第九章化学发光免疫技术优质课件

第九章化学发光免疫技术第九章化学发光免疫技术1优选第九章化学发光免疫技术优选第九章化学发光免疫技术2发光免疫分析发光免疫分析:是将发光分析和是将发光分析和免疫反应相结合免疫反应相结合而建立起来的一而建立起来的一种新的检测微量种新的检测微量抗原或抗体的新抗原或抗体的新型标记免疫分析型标记免疫分析技术。技术。全自动化学发光分析仪全自动化学发光分析仪发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种3第一节概述第一节概述一、发光的分类一、发光的分类是指一种物质由电子激发态回复到基态是指一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光。称为发光。根据形成激发态分子的能量来源不同，根据形成激发态分子的能量来源不同，可将发光分为三种光照发光、生物发可将发光分为三种光照发光、生物发光和化学发光。光和化学发光。第一节概述一、发光的分类4（一）光照发光（一）光照发光是指发光剂经是指发光剂经短波长入射光照短波长入射光照后进入激发态，回至基态时发后进入激发态，回至基态时发出较长的可见光。出较长的可见光。（一）光照发光是指发光剂经短波长入射光照后进入激发态，回至基5（二）生物发光（二）生物发光典型例子为荧火虫发光。典型例子为荧火虫发光。荧火虫发光素荧火虫发光素 光光ATP、O2、M2+荧光素酶（二）生物发光典型例子为荧火虫发光。ATP、O2、M2+荧6（三）化学发光（三）化学发光是指常温下经化学反应所产生是指常温下经化学反应所产生的发射光。的发射光。化学发光是一个多步骤的过程。化学发光是一个多步骤的过程。（三）化学发光是指常温下经化学反应所产生的发射光。7二、化学发光产生的条件二、化学发光产生的条件1、反应必须提供足够的能量（170300KJ/mol）2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。二、化学发光产生的条件1、反应必须提供足够的能量（170308二、化学发光酶免疫分析TroponinI 肌钙蛋白I是指一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光。是指常温下经化学反应所产生的发射光。AMPPD(金刚烷)Cardiac 心血管及心肌标志物类化学名称为3氨基邻苯二甲酰肼。TGA 甲状腺球蛋白抗体PRG 孕酮Thyroid 甲状腺TEST 睾酮E2，Estradiol 雌二醇CA125 糖类抗原125FT3 游离三碘甲状腺原氨酸TEST 睾酮五、化学发光免疫的非均相分离方式优选第九章化学发光免疫技术Aldosterone 醛固酮直接化学发光间接化学发光二、化学发光酶免疫分析直接化学发光9三、化学发光效率三、化学发光效率三、化学发光效率10四、化学发光免疫技术的分类四、化学发光免疫技术的分类1、直接化学发光免疫分析2、化学发光酶免疫分析3、电化学发光免疫分析4、鲁米诺氧途径免疫分析常用化学发光剂：常用化学发光剂：（1）吖啶酯类）吖啶酯类 直接标记发光剂直接标记发光剂（2）三联吡啶钌）三联吡啶钌 电化学发光剂电化学发光剂（3）酶促反应发光剂：鲁米诺）酶促反应发光剂：鲁米诺 AMPPD(金刚烷金刚烷)四、化学发光免疫技术的分类1、直接化学发光免疫分析常用化学发11（一）固相分离（一）固相分离板式或管式板式或管式（二）过滤分离（二）过滤分离过滤杯（膜）过滤杯（膜）（三）珠式分离（三）珠式分离与丙烯酰胺小珠子与丙烯酰胺小珠子（四）顺磁珠性颗粒分离（四）顺磁珠性颗粒分离顺磁性颗粒顺磁性颗粒五、化学发光免疫的非均相分离方式五、化学发光免疫的非均相分离方式（一）固相分离板式或管式五、化学发光免疫的非均相分离方式12一、化学发光剂一、化学发光剂在化学发光反应中参与能量转移并最终在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。称为化学发光剂或发光底物。第二节第二节 化学发光剂和标记技术化学发光剂和标记技术一、化学发光剂在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的13第九章化学发光免疫技术优质课件14第九章化学发光免疫技术优质课件15TEST 睾酮3、标记物稳定，试剂有效期长五、化学发光免疫的非均相分离方式是指一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光。Ferritin 铁蛋白发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。TSH(3rd Gen)促甲状腺激素(第三代超敏)化学发光是一个多步骤的过程。FT3 游离三碘甲状腺原氨酸CA125 糖类抗原125TEST 睾酮优选第九章化学发光免疫技术（二）过滤分离过滤杯（膜）四、化学发光免疫技术的分类3、标记物稳定，试剂有效期长PRG 孕酮PRL 催乳素（二）过滤分离过滤杯（膜）3、标记物稳定，试剂有效期长TroponinI 肌钙蛋白ITEST 睾酮16第九章化学发光免疫技术优质课件17第九章化学发光免疫技术优质课件18第九章化学发光免疫技术优质课件19鲁米诺早在鲁米诺早在1853年就被合成出来了。年就被合成出来了。1928年，化学年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧化时能发出蓝光。化时能发出蓝光。化学名称为化学名称为3氨基邻苯二甲酰肼。氨基邻苯二甲酰肼。刑侦学应用刑侦学应用 在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。这种检测方法极为灵敏，能检测出蓝绿色的荧光。这种检测方法极为灵敏，能检测只有百万分之一含量的血。只有百万分之一含量的血。鲁米诺早在1853年就被合成出来了。1928年，化学家首次发20第九章化学发光免疫技术优质课件21第九章化学发光免疫技术优质课件22二、发光剂的标记技术（自学）二、发光剂的标记技术（自学）23第三节第三节 化学发光免疫分析的类型化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析一、直接化学发光免疫分析第三节 化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析24第九章化学发光免疫技术优质课件25二、化学发光酶免疫分析二、化学发光酶免疫分析发光酶免疫分析发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催化某是用参与催化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应结束后，加入底物，通过抗原抗体反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应，发出的光在特定酶催化底物发光反应，发出的光在特定仪器上进行测定。