔滤膜过滤法（3）.干扰及排除干扰及排除 （1）供试品如有色，需经处理后方可检查。30（2）若若供供试试品品中中有有微微量量Fe3+存存在在，会会氧氧化化硫硫化化氢氢生生成成单单质质硫硫，干干扰扰比比色色，加加入入抗抗坏坏血血酸酸或或盐盐酸酸羟羟胺胺（0.51.0g）还还原原Fe3+为为Fe2+，可消除干扰。，可消除干扰。（3）若供试品为）若供试品为铁盐铁盐，Fe3+在在盐酸盐酸中生成中生成FeCl2，用乙醚提取除，用乙醚提取除去，剩余微量铁在氨碱性溶液中加去，剩余微量铁在氨碱性溶液中加KCN掩蔽，然后用第三法检查掩蔽，然后用第三法检查。（4）若）若药物本身能生成不溶性硫化物药物本身能生成不溶性硫化物时，可时，可加入掩蔽剂加入掩蔽剂消干扰。消干扰。如如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽掩蔽Zn2+后，依第后，依第三法检查。三法检查。（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，31 2.第三法 硫化钠法 适用于适用于溶于碱而不溶于稀酸溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。如磺胺类、巴比妥类。（1 1）.原理原理 对照法对照法 2.第三法 硫化钠法 适用于溶于碱而不溶32（2 2）.测定条件及注意事项测定条件及注意事项（1 1）碱性条件：）碱性条件：NaOH（2 2）显色剂：硫化钠）显色剂：硫化钠 注意事项：注意事项：Na2S需新鲜配制需新鲜配制（2）.测定条件及注意事项（1）碱性条件：NaOH（2）33 3.第二法 炽灼残渣法 适用于适用于含芳环、杂环含芳环、杂环以及以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱不溶于水、稀酸、乙醇及碱的的有机药物。有机药物。500500600600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。（1 1）.原理原理 对照法对照法 3.第二法 炽灼残渣法 适用于含芳环、杂环以及不34（2）.操作方法（2）.操作方法35（3）.注意事项注意事项v含钠盐或氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃含钠盐或氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）。蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）。v炽热温度影响检查结果：温度越高，重金属损失越多。炽热温度影响检查结果：温度越高，重金属损失越多。v酸溶液使用后一定要采用适当措施完全去掉，以免影响下酸溶液使用后一定要采用适当措施完全去掉，以免影响下一步操作和实验结果。一步操作和实验结果。（3）.注意事项含钠盐或氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或364.第四法 微孔滤膜法 适适用用于于重重金金属属限限量量低低的的药药物物（含含2 25 5 g g重重金金属属杂杂质质）及及有色供试液的检查。有色供试液的检查。原原理理：重重金金属属生生成成的的硫硫化化物物富富集集于于微微孔孔滤滤膜膜，比比较较色色斑斑的深浅。的深浅。装置：过滤器（装置：过滤器（p36 p36 图图3-13-1）4.第四法 微孔滤膜法 适用于重金属限量低的药物（含237 USP（24）检查重金属时，使用硫代乙酰胺（特殊情）检查重金属时，使用硫代乙酰胺（特殊情况下也采用新制饱和硫化氢试液）显色。检查时，除用供况下也采用新制饱和硫化氢试液）显色。检查时，除用供试管、对照管，还规定用监控管，三管同法检查。试管、对照管，还规定用监控管，三管同法检查。监控管的设置是防止药品中的重金属以结合态存在而无法检测。监控管的设置是防止药品中的重金属以结合态存在而无法检测。我国我国药品检验操作标准药品检验操作标准中规定，检查新产品中重中规定，检查新产品中重金属时，应用该法。金属时，应用该法。