生化检验质控方法培训大全课件

生化检验质控方法之生化检验质控方法之大全大全 1质量控制质量控制qualitycontrol，QC是利是利用现代科学管理的方法和技术检测分析过程用现代科学管理的方法和技术检测分析过程中的误差，控制与分析有关的各个环节，确中的误差，控制与分析有关的各个环节，确保实验结果的准确可靠。也称为实验室质量保实验结果的准确可靠。也称为实验室质量保证。保证。定义：定义：nn1947年年Sundeman首先调查发现不同首先调查发现不同实验室对同一份标本的实验结果有惊人的实验室对同一份标本的实验结果有惊人的误差。误差。n1950年年Levey和和Jennings就将工业质控就将工业质控图移植临床生化实图移植临床生化实验室，此后，质控验室，此后，质控图和数理统计一直成为临床生化检验质量图和数理统计一直成为临床生化检验质量控制控制QC的重要手段。的重要手段。n1953年世界上出现了商品性的控制血年世界上出现了商品性的控制血清。清。n1954年开展到国与国之间的质量调查。年开展到国与国之间的质量调查。n1960年代初已开展为全面质量控制。年代初已开展为全面质量控制。n1974年在日本召开了第一次临床生化年在日本召开了第一次临床生化检验质量控制国际检验质量控制国际专题讨论会。专题讨论会。n随后随后WHO和国际临床生化学会都设和国际临床生化学会都设有质控领导机构，向各国提供标准品和控有质控领导机构，向各国提供标准品和控制物，领导和管理国际性的质量控制工作。制物，领导和管理国际性的质量控制工作。专业开展专业开展3主要内容主要内容 第一节第一节 全过程质量控制全过程质量控制 第二节第二节 室内质量控制室内质量控制 第三节第三节 室间质量评价室间质量评价 第四节第四节 实验室认可实验室认可第五节第五节试剂盒的选择和评价试剂盒的选择和评价4 第一节第一节 全过程质量控制全过程质量控制全面质量控制的内容全面质量控制的内容分析前质量控制分析前质量控制分析中质量控制分析中质量控制分析后质量控制分析后质量控制5 全面质量控制的内容主要包括标本全面质量控制的内容主要包括标本分析前的分析前的质量保证、分析中的质量控制和分析后的质量评质量保证、分析中的质量控制和分析后的质量评估估三个主要过程的质控。它们之间的实验保证体三个主要过程的质控。它们之间的实验保证体系见图系见图4-14-1。全面质量控制的内容全面质量控制的内容 内容主要为：内容主要为：人员的素质和稳定性人员的素质和稳定性 实验室的设置和工作环境实验室的设置和工作环境 实验仪器的质量保证实验仪器的质量保证 检测方法的选择和评价检测方法的选择和评价 试剂盒的选择与评价试剂盒的选择与评价 病人准备病人准备 标本的采集、处理和储存标本的采集、处理和储存 实验室用水等实验室用水等一分析前质量控制一分析前质量控制7 内容主要包括：内容主要包括：标本的正确处理和应用标本的正确处理和应用 工程操作规程的建立工程操作规程的建立 室内质控和结果分析室内质控和结果分析 登记和填发报告等登记和填发报告等 (二二)分析中的质量控制分析中的质量控制8 内容主要有：运送实验报告 室内质控的数据管理 参加室间质评 病人投诉调查 临床信息反响等三分析后的质量评估三分析后的质量评估9 图图4-1 4-1 全面质量控制实验保证体系全面质量控制实验保证体系分析后质量评估分析后质量评估分析中质量控制分析中质量控制分析前质量保证分析前质量保证分析中质量控制分析中质量控制检查病人检查病人申请检验申请检验病人病人准备准备标本标本采集采集标本标本运送运送人员素质工作环境实验用水实验室管理临床医生临床医生运送报告运送报告病人投诉病人投诉室间质评室间质评仪器质量保证仪器质量保证方法选择与评价方法选择与评价试剂选择与评价试剂选择与评价反馈信息反馈信息标本处理标本处理建立操作规程建立操作规程室内质控及分析室内质控及分析标本分析测定标本分析测定室内室内复查复查保留标本保留标本随时复查随时复查登记登记填发报告填发报告10第二节第二节 室内质量控制室内质量控制 临床生化实验室常规开展的室内质临床生化实验室常规开展的室内质控控Internal quality controlInternal quality control，IQCIQC，旨在检测和控制常规工作的，旨在检测和控制常规工作的精密度和准确度，提高常规工作中天精密度和准确度，提高常规工作中天内和天间标本检测的一致性。能及时内和天间标本检测的一致性。能及时地、准确地报告检验结果。地、准确地报告检验结果。11n人员培训人员培训 n建立标准化操作规程建立标准化操作规程n仪器的检定与校准仪器的检定与校准n质控品质控品一、室内质量控制的任务一、室内质量控制的任务12 实验室每个工作人员都应对开展质量控制工作的重要性、根底知识、一般方法有充分的了解，并在实践过程中不断学习、提高。每个实验室都应培养一批开展质控工作的技术骨干。1人人员员培培训训13 标准化操作规程standard operational procedure，SOP包括仪器使用及维护的操作规程，试剂、质控品、标准品等使用的操作规程和每个检验工程的操作规程等。