生化实验--血糖的测定课件

血糖的血糖的测定定1精选pptu正常人空腹血糖正常人空腹血糖浓度是多少度是多少？u为何能保持恒定何能保持恒定？u糖尿病糖尿病2精选ppt正常人正常人空腹血糖空腹血糖浓度度(fastingplasmaglucose,FPG)为3.89-6.11mmol/L。3精选ppt血糖如何血糖如何维持持稳定？关定？关键酶调节关关键酶如何如何调节：激素：激素调节。常常见的升高血糖的激素：胰高血的升高血糖的激素：胰高血糖素、糖皮糖素、糖皮质激素和激素和肾上腺素。上腺素。降低血糖的激素：胰降低血糖的激素：胰岛素素4精选ppt对糖代糖代谢的的调节：胰胰岛素促素促进组织、细胞胞对葡萄糖的葡萄糖的摄取和利用，加速葡取和利用，加速葡萄糖合成萄糖合成为糖原，糖原，贮存于肝和肌肉中，存于肝和肌肉中，并抑制糖异生，促并抑制糖异生，促进葡萄糖葡萄糖转变为脂脂肪酸，肪酸，贮存于脂肪存于脂肪组织，导致血糖水致血糖水平下降。胰平下降。胰岛素缺乏素缺乏时，血糖，血糖浓度升度升高，如超高，如超过肾糖糖阈，尿中将出，尿中将出现糖，糖，引起糖尿病。引起糖尿病。胰胰岛素是促素是促进合成代合成代谢、调节血糖血糖稳定的定的主要激素主要激素5精选ppt6精选ppt如果如果调节失衡，失衡，结果是什么？高血糖果是什么？高血糖或者低血糖。或者低血糖。低血糖：生理性和病理性。低于低血糖：生理性和病理性。低于2.8 mmol/L。高血糖：生理性和病理性。高于高血糖：生理性和病理性。高于7.1 mmol/L。高于。高于8.89 mmol/L，出，出现糖尿。最常糖尿。最常见病理性高血糖：病理性高血糖：糖尿病。糖尿病。糖尿病：高血糖和糖尿。糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病床特点：三多一少。病因：胰因：胰岛素分泌缺陷和胰素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。素受体缺陷。糖尿病糖尿病诊断断标准？准？7精选ppt 糖尿病（糖尿病（diabetes）是由）是由遗传因素、免疫因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰致胰岛功能减退、胰功能减退、胰岛素抵抗等而引素抵抗等而引发的糖、蛋白的糖、蛋白质、脂肪、水和、脂肪、水和电解解质等一系列代等一系列代谢紊乱紊乱综合合征，征，临床上以床上以高血糖高血糖为主要特点，典型病例可主要特点，典型病例可出出现多尿、多多尿、多饮、多食、消瘦等表、多食、消瘦等表现，即，即“三三多一少多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引会引发并并发症，症，导致致肾、眼、足等部位的衰竭、眼、足等部位的衰竭病病变，且无法治愈。，且无法治愈。8精选ppt糖尿病的糖尿病的类型型型糖尿病型糖尿病又叫青年又叫青年发病型糖病型糖尿病或胰尿病或胰岛素依耐素依耐型糖尿病。型糖尿病。原因：胰腺原因：胰腺产生胰生胰岛素的素的细胞已胞已经彻底底损坏坏,从而完全失从而完全失去了去了产生胰生胰岛素的素的功能功能.治治疗：依：依赖胰胰岛素素治治疗。型糖尿病型糖尿病又叫非胰又叫非胰岛素依耐素依耐型糖尿病。型糖尿病。原因：自身能原因：自身能够产生胰生胰岛素，但素，但细胞胞无法无法对其作出反其作出反应，使胰使胰岛素无法素无法发挥作用。作用。治治疗：需要胰：需要胰岛素素单独或与口服独或与口服药联合合应用的治用的治疗9精选ppt10精选ppt一般正常人一般正常人进食后血糖都会食后血糖都会暂时性升高性升高，进食后食后30分种或分种或60分种可升到最高峰分种可升到最高峰，但，但血糖一般不超血糖一般不超过8.9mmol/L；进食食2小小时后后又会回到空腹水平又会回到空腹水平，这就是人体就是人体对糖的耐糖的耐受受现象。象。什么是口服葡萄糖耐量什么是口服葡萄糖耐量试验（Oralglucosetolerancetest，OGTT）？）？有何有何临床意床意义？11精选ppt口服葡萄糖耐量口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose Oral glucose tolerance testtolerance test，OGTTOGTT）是一种口服葡是一种口服葡萄糖萄糖负荷荷试验，用以了解人体，用以了解人体对进食葡食葡萄糖后的血糖萄糖后的血糖调节能力。能力。通通过OGTTOGTT试验，可以，可以早期早期发现糖代糖代谢异异常，早期常，早期诊断断糖尿病糖尿病(Diabetes(Diabetes Mellitus,DM)Mellitus,DM)，是一种是一种简单、快捷的、快捷的诊断方法。断方法。12精选ppt 实验前三天，受前三天，受试者每日食物中糖含者每日食物中糖含量不量不应低于低于150g，且，且维持正常活持正常活动，影响，影响试验的的药物物应在三天前停用，受在三天前停用，受试前前应空空腹腹10-15h。