USP（24）检查重金属时，使用硫代乙酰胺（特殊情38例1：重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（）A.1.5 B.3.5 C7.5 D.9.5 E.11.5例1：重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（39例2：微孔滤膜法是用来检查（）A.氯化物 B.砷盐C.重金属 D.硫化物E.氰化物例2：微孔滤膜法是用来检查（）40例例3.中国药典(2000年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（）A.硫化氢试液 B.硫代乙酰胺试液 C.硫化钠试液 D.氰化钾试液 E.硫氰酸铵试液例3.中国药典(2000年版)重金属检查法中，所使用的显色41例4.葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（）A.用硫代乙酰胺为标准对照液B.用10ml稀硝酸酸化C.在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D.用硫化钠为试液E.结果需在黑色背景下观察结果需在黑色背景下观察例4.葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（）42例5.现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法（）A.一法B.二法C.三法D.四法E.以上都不对例5.现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国43例6.下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法（）A.500600炽灼残渣后,按一法操作 B.pH33.5条件下，加入硫化氢试液 C.碱性下，加入硫化钠试液 D.按一法操作，结果用微孔滤膜过滤后观察色斑 E.以上都对例6.下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法（44三、砷盐检查法三、砷盐检查法（一）、古蔡法（一）、古蔡法 ChP（2000）、）、BP（1998），），砷盐的砷盐的限量检查限量检查（二）、二）、Ag-DDC（二乙基二硫代氨基甲酸银）法（二乙基二硫代氨基甲酸银）法 ChP(2000)、USP（24），），检查、含量测定检查、含量测定 三、砷盐检查法（一）、古蔡法 （二）、Ag-45遇遇HgBrHgBr2 2试试纸纸生生成成黄黄色色棕棕色色的的砷砷斑斑，与与2ml2ml标标准准砷砷溶溶液液在相同条件下生成的砷斑比较。在相同条件下生成的砷斑比较。1.古蔡法 As（HgBr）3 （黄色）AsH3+HgBr2 AsH（HgBr）2（棕色）As2Hg3 （棕黑色）遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相46（2）.操作方法操作方法（1 1）标准砷斑）标准砷斑:用用2ml2ml标准砷溶液制备标准砷溶液制备 1 g As/ml（2 2）如供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作。）如供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作。（2）.操作方法（1）标准砷斑:用2ml标准砷溶液制备 147导气管导气管C装有装有醋酸铅醋酸铅棉花棉花（约（约6080mm高）高）旋塞旋塞D的顶端放有的顶端放有溴化汞溴化汞试纸。试纸。导气管C装有醋酸铅棉花（约6080mm高）483.测定条件（1 1）标准砷溶液临用新配，）标准砷溶液临用新配，1 1 g As/mlg As/ml。（2 2）酸为反应物，酸量应足够，所以加）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸浓盐酸5ml5ml。（3 3）反应中加入酸性氯化亚锡及碘化钾反应中加入酸性氯化亚锡及碘化钾，其作用是：，其作用是：(4).(4).锌粒应无砷锌粒应无砷(5).(5).砷斑不稳定，应立即观察砷斑不稳定，应立即观察3.测定条件（1）标准砷溶液临用新配，1g As/ml49A.A.还原还原AsAs5+5+为为AsAs3+3+，加快反应速度；，加快反应速度；B.B.