2建立标准化操作规程建立标准化操作规程 14对对本本实实验验室室的的相相关关仪仪器器如如分分光光光光度度计计、量量具具、自自动动生生化化分分析析仪仪以以及及其其它它测测定定仪仪器器等等要要定定期期按按要要求求进进行行检检定定和和校校准准如如对对自自动动化化分分析析仪仪、分分光光光光度度计计的的摩摩尔尔吸吸收收系系数数的的定定期期校校准准。所所有有校校准准和和检检定定都都应应有有时时间间、结结果果、变更和频度的记录和说明。变更和频度的记录和说明。3仪器的检定与校准仪器的检定与校准 154质控品质控品n定义定义 为质控目的而制备的标本称为质控品。质控品含有与测定标本同样的根底物质通常为小牛血清其分析物应具有参考值、病理值和医学决定水平三种水平浓度。16 是指对临床诊治疾病具有决定性作用的被是指对临床诊治疾病具有决定性作用的被分析物的浓度，是临床上按照不同病情给予分析物的浓度，是临床上按照不同病情给予不同治疗方案而确定的不同治疗方案而确定的阈值阈值。n医学决定水平医学决定水平定义：定义：17 某一测定成分可有多个医学决定水平。如血糖有四个决定水平。2.8mmol/L表示低于此值出现低血糖病症，7.1mmol/L表示空腹时确定糖尿病的水平，8.9mmol/L表示出现尿糖，16.5mmol/L 以上出现高血糖昏迷。特点：特点：18 根据质控品的物理性状不同分为冻干质控品、液体质控品和混合血清等。根据有无测定值可分为定值蓝色标签质控品和非定值红色标签质控品。各实验室可根据各自的情况选用以上一种质控品作为室内质控品。n质控品的种类质控品的种类19 人血清基质，分布均匀。无传染性。添加剂和调制物的数量少。瓶间CV%酶类应小于2%，其它应小于1%。冻干品复溶后稳定，28时不少于24小时，20时不少于20天；某些不稳定成分如BIL，ALP等在复溶后4小时的变异应小于2%在实验室的有效期应在一年以上。合理的本钱。n质控品应具有的特征是：质控品应具有的特征是：20 严格按质控品说明书操作。严格按质控品说明书操作。冻干质控品的复溶要确保溶剂的质量。冻干质控品的复溶要确保溶剂的质量。冻干质控品复溶的加量要准确一致。冻干质控品复溶的加量要准确一致。冻干质控品复溶应轻轻摇匀切忌剧烈震摇。冻干质控品复溶应轻轻摇匀切忌剧烈震摇。质控品应按规定方法保存不用超期品。质控品应按规定方法保存不用超期品。质控品要与标本同样测定条件下测定。质控品要与标本同样测定条件下测定。n质控品的正确使用和保存质控品的正确使用和保存 21二、室内质量控制的主要方法二、室内质量控制的主要方法 确定质量目标确定质量目标设定靶值和控制限设定靶值和控制限Levey-Jennings质控图质控图多规那么质控技术多规那么质控技术22质量目标是实验室选用的质控方法质量目标是实验室选用的质控方法所需到达的目标，质量目标可用总允所需到达的目标，质量目标可用总允许误差的形式表示许误差的形式表示目前中国尚未确立各工程的总允目前中国尚未确立各工程的总允许误差，可参考美国表许误差，可参考美国表-和欧和欧洲表洲表-一、确定质量目标一、确定质量目标最最正正确确变变异异(optimal(optimal conditions conditions variance variance OCV)OCV)表表示示实实验验室室在在最最正正确确条条件件下下测测定定工工程程所所能能到到达达的的最好精密度水平。最好精密度水平。常常规规变变异异(routine(routine conditions conditions variance variance RCV)RCV)表表示示实实验验室室在在常常规规条条件件下下测测定定工工程程所所能能到到达达的的精精密度水平。密度水平。RCV2OCVRCV2OCVRCV2OCV时时，不不可可接接受受二二者者是是反反映映实实验验室室工工作作水水平平的的根根底底指指标，也是开展室内质控工作的根底工作。标，也是开展室内质控工作的根底工作。n最正确变异和常规变异的设最正确变异和常规变异的设定定241 1、稳定性较长的质控品、稳定性较长的质控品 暂暂定定靶靶值值的的设设定定：对对新新批批号号的的质质控控品品进进行行测测定定，根根据据至至少少2020次次质质控控测测定定的的结结果果，计计算算出出平均值和标准差，作为暂定靶值和暂定标准差。平均值和标准差，作为暂定靶值和暂定标准差。常常用用靶靶值值的的设设立立：以以最最初初2020个个数数据据和和三三至至五五个个月月在在控控数数据据聚聚集集的的所所有有数数据据的的累累积积平平均均数数作作为为质质控控品品有有效效期期内内的的常常用用靶靶值值和和常常用用标标准准差。差。2 2、稳定性较短的质控品、稳定性较短的质控品3 3、特殊情况的处理、特殊情况的处理二、设定靶值和控制限二、设定靶值和控制限25 对对新新批批号号的的质质控控品品应应确确定定控控制制限限，控控制制限限通通常常是是以以多多个个标标准准差差表表示示，即即以以标标准准差差的的倍倍数数表表示示。不不同同工工程程定定量量测测定定的的控控制限要根据其采用的质控规那么来决定。制限要根据其采用的质控规那么来决定。