空腹取血后，5分钟内饮入250ml含75g无水葡萄糖的糖水，妊娠妇女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给予,不超过75g。服糖后半小半小时，1小小时，2小小时，3小小时各抽血一次，作血糖定量各抽血一次，作血糖定量检测。于采血同时，每隔1小时留取尿液作尿糖试验，整个过程不可吸烟，喝咖啡，喝茶或进食。OGTT方法：方法：WTO标准化准化13精选ppt测试前禁食前禁食10-16小小时，清晨空腹，清晨空腹进行。空行。空腹抽静脉血，腹抽静脉血，测空腹静脉血空腹静脉血浆葡萄糖，然葡萄糖，然后成人口服后成人口服75g无水葡萄糖，溶于无水葡萄糖，溶于250ml水水中，中，510分分钟内内饮完。完。饮后后2小小时抽静脉血，抽静脉血，测静脉血静脉血浆葡萄糖。葡萄糖。14精选pptIFG 与 IGT空腹血糖空腹血糖损伤(ImpairedFastingGlucose,IFG)：空腹血糖：空腹血糖6.1mmol/L,但但7.0mmol/L糖耐量受糖耐量受损(ImpairedGlucoseTolerance,IGT)：餐后：餐后2h血糖血糖7.8mmol/L,但但11.1mmol/LIFG和和IGT可以可以说是一种是一种正常人向糖尿正常人向糖尿病的病的过渡状渡状态，这部分人部分人虽然然现在在还不是不是糖尿病，糖尿病，但是将来但是将来发生生2型糖尿病的危型糖尿病的危险性非常高，可以性非常高，可以说是是糖尿病的后糖尿病的后备军。据。据有关研究有关研究报道，每年道，每年5-8%的的IGT者将者将发展展成成为2型糖尿病。型糖尿病。15精选ppt无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常无糖尿病史，有一无糖尿病史，有一过性或持性或持续性糖尿性糖尿无糖尿病史，有明无糖尿病史，有明显糖尿病家族史糖尿病家族史有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖不不够标准准分娩巨大胎儿的分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史女和有巨大胎儿史的个体的个体不明原因不明原因肾病和病和视网膜病网膜病妊娠期、甲亢、感染期出妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者糖尿者OGTT的适应症16精选ppt血糖血糖测定方法定方法无机化学法：如无机化学法：如Folin-Wu法法有机化学法：如有机化学法：如邻甲苯胺法甲苯胺法酶法：己糖激法：己糖激酶法，法，酶法：葡萄糖氧化法：葡萄糖氧化酶法法17精选ppt原理葡萄糖在和碱性原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加混合加热后，可使后，可使 Cu2+还原成原成Cu+，后者与磷，后者与磷钼酸酸试剂作用生成作用生成蓝色色的的钼蓝。通。通过比色法比色法测定定蓝色化合物，色化合物，计算出血糖算出血糖的含量的含量 稳定、准确、定、准确、但但对葡萄糖无特异性，受血中非糖葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物原物质的影响。的影响。空腹正常血糖参考空腹正常血糖参考值 4.46.7mmol/L或或80-120mg/dL无机化学法：无机化学法：Folin-Wu法法18精选ppt有机化学法：有机化学法：邻甲苯胺法甲苯胺法原理：原理：葡萄糖葡萄糖为一含一含醛基的已糖，在酸性条件下加基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成，可脱水生成5-羟甲基甲基-2-呋喃甲喃甲醛，后者与，后者与邻甲苯胺甲苯胺缩合成青色的合成青色的Schiff碱。碱。Schiff碱碱颜色的深浅与色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。品中葡萄糖的含量成正比。评价：操作价：操作简便，由于便，由于邻甲苯胺只与甲苯胺只与醛糖作用而糖作用而显色，故此种色，故此种测定定法不受血液中其他法不受血液中其他还原物原物质的干的干扰，测定定时也无需去除血也无需去除血浆或血清或血清中的蛋白中的蛋白质，因此，因此该实验的特异性的特异性较高。高。19精选ppt酶法：己糖激法：己糖激酶法（法（Hexokinase,HK）n原理：原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。n评价价：本法特异性高，灵敏度高，干本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自因素少，适用于自动化分化分析，析，为葡萄糖葡萄糖测定的参考方法，但是定的参考方法，但是试剂较贵。20精选ppt酶法：葡萄糖氧化法：葡萄糖氧化酶法（法（glucoseoxidase,GOD）葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，GOD)利用氧和水利用氧和水将葡萄糖氧将葡萄糖氧化化为葡萄糖酸葡萄糖酸，并，并释放放过氧化氧化氢。