碘化钾碘化钾被氧化生成的被氧化生成的I I2 2又可被氯化亚锡还原为又可被氯化亚锡还原为I I-，I I-与与反应中生成的反应中生成的ZnZn2+2+能形成稳定的能形成稳定的配位离子配位离子，有利于生成砷，有利于生成砷化氢的反应不断进行；化氢的反应不断进行；C.C.氯化亚锡与锌氯化亚锡与锌作用，作用，在锌表面形成锌锡齐在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连，使氢气均匀而连续地发生；续地发生；D.D.可可抑制微量抑制微量SbSb的干扰的干扰，在实验条件下，在实验条件下，100 100 gSbgSb存在存在不干扰。不干扰。A.还原As5+为As3+，加快反应速度；B.碘化钾被504.干扰及排除干扰及排除（1 1）供供试试品品若若为为硫硫化化物物、亚亚硫硫酸酸盐盐、硫硫代代硫硫酸酸盐盐时时，加加HNO3，加加热热,使使氧化成硫酸盐氧化成硫酸盐，以除去干扰，如，以除去干扰，如硫代硫酸钠硫代硫酸钠中中砷盐的检查。砷盐的检查。（2 2）供试品若为）供试品若为铁盐铁盐，需先，需先加酸性氯化亚锡加酸性氯化亚锡试液，将试液，将FeFe3+3+还原为还原为FeFe2+2+，如如枸橼酸铁铵枸橼酸铁铵中砷盐的检查。中砷盐的检查。（3 3）具）具环状结构环状结构的有机药物，要的有机药物，要先行有机破坏后先行有机破坏后再进行检查。再进行检查。（4 4）本法适用于不含）本法适用于不含SbSb或含或含SbSb量小于量小于100100 g g的供试品。的供试品。4.干扰及排除（1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐51（二）Ag-DDC法 1.原理：对照法原理：对照法（二）Ag-DDC法 1.原理：对照法52药物的杂质检查详解课件53 用用有有机机碱碱吸吸收收反反应应产产生生的的HDDCHDDC有有利利于于反反应应的的进进行行。USP（2424）用吡啶，）用吡啶，ChPChP（20002000）用）用三乙胺三乙胺。本法适用于本法适用于含含SbSb量小于量小于500500 g g的供试品。的供试品。砷化氢与砷化氢与Ag-DDC溶液作用，溶液作用，还原还原AgDDC为红色胶态为红色胶态银银，直接比色或于，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。波长处测定吸收度，进行比较。用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的54（三）白田道夫法（三）白田道夫法v含锑药物含锑药物 v锑盐被还原为锑盐被还原为SbH3与与HgBr2试纸作用，产生试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检查，可改用灰色锑斑，干扰砷斑的检查，可改用Betterdorff法。法。（三）白田道夫法含锑药物 55例1：在药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是（）A.氯化物 B.硫酸盐 C.醋酸盐 D.砷盐 E.淀粉 例1：在药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是（）56例2：在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是（）A.除去I2 B.除去AsH3 C.除去H2S D.除去HBr E.除去SbH3例2：在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是57例3：古蔡氏法中，SnC12的作用有（）A.使As5+As3+B.除去H2SC.除去I2 D.组成锌锡齐E.除去其它杂质 例3：古蔡氏法中，SnC12的作用有（）58例4：中国药典（1995年版）收载的古蔡法检查砷盐的基本原理是（）A.与锌、酸作用生成H2S气体 B.与锌、酸作用生成AsH3气体 C.产生的气体遇氯化汞试纸产生砷斑 D.比较供试品砷斑与标准品砷斑的面积大小 E.比较供试品砷斑与标准品砷斑的颜色强度 例4：中国药典（1995年版）收载的古蔡法检查砷盐的基本原理59例5、砷盐检查法方法的比较1、在连接砷化氢发生瓶的导管中装入醋酸铅棉花（）2、使用的标准砷溶液为2m1（）3、测定结果要与标准砷斑相比较（）4、要测定吸收度（）5、要用酸碱滴定法（）A.