4、设定控制限、设定控制限261 1、均数标准差、均数标准差-s-s质控图质控图是是临临床床最最常常用用的的质质控控图图，以以监监测测分分析析的的精精密密度。均数标准差度。均数标准差-S-S质控图质控图三、三、Levey-Jennings质控图质控图根据前面确定的靶值根据前面确定的靶值和标准差绘制和标准差绘制-s质质控图，得到均值线控图，得到均值线、警告线、警告线2s和失控和失控线线3s。与质控图制作相同批号的控制血清，。与质控图制作相同批号的控制血清，每天随病人标本分析，结果点在图上，直线连接。每天随病人标本分析，结果点在图上，直线连接。1方法方法:27d d均数+2S-2S+3S-3S正常分布正常分布28正常分布规律：正常分布规律：95%数据落在数据落在2s内内不能有连续不能有连续5次结果在同一侧次结果在同一侧不能有不能有5次结果渐升或渐降次结果渐升或渐降不能连续不能连续2个点落在个点落在2s以外以外不应该有落在不应该有落在3s以外的点以外的点2结果分析：结果分析：29趋势变化趋势变化漂移漂移精密度变化精密度变化-3S+3S+2S-2Sd d2S30 漂移，提示存在系统误差。漂移，提示存在系统误差。趋势性变化，说明试剂或仪器的性能已发趋势性变化，说明试剂或仪器的性能已发 生变化。生变化。精度变化，提示测定的偶然误差较大，如精度变化，提示测定的偶然误差较大，如 仪器、试剂不稳定等。仪器、试剂不稳定等。异常表现异常表现:311)1)方法：方法：要要求求在在常常规规条条件件下下，同同时时测测定定2 2份份定定值值质质控控血血清清，并并要要求求质质控控血血清清所所含含测测定定物物浓浓度度最最好好分分别别为为医医学学决决定定水水平平的的上上限限高高值值或或下下限限低低值值，或或者者是是分分析析方方法法测测定定范范围围的的上上限限和和下下限限。将将测测定定结结果果分分别别绘绘成成2 2份份不不同同浓浓度度的的 s s质质控控图图，当当有有一一份份质质控控血血清清测测定定值值处处于于质质控控图图上上2s2s3s3s界界限限内内，发发出出“警警报报信信号号时时，即即应应采采用用其其余余各各条条规规那那么么对对质质控控图图进进行行全全面面检检查查，假假设设符符合合其其中中一一条条，就就应应把把该该批批分分析析测定的结果判为测定的结果判为“失控。失控。3212S警告规那么：当警告规那么：当2份质控血清中的任意份质控血清中的任意1份测定值处份测定值处于于2s3s界限内，为界限内，为“警报信号。警报信号。13S规那么：当规那么：当2份质控血清中的任意份质控血清中的任意1份测定值超过份测定值超过3s界限，为界限，为“失控。提示存在随机误差。失控。提示存在随机误差。2判断规那么：判断规那么：2s-2s-3s3s x33R4S规那么：同一那么：同一批中二个批中二个质控控结果之果之差超出差超出4s范范围，其中，其中一个超出一个超出2s限限值，另一个超出另一个超出2s限限值，为“失控，属随机失控，属随机误差差过大。大。22S规那么：同批那么：同批两个两个质控品控品结果同方果同方向超出向超出2s限限值，或，或同一同一质控品控品连续两次两次质控控结果超出果超出2s限限值为“失控，多由失控，多由系系统误差造成。差造成。3s2s-2s-3s3s 2sX-2s-3s34 41S规那么：当1份质控血清的测定结果连续4次超过1s或1s界限，或2份质控血清的测定结果同时连续2次超过1s或1s界限时，为“失控，一般由系统误差所至。10 规那么：当1份质控血清测定结果连续10次偏于均值一侧时，或2份质控血清的测定结果同时连续5次偏于 一侧时，为“失控，是系统误差所致。s2S3S-s-2s-3ss-s35 1、操作者在测定质控时，如发现质控数据违背了质控规那么，应填写失控报告单，对失控结果要进行回忆、分析是否人为错误操作等原因。2、重新测定一次，假设在控，那么说明是由于人为原因所致，假设仍然失控，那么应更换同一批号另一瓶质控血清，假设在控那么说明是质控物变质或污染。三失控后处理三失控后处理质控品必须分装、冷冻保存质控品必须分装、冷冻保存363、如仍失控，取另外一个批号的质控物或定值血清，、如仍失控，取另外一个批号的质控物或定值血清，以同样方法测定一次，如结果在控，提示前一批质以同样方法测定一次，如结果在控，提示前一批质控血清可能存在问题，认真查找质控变质原因，予控血清可能存在问题，认真查找质控变质原因，予以改正。以改正。4、如仍不在允许范围内，那么仔细检查仪器各局部、如仍不在允许范围内，那么仔细检查仪器各局部性能是否正确，假设仍然失控，更换试剂，重新测性能是否正确，假设仍然失控，更换试剂，重新测定，如在控那么可能由于试剂放置时间过长变质。定，如在控那么可能由于试剂放置时间过长变质。5、如结果仍失控，那么仔细检查仪器各局部性能是、如结果仍失控，那么仔细检查仪器各局部性能是否正常，包括光路、水路、电路等系统，维修保养否正常，包括光路、水路、电路等系统，维修保养后重测。后重测。37 范例一范例一BUNBUN结果偏高结果偏高v解决方案：解决方案：v 1 1、换定标液，将朗道的定标液换成试剂本身的定质控、换定标液，将朗道的定标液换成试剂本身的定质控做所有工程质控，然后用质控单独做做所有工程质控，然后用质控单独做BUNBUN工程质控后，工程质控后，BUNBUN标标液，结果仍偏高，排除定标液的本身问题。