仪器上进行测定。二、化学发光酶免疫分析发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催26HRP标记的标记的LEIA（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析HRP标记的LEIA（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析27（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析ALP标记的标记的LEIA（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析ALP标记的LEIA28E2，Estradiol 雌二醇AMPPD(金刚烷)TMA 甲状腺微粒体抗体发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应，发出的光在特定仪器上进行测定。PRL 催乳素发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应，发出的光在特定仪器上进行测定。4、鲁米诺氧途径免疫分析FT4 游离四碘甲状腺原氨酸（一）固相分离板式或管式TEST 睾酮T3 三碘甲状腺原氨酸发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应，发出的光在特定仪器上进行测定。TSH(3rd Gen)促甲状腺激素(第三代超敏)发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。第二节 化学发光剂和标记技术可实现ng甚至pg级微量待测物的定量检测，保证了各种激素、病毒抗原抗体等微量物质的准确定量测定。HCG/HCG 绒毛膜促性腺激素FT3 游离三碘甲状腺原氨酸第二节 化学发光剂和标记技术FPSA 游离前列腺特异性抗原TEST 睾酮E2，Estradiol 雌二醇29三、电化学发光免疫分析三、电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析（电化学发光免疫分析（ECLIA）是）是电化学发光和免疫测定相结合的产电化学发光和免疫测定相结合的产物。物。三、电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析（ECLIA）是电化30第九章化学发光免疫技术优质课件31第四节化学发光免疫测定的临第四节化学发光免疫测定的临床应用床应用化学发光免疫技术因标记物为非化学发光免疫技术因标记物为非放射性物质，且易于实现自动化，放射性物质，且易于实现自动化，具有快速、简便、灵敏、特异等具有快速、简便、灵敏、特异等特点，已广泛应用于各种激素、特点，已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物及其化微量生肿瘤标志物、药物及其化微量生物活性物质测定。物活性物质测定。第四节化学发光免疫测定的临床应用化学发光免疫技术因标记物为32临床应用特点1、灵敏度高，特异性强、灵敏度高，特异性强可实现ng甚至pg级微量待测物的定量检测，保证了各种激素、病毒抗原抗体等微量物质的准确定量测定。临床应用特点1、灵敏度高，特异性强332、线性范围宽、线性范围宽可满足可满足103106数量级的绝对定量检测需要。数量级的绝对定量检测需要。保证了临床应用中的简便性，避免了试验中保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。的稀释误差。2、线性范围宽343、标记物稳定，试剂有效期长、标记物稳定，试剂有效期长有效期可长达一年3、标记物稳定，试剂有效期长354、自动化程度高，检测菜单齐全、自动化程度高，检测菜单齐全4、自动化程度高，检测菜单齐全36 Thyroid 甲状腺T3 三碘甲状腺原氨酸T4 四碘甲状腺原氨酸FT3 游离三碘甲状腺原氨酸FT4 游离四碘甲状腺原氨酸RT3 反三碘甲状腺原氨酸TRAB 促甲状腺受体抗体TGA 甲状腺球蛋白抗体TMA 甲状腺微粒体抗体TG 甲状腺球蛋白TSH(3rd Gen)促甲状腺激素(第三代超敏)Thyroid 甲状腺37 Fertility 生育 FSH 促卵泡激素 LH 黄体生成素 PRL 催乳素 E2，Estradiol 雌二醇 PRG 孕酮 TEST 睾酮 FTEST 游离睾酮 HCG/HCG 绒毛膜促性腺激素 BHCG 绒毛膜促性腺激素B亚单位 FE3 游离雌三醇 PAPPA 妊娠相关血浆蛋白 DHEAS 脱氢表雄酮 Fertility 生育38 Cardiac 心血管及心肌标志物类TroponinI 肌钙蛋白IMyoglobinI 肌红蛋白CKMB 肌酸激酶同工酶A I 血管紧张素IA II 血管紧张素IIAldosterone 醛固酮脑自然肽N端前体蛋白 Cardiac 心血管及心肌标志物类39FPSA 游离前列腺特异性抗原E2，Estradiol 雌二醇一、直接化学发光免疫分析FE3 游离雌三醇五、化学发光免疫的非均相分离方式T3 三碘甲状腺原氨酸（3）酶促反应发光剂：鲁米诺保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。可实现ng甚至pg级微量待测物的定量检测，保证了各种激素、病毒抗原抗体等微量物质的准确定量测定。DHEAS 脱氢表雄酮优选第九章化学发光免疫技术TSH(3rd Gen)促甲状腺激素(第三代超敏)PRG 孕酮CKMB 肌酸激酶同工酶（1）吖啶酯类 直接标记发光剂TEST 睾酮TroponinI 肌钙蛋白I（2）三联吡啶钌 电化学发光剂Tumor Makers 肿瘤标志物AFP 甲胎蛋白CEA 癌胚抗原Ferritin 铁蛋白 TPA 组织多肽抗原PAP 前列腺酸性磷酸酶PSA 前列腺特异性抗原FPSA 游离前列腺特异性抗原CA125 糖类抗原125FPSA 游离前列腺特40 Prenatal Screening 产前筛查AFP 甲胎蛋白FreeBHCG 游离绒毛膜促性腺激素B亚单位PAPPA 妊娠相关蛋白 Prenatal Screening 产前筛查41