古蔡氏（Gutzeit）法 B.二乙基二硫代氨基甲酸银法 C.A和B均可 D.A和B均不可例5、砷盐检查法方法的比较60例6、用古蔡氏法检查下列药物中的砷盐时，排除干扰的方法：A.先用硝酸或溴水氧化 B.先加酸性氯化亚锑还原 C.改用白田道夫法 D.先加氰化钾掩蔽 E.先加草酸生成沉淀 1.硫化物（）2.亚硫酸盐（）3.硫代硫酸盐（）4.高铁盐（）5.锑盐（）例6、用古蔡氏法检查下列药物中的砷盐时，排除干扰的方法：61例7.ChP（2000）检查葡萄糖酸锑钠中的砷盐时，应选用（B）A.古蔡氏法 B.白田道夫法 C.碘量法 D.AgDDC法 E.契列法例7.ChP（2000）检查葡萄糖酸锑钠中的砷盐时，应选用62例8.葡萄糖中砷盐的检查，需要的试剂应有（）APb2+标准液 BSnCl2试液 CKI试液 DZn E醋酸铅棉花例8.葡萄糖中砷盐的检查，需要的试剂应有（）63例9.Ag-DDC法检查砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡的作用为（）A将As5+还原为As3+B有利于AsH3生成反应 C抑制SbH3的生成 D形成Zn-Sn齐以均匀而连续地发生氢气 E催化加速生成AsH3例9.Ag-DDC法检查砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡的64例10.古蔡氏法检查所用的溶液是()A.强碱性溶液B.强酸性溶液C.含稀盐酸10ml溶液D.含稀硝酸10ml溶液E.含强氧化剂(硝酸或过硫酸铵)溶液例10.古蔡氏法检查所用的溶液是()65例11、综合练习 1、药物中铁盐检查（）2、磺胺嘧啶中重金属检查（）3、药物中硫酸盐检查（）4、葡萄糖中重金属检查（）5、药物中氯化物检查（）A.硝酸银试液 B.氯化钡试液 C.硫代乙酰胺试液 D.硫化钠试液 E.硫氰酸盐试液例11、综合练习66例12、综合练习：1-5可用于检查的杂质为 1、在酸性溶液中与氯化钡生成浑浊液的方法（）2、在酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色的方法（）3、在实验条件下与硫代乙酰胺形成均匀混悬溶液的方法（）4、Ag-DDC法（）5、古蔡法（）A.氯化物 B.砷盐 C.铁盐 D.硫酸盐 E.重金属例12、综合练习：1-5可用于检查的杂质为67例13、15 杂质检查中所用的酸是A.稀硝酸 B.稀盐酸 C.硝酸 D.浓盐酸 E.醋酸盐缓冲液1、氯化物检查法（）2、硫酸盐检查法（）3、铁盐检查法（）4、重金属检查法（）5、砷盐检查法（）例13、15 杂质检查中所用的酸是68四、溶液颜色检查法四、溶液颜色检查法v控制药物中控制药物中有色杂质限量有色杂质限量的方法。的方法。vChP(2000)ChP(2000)采用三种方法检查：采用三种方法检查：v目视比色法目视比色法 v分光光度法分光光度法 v色差计法色差计法 四、溶液颜色检查法控制药物中有色杂质限量的方法。69观察方法观察方法 1.目视比色法目视比色法v将样品溶液与标准比色液比较的方法。将样品溶液与标准比色液比较的方法。v标准比色液标准比色液的配制的配制：v观察方法观察方法：观察方法 1.目视比色法将样品溶液与标准比色液比较的方法。70标准比色液的配制标准比色液的配制 2.2.色差计法色差计法v本法是通过本法是通过色差计色差计直接测定溶液的透视三刺激值，比较样品直接测定溶液的透视三刺激值，比较样品溶液与标准比色液之间的颜色差异进行检测的方法。溶液与标准比色液之间的颜色差异进行检测的方法。v三刺激值：在给定的三色系统中，与待测色达到色匹配所需要的三个原刺激量。三刺激值：在给定的三色系统中，与待测色达到色匹配所需要的三个原刺激量。v色差计的工作原理色差计的工作原理：利用仪器内部的积分光学系统，把：利用仪器内部的积分光学系统，把光谱光度数据光谱光度数据的的三刺激值进行积分，得到颜色的数学表达式，计算出三刺激值进行积分，得到颜色的数学表达式，计算出色差色差。v测色仪器一般为光电积分型色差计测色仪器一般为光电积分型色差计。标准比色液的配制 2.色差计法本法是通过色差计直接测定溶液71五、澄清度检查法五、澄清度检查法 v检查药物中的检查药物中的微量不溶性杂质微量不溶性杂质，用作，用作注射剂注射剂的的原料药一般应作此项检查。