液，结果仍偏高，排除定标液的本身问题。v 2 2、用定标液做质控结果亦偏高，排除质控品问题。、用定标液做质控结果亦偏高，排除质控品问题。v 3 3、先用结果降低。、先用结果降低。v结论：试剂本身存在一定的系统误差，可能工程之间存在交结论：试剂本身存在一定的系统误差，可能工程之间存在交叉污染。叉污染。v解决方法：更换试剂的位置，更换枯燥棒，如不行那么需更解决方法：更换试剂的位置，更换枯燥棒，如不行那么需更换不同厂家的试剂。换不同厂家的试剂。v结果：更换试剂位置，结果恢复正常。结果：更换试剂位置，结果恢复正常。范例二范例二 RF出现负值出现负值可能原因分析：可能原因分析：1、RF采用的是免疫比浊法，其测定的付波长为采用的是免疫比浊法，其测定的付波长为700nm，仪器，仪器在在700nm处有很强的非特异性吸收峰，导致付波长吸收峰增处有很强的非特异性吸收峰，导致付波长吸收峰增高，当标本的浓度很低时，主波长的吸光度值比付波长的低，高，当标本的浓度很低时，主波长的吸光度值比付波长的低，结果出现负值。结果出现负值。2、定标液浓度较高，而比浊法不能用线性定标方式，必须采、定标液浓度较高，而比浊法不能用线性定标方式，必须采用多点定标的方法。低浓度时就很可能出现负值。用多点定标的方法。低浓度时就很可能出现负值。3、抗原抗体反响出现后带现象。、抗原抗体反响出现后带现象。可能的解决方案：可能的解决方案：1、将检测的付波长去掉可能会结果偏高，乳糜血的干扰、将检测的付波长去掉可能会结果偏高，乳糜血的干扰2、更换定标液、更换定标液3、稀释。、稀释。394041424344第三节第三节 室间质量评价室间质量评价 室间质量评价室间质量评价externalqualityassessment，EQA是指多家实验室分析同一标本，由是指多家实验室分析同一标本，由外部独立机构收集、分析和反响实验室检测结外部独立机构收集、分析和反响实验室检测结果，评定实验室常规工作的质量，观察实验的果，评定实验室常规工作的质量，观察实验的准确性，建立起各实验室分析结果之间的可比准确性，建立起各实验室分析结果之间的可比性。性。45 鉴鉴定定实实验验室室的的工工作作缺缺陷陷操操作作程程序序、制度制度建立方法的可接受限建立方法的可接受限鉴定方法的可信性鉴定方法的可信性为为实实验验室室执执照照评评定定或或认认可可提提供供客客观观依据依据评价实验室工作人员的能力评价实验室工作人员的能力评价实验室结果的可比性评价实验室结果的可比性 目目的的是是通通过过实实验验室室间间的的比比对对，观观察察各各实实验验室室结结果果的的准准确确性性、一一致致性性，并并采采取一定措施，使各实验室结果渐趋一致。取一定措施，使各实验室结果渐趋一致。一室间质评的目的一室间质评的目的46 二室间质评应具备的条件 要有一支素质较高的质控技术队伍 室间质评要有室内质控的根底 要有良好质控血清作为调查样本 样本定值方法可靠，有参考实验室作后盾 统一测定方法及校准品47 1方法 组织假设干实验室，共同在规定时间内测定同一批样品、收集测定结果，作统计分析并按规定评分。二室间质评的方法二室间质评的方法48 能能力力比比对对分分析析proficiency proficiency testing,PTtesting,PT是是室室间间质质量量评评价价技技术术方方案案之之一一，现现已已成成为为全全球球性性室室间间质质量量保保证证系系统统的的主主要内容，以保护病人的利益和公众的福利。要内容，以保护病人的利益和公众的福利。PTPT方方案案是是通通过过实实验验室室之之间间的的比比对对判判断断实实验验室室的的检检测测能能力力的活动。的活动。美美 国国 国国 会会 19881988年年 临临 床床 实实 验验 室室 修修 正正 案案 Clinical Clinical laboratory laboratory improvement improvement amendment,CLIA88amendment,CLIA88强强制制性性地地将将PTPT作为实验室认可的主要内容之一。作为实验室认可的主要内容之一。n能力比对分析能力比对分析49表表4-3 4-3 美国美国CLIACLIA8888能力比对检验对临床化学的分析质量要求能力比对检验对临床化学的分析质量要求项目项目可接受范围可接受范围丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶靶值靶值20%清蛋白清蛋白靶值靶值10%总蛋白总蛋白靶值靶值10%碱性磷酸酶碱性磷酸酶靶值靶值30%淀粉酶淀粉酶靶值靶值30%天冬氨酸氨基转移酶天冬氨酸氨基转移酶靶值靶值20%胆红素胆红素靶值靶值6.84mmol/L或或20%（取大者）（取大者）总钙总钙靶值靶值0.25mmol/L氯氯靶值靶值5%胆固醇胆固醇靶值靶值10%高密度脂蛋白胆固醇高密度脂蛋白胆固醇靶值靶值30%50肌酸激酶肌酸激酶靶值靶值30%肌酐肌酐靶值靶值0.265mol/Lmol/L或或15%(取大者取大者)葡萄糖葡萄糖靶值靶值0.33mmol/Lmol/L或或10%(取大者取大者)甘油三酯甘油三酯靶值靶值25%尿素尿素靶值靶值0.71或或9%(取大者取大者)尿酸尿酸靶值靶值17%铁铁靶值靶值20%乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶靶值靶值20%镁镁靶值靶值25%钾钾靶值靶值0.5mmol/L钠钠靶值靶值4mmol/L血气血气PCO2靶值靶值5mmHg或或8%(取大者取大者)血气血气PO2靶值靶值3S血气血气pH靶值靶值0.0451 