原料药一般应作此项检查。v1.检查方法检查方法 对照法对照法 v把把供试品供试品溶液与溶液与规定级号的浊度标准液规定级号的浊度标准液相比较相比较五、澄清度检查法 检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原72五、澄清度检查法五、澄清度检查法v2.浊度标准液的配制：浊度标准液的配制：v原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。v浊度标准贮备液浊度标准贮备液：1.0硫酸肼溶液硫酸肼溶液 +10乌洛托品溶液乌洛托品溶液 等量混合等量混合（低温避光保存）（低温避光保存）v浊度标准原液浊度标准原液：15.00ml 贮备液稀释至贮备液稀释至1000ml（A550=0.120.15）v浊度标准液（浊度标准液（5个级号）：个级号）：0.5；1；2；3；4。五、澄清度检查法2.浊度标准液的配制：73五、澄清度检查法五、澄清度检查法v3.判断判断 药典中规定的药典中规定的“澄清澄清”，系指供试品溶液的，系指供试品溶液的澄清度澄清度相同于所用溶剂，或未超过相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。号浊度标准液。v0.5号浊度标准液号浊度标准液：2.5ml标准原液稀释至标准原液稀释至100ml。v配制用水配制用水：新煮沸的冷水。：新煮沸的冷水。五、澄清度检查法3.判断 74六、有机溶剂残留量测定法六、有机溶剂残留量测定法 1.有机溶剂残留量测定法适用对象有机溶剂残留量测定法适用对象 是用以检查是用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，包括，包括苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷。苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷。2.检查方法检查方法 中国药典采用中国药典采用气相色谱法气相色谱法检查残留有机溶剂。检查残留有机溶剂。六、有机溶剂残留量测定法 1.有机溶剂残留量测定法适用对象753.色谱条件v固定相：直径为固定相：直径为0.250.18mm的二乙烯苯乙基乙烯苯型的二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球。高分子多孔小球。v载气：氮气载气：氮气v检测器：氢火焰离子化检测器检测检测器：氢火焰离子化检测器检测v柱温：柱温：80170v色谱系统适用性试验：中国药典规定，在测定残留溶剂前确色谱系统适用性试验：中国药典规定，在测定残留溶剂前确定色谱适用性条件。定色谱适用性条件。3.色谱条件固定相：直径为0.250.18mm的二乙烯苯76（1）用待测物的色谱峰计算的理论塔板数应大于）用待测物的色谱峰计算的理论塔板数应大于1000；（2）用内标法测定时，内标物与待测物色谱峰的分离度应大于）用内标法测定时，内标物与待测物色谱峰的分离度应大于 1.5；（3）用内标法测定时，每个标准溶液（限量待测溶剂与内标液）用内标法测定时，每个标准溶液（限量待测溶剂与内标液）进样进样5次，待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差应次，待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差应 不大于不大于5；若用外标法测定，待测物峰面积的相对标准；若用外标法测定，待测物峰面积的相对标准 偏差应不大于偏差应不大于10。（1）用待测物的色谱峰计算的理论塔板数应大于1000；（2）77第三节第三节 特殊杂质检查法特殊杂质检查法v特殊杂质特殊杂质：在：在特定药物特定药物的的生产和贮藏中生产和贮藏中引入的杂质。引入的杂质。v一般根据一般根据药物和杂质药物和杂质在物理、化学性质上的在物理、化学性质上的差异差异来进来进行区别，如颜色的差异、溶解行为的差异、旋光性的行区别，如颜色的差异、溶解行为的差异、旋光性的差异、吸收光谱的差异和化学反应的差异等。差异、吸收光谱的差异和化学反应的差异等。v高压液相色谱法高压液相色谱法第三节 特殊杂质检查法特殊杂质：在特定药物的生产和贮藏中引入78一、利用药物和杂质在理化性质上的差异一、利用药物和杂质在理化性质上的差异v臭味及挥发性质的差异臭味及挥发性质的差异v 例如：黄例如：黄凡士林凡士林中异性有机物检查：本品中异性有机物检查：本品2.0g,直火加热直火加热无辛味无辛味。v颜色差异颜色差异v 例如：例如：磺胺嘧啶磺胺嘧啶中中有色偶氮苯化合物有色偶氮苯化合物的检查：取本品的检查：取本品2.0g，加，加NaOH试液试液10ml，加水，加水25ml，与黄色，与黄色3号比色液比，不得更深。号比色液比，不得更深。v溶解行为的差异溶解行为的差异v 例如：例如：吡哌酸吡哌酸中中不溶物吡哌酸甲酯不溶物吡哌酸甲酯（I）和（）和（II）检查）检查一、利用药物和杂质在理化性质上的差异臭味及挥发性质的差异79一、利用药物和杂质在理化性质上的差异一、利用药物和杂质在理化性质上的差异v旋光性质的差异旋光性质的差异v 例如：例如：硫酸阿托品硫酸阿托品中中莨菪碱莨菪碱的检查：本品溶液的检查：本品溶液(50mg/ml)-0.4v对光吸收性质的差异对光吸收性质的差异v 例如：例如：苯丙醇苯丙醇中中苯丙酮苯丙酮的检查的检查:纯品苯丙醇纯品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%时时A247nm/A258nm=0.79一、利用药物和杂质在理化性质上的差异旋光性质的差异80一、利用药物和杂质在理化性质上的差异一、利用药物和杂质在理化性质上的差异v荧光分析法荧光分析法 v v 例如：例如：利血平利血平中中氧化产物氧化产物检查检查：利血平：利血平(无荧光无荧光)v 3,4-二去氢利血平二去氢利血平(I)(黄绿色荧光黄绿色荧光)v 3,4,5,6-四去氢利血平四去氢利血平(II)(蓝色荧光蓝色荧光)一、利用药物和杂质在理化性质上的差异荧光分析法 81二二.高压液相色谱法概述高压液相色谱法概述v高效液相色谱法高效液相色谱法是是70年代初期、年代初期、在气相色谱和经典色谱在气相色谱和经典色谱的基的基础上发展起来的一种础上发展起来的一种以液体做流动相以液体做流动相的新色谱技术。的新色谱技术。v气相色谱气相色谱仅能分析在操作温度下仅能分析在操作温度下能气化能气化而而不分解不分解的物质。对的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。据统计合物及高聚物的分离、分析较为困难。据统计只有大约只有大约20%的有机物能用气相色谱分析。的有机物能用气相色谱分析。v液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，能用液相色液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，能用液相色谱分析的有机物大约占有机物的的谱分析的有机物大约占有机物的的70 80%。二.高压液相色谱法概述高效液相色谱法是70年代初期、在气相822.液相色谱的分离原理液相色谱的分离原理v液相色谱分离系统也由两相液相色谱分离系统也由两相固定相和流动相组成固定相和流动相组成。液相。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。相是各种溶剂。v被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。分子尺寸大小的差异进行分离。2.液相色谱的分离原理液相色谱分离系统也由两相固定相和833.高效液相色谱仪高效液相色谱仪v高效液相色谱仪由高效液相色谱仪由 高压输液系统高压输液系统、进样系统进样系统、分离系统分离系统、检测检测系统系统、记录系统记录系统 等五大部分组成。等五大部分组成。v高压输液系统：由溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等组成。高压输液系统：由溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等组成。v进样系统：包括进样口、注射器和进样阀等。进样系统：包括进样口、注射器和进样阀等。v分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。v检测器：溶质性检测器（包括紫外、荧光、电化学检测器等）和总体检测检测器：溶质性检测器（包括紫外、荧光、电化学检测器等）和总体检测器（如示差折光检测器）。