国际CLIA88的PT方案规定，临床生物化学工程每年至少进行3次PT调查，每次调查至少包括5个不同的质控样本，在一年内，对于任一项至少可得15个测定结果。通过各实验室间持续的比较，作出结果判断。一方法一方法52 针对某一工程的得分针对某一工程的得分ScoreScore：S1=S1=对调查的全部工程的得分：对调查的全部工程的得分：S2=S2=二计算二计算53 国际CLIA88技术细那么规定，S1、S2均应大于80，否那么判为不满意。且如果S1或S2连续两次或两次以上不满意，即为失败，对于某一个接受结果，不再进行优劣分级。三判断三判断54 PTPT是是对对实实验验室室常常规规工工作作进进行行评评价价的的活活动动，目目的的是为了全面提高检验的质量。是为了全面提高检验的质量。所所以以对对PTPT调调查查的的标标本本应应完完全全按按照照病病人人标标本本一一样样对对待待，与与病病人人标标本本同同时时进进行行分分析析，切切忌忌互互相相核核对对结结果，这样才能反映实验室真正的日常工作水平。果，这样才能反映实验室真正的日常工作水平。各各实实验验室室应应该该与与PTPT组组织织者者密密切切合合作作，解解决决实实验验中出现的各种问题，不断提高检验质量。中出现的各种问题，不断提高检验质量。四四目的意义目的意义1目的目的55 通过能力比对分析可获得本实验室与使用同一方法的其他实验室结果的差异，以及与做同一试验但使用不同方法的实验室结果比较的情况。能力比对分析还可评价实验室的分析能力，监控实验室可能出现的技术问题，可作为实验室质量保证的外部监督工具。2意义意义 56 变异指数得分法1985年全国临床检验质量控制会议上通过的提案，建议变异指数得分计算公式如下：V=VI=其中，为各实验室某工程的测定值，T为靶值，V为变异百分数，VI为变异指数，CCV为已选定的变异系数。补 充57CCV（%）测定项目测定项目测定项目测定项目CCV（%）表表4-5WHO推荐的推荐的CCV值值K+Na+Cl-Ca2+P3+GluBUNUACrTPAlbTBIL58判判断断标标准准在计算时，在计算时，VIS只计整数位，不带正负符号。只计整数位，不带正负符号。当当VI400时时,VIS=VI;当当VI400时，时，VIS=400。我国的标准为：我国的标准为：VIS80为优良为优良80VIS150为及格为及格VIS200，表明结，表明结果中有临床上不允果中有临床上不允许的误差。许的误差。VIS=400的测定结果的测定结果会造成临床的严重失会造成临床的严重失误，是绝对不许可的误，是绝对不许可的WHO的标准为的标准为:VIS50为优秀为优秀VIS100为良好为良好VIS150为及格。为及格。59VIS方方案案过过去去运运用用的的相相当当广广泛泛，但但随随着着科科学学的的开开展展，已已暴暴露露出出自自身身的的缺缺乏乏，比比方方说说酶酶、HDL、胆胆固固醇醇等等指指标标已已成成为为当当今今实实验验室室的的常常规规工工程程，但但由由于于VIS方方案案还还没没有有给给出出它它们们的的CCV值值，所所以以无无法法计计算算VIS。而而CCV值值确确实实定定是是一一个个复复杂杂而而漫漫长长的的过过程程，并并需需要要随随着着仪仪器器的的更更新新随随时时进进行行调调整整，从从而使而使VIS的计算值无法真正代表当前的实际水平。的计算值无法真正代表当前的实际水平。nVIS方案的评价方案的评价60一、定义一、定义实验室认可实验室认可laboratoryaccreditation是由是由权威性专业组织按照一定的标准对实验室或实权威性专业组织按照一定的标准对实验室或实验室工作人员进行检查、考核，认可能够开展验室工作人员进行检查、考核，认可能够开展或胜任某些工作，并授予资格的过程。或胜任某些工作，并授予资格的过程。第四节第四节实验室认可实验室认可61认可委员会认可委员会一系列标准及档案一系列标准及档案经选拔和培训并取得资格的评审员经选拔和培训并取得资格的评审员 二、根本组成二、根本组成62第五节临床生物化学实验方法的第五节临床生物化学实验方法的选择与评价选择与评价v一、实验方法的选择一、实验方法的选择v二、实验方法的评价二、实验方法的评价v三、临床诊断实验的性能评价三、临床诊断实验的性能评价63一、实验方法的选择一、实验方法的选择方法分级方法分级 1 1、决定性方法：准确度最高，系统误差、决定性方法：准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。用于开展原因或在某些方面不够明确的方法。