器（如示差折光检测器）。3.高效液相色谱仪高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统844.药物杂质检查中的高效液相色谱法药物杂质检查中的高效液相色谱法v峰面积归一化法峰面积归一化法v内标法加校正因子法内标法加校正因子法v外标法外标法v不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法4.药物杂质检查中的高效液相色谱法峰面积归一化法85（1）、峰面积归一化法）、峰面积归一化法v峰面积归一化法峰面积归一化法：计算：计算各杂质峰面积总各杂质峰面积总和占和占总峰面积总峰面积（指杂质（指杂质和药物峰面积，不包括溶剂峰面积）和药物峰面积，不包括溶剂峰面积）百分率百分率的方法。的方法。v百分率百分率与规定限量比较与规定限量比较，判断药物是否合格。，判断药物是否合格。v用于粗略考察样品中的杂质。用于粗略考察样品中的杂质。v当杂质与药物吸收程度不一致时（最大吸收波长相差很大）误当杂质与药物吸收程度不一致时（最大吸收波长相差很大）误差较大。差较大。（1）、峰面积归一化法峰面积归一化法：计算各杂质峰面积总和占86（2）、内标法）、内标法v此法此法适用于有杂质对照品适用于有杂质对照品时杂质的含量测定。时杂质的含量测定。v内标：样品（待测药物）中不存在内标：样品（待测药物）中不存在的但的但色谱行为色谱行为与主成分及与主成分及杂质十分相似的物质。杂质十分相似的物质。v测定：在药物样品与杂质对照品中都加入内标物进样分析。测定：在药物样品与杂质对照品中都加入内标物进样分析。v杂质含量杂质含量%=杂质对照品的浓度杂质对照品的浓度*样品中杂质峰高与内标峰高之比样品中杂质峰高与内标峰高之比 杂质对照品溶液中杂质峰高与内标峰高之比杂质对照品溶液中杂质峰高与内标峰高之比（2）、内标法此法适用于有杂质对照品时杂质的含量测定。87（3）、外标法）、外标法v此法此法适用于有杂质对照品适用于有杂质对照品时杂质或主成分的含量测定。时杂质或主成分的含量测定。v外标：样品（待测药物）中存在的外标：样品（待测药物）中存在的色谱行为与主成分及杂质十色谱行为与主成分及杂质十分相似的物质。分相似的物质。v检测：以外表物标准品配成对照溶液，测定对照品和样品中杂检测：以外表物标准品配成对照溶液，测定对照品和样品中杂质的峰面积。质的峰面积。v杂质浓度杂质浓度=对照溶液峰面积对照溶液峰面积*对照溶液浓度对照溶液浓度 样品溶液峰面积样品溶液峰面积（3）、外标法此法适用于有杂质对照品时杂质或主成分的含量测定88（4）、不加校正因子的主成分自身对照法）、不加校正因子的主成分自身对照法v此法此法适用于没有杂质对照品适用于没有杂质对照品时杂质的限量检查。时杂质的限量检查。v对照品溶液对照品溶液：用：用样品稀释成样品稀释成的与杂质限度相当的溶液，以此的与杂质限度相当的溶液，以此为对照品溶液为对照品溶液进行色谱系统适用性实验。进行色谱系统适用性实验。v检测方法检测方法：将：将样品杂质峰面积样品杂质峰面积和与和与对照品主成分峰面积对照品主成分峰面积比较，比较，看其是否超过限度。看其是否超过限度。（4）、不加校正因子的主成分自身对照法此法适用于没有杂质对照89 练习练习 1 1一般杂质检查包括一般杂质检查包括A.A.氯化物检查氯化物检查 B.B.硫酸盐检查硫酸盐检查 C.C.重金属检查重金属检查 D.D.砷盐检查砷盐检查 E.E.铁盐检查铁盐检查 练习1一般杂质检查包括90A.A.稀稀HNOHNO3 3 B.B.硫代乙酰胺试液硫代乙酰胺试液 C.BaClC.BaCl2 2试液试液 D.Ag-DDCD.Ag-DDC试液试液 E.NHE.NH4 4SCNSCN试液试液1.1.铁盐检查铁盐检查2.2.硫酸盐检查硫酸盐检查3.3.氯化物检查氯化物检查4.4.砷盐检查砷盐检查A.稀HNO3 B.硫代乙酰胺试液 91A.AgNOA.AgNO3 3试液试液 B.B.硫代乙酰胺试液硫代乙酰胺试液 C.BaClC.BaCl2 2试液试液 D.KI-SnClD.KI-SnCl2 2试液试液 E.NHE.NH4 4SCNSCN试液试液 5.5.重金属检查重金属检查 6.6.硫酸盐检查硫酸盐检查 7.7.氯化物检查氯化物检查 8.8.砷盐检查砷盐检查A.AgNO3试液 B.硫代乙酰胺试液 92