用于开展及评价及评价 参考方法和标准品。参考方法和标准品。2 2、参考方法：指准确度和精密度已经充、参考方法：指准确度和精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素小，系统误差小，分证实的分析方法，干扰因素小，系统误差小，有适当的灵敏度、特异性直线性及较宽的分析有适当的灵敏度、特异性直线性及较宽的分析范围。用于鉴定常规方法和二级标准品。范围。用于鉴定常规方法和二级标准品。3 3、常规方法：指性能符合临床或其他目、常规方法：指性能符合临床或其他目地的需要，有适当的分析范围，而且经济实用。地的需要，有适当的分析范围，而且经济实用。64标准品的分级：标准品的分级：标准品：一种或几种物理化学性质已经充分确标准品：一种或几种物理化学性质已经充分确定，被用于校准仪器或证实一种测定方法的定，被用于校准仪器或证实一种测定方法的物质。物质。1 1、一级标准品：已经确定为稳定而均一的物质，、一级标准品：已经确定为稳定而均一的物质，它的数值已经由决定性方法确定，或由高度它的数值已经由决定性方法确定，或由高度准确的假设干方法确定，所含杂质也已经定准确的假设干方法确定，所含杂质也已经定量，且有证书，用于校准决定性方法，评价量，且有证书，用于校准决定性方法，评价及校准参考方法以及为二级标准品定值。及校准参考方法以及为二级标准品定值。2 2、二级标准品：这类标准品可由实验室自己配、二级标准品：这类标准品可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值，主要用于常规方法的标化或为控制物定值，主要用于常规方法的标化或为控制物定值。定值。3 3、控制物：控制物有冻干或是溶液，以参考方、控制物：控制物有冻干或是溶液，以参考方法用一级或二级标准品定值，用于质量控制，法用一级或二级标准品定值，用于质量控制，一般不用于标化。一般不用于标化。一、实验方法的选择一、实验方法的选择65实验方法的选择要求实验方法的选择要求1、实用性、实用性 2、可靠性、可靠性 3、真实性、真实性66二、实验方法的评价二、实验方法的评价评价实验与分析误差类型的关系评价实验与分析误差类型的关系分析误差的类型分析误差的类型评价实验评价实验初步实验初步实验指标指标偶然误差偶然误差 重复性实验重复性实验 精密度精密度恒定误差恒定误差 干扰实验干扰实验 准确度准确度比例误差比例误差 回收实验回收实验 准确度准确度67三、诊断性试验评价的相关指标三、诊断性试验评价的相关指标v 1.敏感度敏感度v 2.特异度特异度v 3.阳性似然比阳性似然比v 4.阴性似然比阴性似然比v 5.受试者工作曲线受试者工作曲线三、临床生物化学诊断实验的三、临床生物化学诊断实验的性能指标性能指标1、灵敏度 诊断实验检出的阳性病人的百分率 临床灵敏度%=实际上检测为阳性病人数/理论上为阳性病人数2、临床特异度 指诊断实验检查确定未患病的百分率 临床特异度=检查结果为阴性的人数/全部受检未患病的人数693、参考值：系指一个地区的健康人、参考值：系指一个地区的健康人群中，规定假设干条规格标准，在群中，规定假设干条规格标准，在总体中抽样进行调查测定，将测定总体中抽样进行调查测定，将测定结果经统计学处理求出均值和标准结果经统计学处理求出均值和标准差，通常将均值定为参考值，将差，通常将均值定为参考值，将X2S定为参考范围。定为参考范围。704、似、似 然然 比比Likelihood ratio；LR 似然比指的是患某种疾病的患者进行某种检测所得的指定数值范围内敏感度和特异度之间关系.阳性似然比：诊断实验的真阳性率与假阳性率之比。PLR=敏感度/1-特异度阴性似然比：诊断实验的假阴性与真阴性之比。NLR=1-敏感度/特异度5、ROC 曲曲 线线 ROC曲线曲线(Receiver OperatorCharacteristic curve)：真阳性率对假阳性率：真阳性率对假阳性率作图。并将所对应的点连接起来所得到的曲作图。并将所对应的点连接起来所得到的曲线。线。血糖测定及其血糖测定及其sen与与spev血糖血糖（mmol/c）Sen(%)Spe(%)1-spe(%)3.884.444.995.556.106.667.217.778.3398.697.194.388.685.771.464.357.150.08.825.547.669.884.192.596.999.499.691.274.552.430.215.97.53.10.60.4第六节第六节试剂盒的选择和评价试剂盒的选择和评价本节主要内容本节主要内容生化检验试剂的开展生化检验试剂的开展试剂盒的选择和评价试剂盒的选择和评价75临床生化试剂盒临床生化试剂盒临床生化商品试剂与标准临床生化商品试剂与标准液按检测工程组合成一套放在液按检测工程组合成一套放在一个包装盒内叫试剂盒一个包装盒内叫试剂盒reagentkit，或叫试剂组合，或叫试剂组合reagentset。与自动化分析仪匹配的试剂与自动化分析仪匹配的试剂盒的研制、生产和供给走向产盒的研制、生产和供给走向产业化的道路，它无疑是临床生业化的道路，它无疑是临床生化开展史上一个巨大的技术进化开展史上一个巨大的技术进步。步。76试剂盒的分类和开展试剂盒的分类和开展临床生化诊断试剂种类繁多，有液临床生化诊断试剂种类繁多，有液体型、粉剂型、片剂型，有单一试剂、体型、粉剂型、片剂型，有单一试剂、双试剂、干试剂、多试剂等。双试剂、干试剂、多试剂等。纵观近纵观近20多年来的开展，临床生化多年来的开展，临床生化体外诊断试剂盒的分类和开展历史可表体外诊断试剂盒的分类和开展历史可表示如下：示如下：77化学分析法化学分析法 方法学方法学物理性状物理性状组合形式组合形式操作方式操作方式 液体型自配试剂液体型自配试剂液体多剂型试剂液体多剂型试剂手工法多步操作手工法多步操作 酶法分析酶法分析 干粉片型试剂干粉片型试剂 液体单剂型试剂液体单剂型试剂流动离心式分析仪流动离心式分析仪 免疫学法免疫学法 液体型商品试剂液体型商品试剂液体双剂型试剂液体双剂型试剂任选分立式分析仪任选分立式分析仪 干化学法干化学法 干式多层胶片型试剂干式多层胶片型试剂单剂型干片式试剂单剂型干片式试剂 干片式分析仪干片式分析仪78 一液体型试剂一液体型试剂 优优点点是是液液体体型型试试剂剂的的试试剂剂组组分分高高度度均均一一，瓶瓶间间差差异异小小，测测定定重重复复性性好好和和使使用用方方便便；它它也也无无需需参参加加任任何何辅辅助助试试剂剂及及蒸蒸馏馏水水，防防止止了了外外源源性性水水质质对对试剂的影响，性能较稳定，测定结果较为准确。试剂的影响，性能较稳定，测定结果较为准确。缺缺点点是是液液体体型型试试剂剂尤尤其其是是酶酶试试剂剂保保存存时时间间较短，不便于运输。较短，不便于运输。一、液体型试剂和粉片剂型试剂一、液体型试剂和粉片剂型试剂79 所谓液体单试剂就是将某种生化检验工程所用到的试剂科学地混合在一起，组成为一种试剂。应用时，只须将标本和试剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反响，然后用适当的方法检测结果。1液体单试剂液体单试剂80 内源性甘油给甘油三酯测定的干扰。内源性甘油给甘油三酯测定的干扰。内外源性内外源性NH4+NH4+对尿素酶法测定的干扰。对尿素酶法测定的干扰。内源性丙酮酸对内源性丙酮酸对ALTALT、ASTAST测定的干扰等。测定的干扰等。维生素维生素C C和胆红素对和胆红素对TrinderTrinder反响的干扰。反响的干扰。n单试剂存在抗干扰能力差的缺点，给测定结果单试剂存在抗干扰能力差的缺点，给测定结果带来相当大的分析误差。例如：带来相当大的分析误差。例如：81 所所谓谓液液体体双双试试剂剂就就是是将将某某些些生生化化检检测测工工程程所所用用到到的的试试剂剂，按按用用途途科科学学地地分分成成两两类类，分分别别配配成成两两种种试试剂剂，通通常常第第一一试试剂剂参参加加后后可可起起到到全全部部或或局局部部消消除除某某些些内内源源性性干干扰扰的的作作用用，第第二二试试剂剂为为启启动动被被检检测测物物质质反反响响的的试试剂剂，两两种种试试剂剂混混合合后后才才共共同同完完成成被被检检工工程的生化反响。然后用适当的方法检测结果。程的生化反响。然后用适当的方法检测结果。2液体双试剂液体双试剂 82所所谓粉粉剂型型及及片片剂型型试剂，即即是是将将试剂的的各各组分分用用球球磨磨技技术粉粉碎碎成成粉粉剂或或混混合合后后压成成片片剂，使使用用前前再再参参加加指指定定的的溶溶液液复复溶溶成液体成液体试剂。二粉片剂型试剂二粉片剂型试剂83 用固体原料研磨后制成粉剂或片剂，那么存在许多问题：要使试剂各组分混合得非常均匀，技术难度很大；分装过程中的称量误差及复溶时加水量的准确性影响试剂的瓶间差；水质优劣对试剂的稳定性和测定的可靠性有相当大的影响。84 一检查包装是否完整一检查包装是否完整二试剂质量初评二试剂质量初评 三试剂性能特征的评估三试剂性能特征的评估二、试剂盒的选择和评价二、试剂盒的选择和评价85一检查包装是否完整一检查包装是否完整商品试剂盒不仅应具有优质的试剂内容，而商品试剂盒不仅应具有优质的试剂内容，而且应有完整牢固的包装和详尽明确的说明书。且应有完整牢固的包装和详尽明确的说明书。1、外包装、外包装外包装应完整牢固，封口严密。外包装应完整牢固，封口严密。2、内包装、内包装内包装应有清晰完整的标签，牢固贴于容器外表。内包装应有清晰完整的标签，牢固贴于容器外表。3、说明书、说明书内容包括试剂名称、用途、测定原理和技术要求、内容包括试剂名称、用途、测定原理和技术要求、标本要求、卫生部批准的文号等。标本要求、卫生部批准的文号等。86一、说明书审查一、说明书审查 说明书是用户了解和正确使用试剂盒说明书是用户了解和正确使用试剂盒的指南。审查内容包括：的指南。审查内容包括：试剂名称；试剂名称；用途；用途；测定原理和技术要求；测定原理和技术要求；试剂盒内的包装内容；试剂盒内的包装内容；适用仪器；适用仪器；87一、说明书审查一、说明书审查标本要求；标本要求；测定步骤及本卷须知；测定步骤及本卷须知；贮存的条件及有效期；贮存的条件及有效期；性能特征，包括准确度、精确度、性能特征，包括准确度、精确度、特异性、特异性、受干扰的程度、线性范围、参考范受干扰的程度、线性范围、参考范围；围；生产单位名称、地址、生产单位名称、地址、及及。88二试剂质量初评n通过观察试剂的颜色、性状及溶解度等通过观察试剂的颜色、性状及溶解度等对试剂质量进行初步评价。对试剂质量进行初步评价。n粉剂型应均匀无凝块，不粘附瓶壁；粉剂型应均匀无凝块，不粘附瓶壁；n液体型试剂应无沉淀，无混浊，无渗漏。液体型试剂应无沉淀，无混浊，无渗漏。89 三试剂性能特征的评估三试剂性能特征的评估一准确度一准确度二精密度二精密度三干扰物试验三干扰物试验四线性范围四线性范围五稳定性五稳定性90一测定准确度一测定准确度1、通常用回收试验来衡量试剂盒的准确度。回收率越接近、通常用回收试验来衡量试剂盒的准确度。回收率越接近100%，准确率越高，一般以，准确率越高，一般以100%5%为合格。为合格。2、也可以用比照试验来衡量、也可以用比照试验来衡量：将被检试剂盒与公认的参考：将被检试剂盒与公认的参考方法同时测定假设干样本，计算两组结果的相关系数和直线方法同时测定假设干样本，计算两组结果的相关系数和直线回归方程。回归方程。相关系数相关系数在在0.91.0之间，斜率之间，斜率b越接近越接近1.0，截距，截距a越接越接近近0，那么准确度越高，那么准确度越高y=a+bx。b表示比例系统误差，表示比例系统误差，a表示恒定系统误差。表示恒定系统误差。91 二检验精密度二检验精密度试剂批内精密度和批间精密度均以变异系数来表示，试剂批内精密度和批间精密度均以变异系数来表示，一般批间一般批间CV值应大于批内，但二者应无显著差异，否那值应大于批内，但二者应无显著差异，否那么，试剂盒的均一性不符合要求。么，试剂盒的均一性不符合要求。1批内精密度批内精密度同一样品用同一瓶试剂测定同一样品用同一瓶试剂测定10次，求平次，求平均值、标准差、变异系数。均值、标准差、变异系数。2批间精密度批间精密度同一样品，用不同批号的同一样品，用不同批号的10瓶试剂测定，瓶试剂测定，求平均值、标准差、变异系数。求平均值、标准差、变异系数。92三干扰物试验三干扰物试验通过试验观察试剂对干扰物影响的耐受程度。通过试验观察试剂对干扰物影响的耐受程度。方法方法取一混合标本，从中分出几份，分取一混合标本，从中分出几份，分别参加不同以知量的干扰物，然后测定出不同别参加不同以知量的干扰物，然后测定出不同干扰物浓度下的待测物量，比较其测定结果，干扰物浓度下的待测物量，比较其测定结果，从各自的偏差程度即可了解试剂对干扰物的耐从各自的偏差程度即可了解试剂对干扰物的耐受程度。受程度。93 四测定线性范围四测定线性范围n线性范围指该试剂盒按其说明使用时可准确测线性范围指该试剂盒按其说明使用时可准确测量的范围。量的范围。n试剂盒的线性范围应能覆盖临床上的参考值试剂盒的线性范围应能覆盖临床上的参考值范围和常见疾病的医学决定水平，以减少样品稀释范围和常见疾病的医学决定水平，以减少样品稀释重测的时机。一旦线性范围变窄即应废弃。重测的时机。一旦线性范围变窄即应废弃。n造成线性范围变窄的原因常见的有：造成线性范围变窄的原因常见的有：n生产中组份投料量缺乏；生产中组份投料量缺乏；n生产后组分稳定性差；生产后组分稳定性差；n运输和贮存不当等。运输和贮存不当等。94 五稳定性试验五稳定性试验试剂盒稳定性是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其性试剂盒稳定性是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其性能指标的期限。该期限应符合规定的储存期。方法有以下三能指标的期限。该期限应符合规定的储存期。方法有以下三种。种。1原包装试剂的稳定性原包装试剂的稳定性按说明书的保存方法储藏，于不按说明书的保存方法储藏，于不同时期取出一瓶复溶，测定试剂吸光度值、标准品含量、定同时期取出一瓶复溶，测定试剂吸光度值、标准品含量、定值血清含量、线性范围、酶促反响时间曲线或化学反响速度值血清含量、线性范围、酶促反响时间曲线或化学反响速度时间曲线及其他性能指标，直到这些指标变化超出规定值的时间曲线及其他性能指标，直到这些指标变化超出规定值的10%以上的期限，为原包装试剂的稳定期。以上的期限，为原包装试剂的稳定期。952复溶后试剂的稳定性复溶后试剂的稳定性将复溶试剂分别放将复溶试剂分别放在在4、25保存，逐日与新复溶试剂比照，观保存，逐日与新复溶试剂比照，观察上述指标见原包装试剂稳定性，直到测定察上述指标见原包装试剂稳定性，直到测定结果与新复溶试剂的差值结果与新复溶试剂的差值10%以上，这一期限以上，这一期限为复溶后试剂的稳定期。为复溶后试剂的稳定期。3不同温度下的保存期不同温度下的保存期将原包装试剂盒置将原包装试剂盒置25、37、45、4保存，以出现说明试剂变保存，以出现说明试剂变质的指标来确定在不同温度下的保存期。质的指标来确定在不同温度下的保存期。961、医学决定水平？、医学决定水平？2、参考值？、参考值？3、似然比？、似然比？4、变异指数的判断标准？、变异指数的判断标准？5、实验方法的分级？、实验方法的分级？97