过氧化氧化氢在在过氧化物氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解作用下，分解为水水和氧的同和氧的同时将无色的将无色的4-氨基安替比林与酚氧化氨基安替比林与酚氧化缩合生成合生成红色的色的醌类化合物化合物。红色的深浅在一定范色的深浅在一定范围内与葡萄糖内与葡萄糖浓度成正比，在度成正比，在510nm波波长处测定吸光度，与定吸光度，与标准管比准管比较可可计算出血糖的算出血糖的浓度。度。21精选ppt葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶-过氧化物氧化物酶法原理法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶（GOD）（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2H2O 红色色醌式物式物质过氧化物氧化物酶（POD）Trinder反反应505nm光吸收法光吸收法测定定相相对血糖血糖浓度度22精选ppt实验试剂0.1mol/L磷酸磷酸盐缓冲液冲液(pH7.0)酶试剂取取过氧化物氧化物酶12000U，葡萄糖氧化，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林氨基安替比林10mg，叠氮化，叠氮化钠100mg，溶于磷，溶于磷酸酸缓冲液冲液80ml中，定容至中，定容至100ml，置，置4保存保存酚溶液酚溶液称取重蒸称取重蒸馏酚酚100mg溶于蒸溶于蒸馏水水100ml中，中，用棕色瓶用棕色瓶贮存。存。酶酚混合酚混合试剂将将酶试剂和酚和酚试剂等量混合，等量混合，4下下可存放可存放1个月。个月。葡萄糖葡萄糖标准工作液：准工作液：5mmol/L23精选ppt实验操作操作加入物加入物 BST血清血清(ml)0.01葡萄糖葡萄糖标准液准液(ml)0.01蒸蒸馏水水(ml)0.01工作液工作液(ml)1.01.01.0 混匀，置混匀，置 37 37 水浴保温水浴保温 1515分分钟，每管加蒸每管加蒸馏水水0.5 ml0.5 ml，在，在510nm510nm波波长处比色，以空白管（比色，以空白管（B B管）管）调零，零，读取各管吸光度。取各管吸光度。根据各管吸光度根据各管吸光度计算其血糖算其血糖浓度度。24精选ppt葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶法可直接法可直接测定定脑脊液的脊液的葡萄糖含量，但不能直接葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡定尿液葡萄糖含量。萄糖含量。这是因是因为尿液中的尿酸等尿液中的尿酸等干干扰物物质浓度度过高，可干高，可干扰过氧化物氧化物酶反反应，造成，造成结果假性偏低。果假性偏低。对于血液于血液样品需及品需及时分离分离红细胞。因胞。因为红细胞的酵解将会胞的酵解将会导致致测定定结果偏果偏低。建低。建议测定定样品以草酸品以草酸钾-氟化氟化钠为抗凝抗凝剂以抑制糖酵解。以抑制糖酵解。注意事注意事项25精选ppt严重黄疸、溶血及乳糜重黄疸、溶血及乳糜样血清先制血清先制备无蛋白血无蛋白血滤液，液，然后在然后在进行行测定。定。酶酚混合液一般酚混合液一般现用用现配。配。葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶对 -D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖萄糖约 36%为 型，型，64%为 型。葡萄糖的完全型。葡萄糖的完全氧化需要氧化需要 型到型到 型的型的变旋反旋反应。葡萄糖。葡萄糖变旋旋酶，可加速可加速这一一反反应，延延长孵育孵育时间可达到完成自可达到完成自发变旋旋过程。新配制的葡萄糖程。新配制的葡萄糖标准液主要是准液主要是 型，故型，故须放放置置 2h 以上以上(最好最好过夜夜)，待，待变旋平衡后方可旋平衡后方可应用。用。注意事注意事项26精选ppt计算：算：葡萄糖葡萄糖标准液：准液：5 mmol/L5 mmol/L血清葡萄糖（血清葡萄糖（mmol/Lmmol/L）=A=AT T/A/AS S CCS S参考参考值：3.96.1 mmol/L27精选ppt不同不同检测方法所提供的空腹正常血糖方法所提供的空腹正常血糖参考参考值存在差异。存在差异。葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶法：法：3.96.1mmol/LFolin-Wu法：法：4.46.7mmol/L邻-甲苯胺法：甲苯胺法：3.96.1mmol/L28精选ppt本法本法测定葡萄糖非常特异，从原理反定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反式中可知第一步是特异反应，第二，第二步特异性步特异性较差。差。误差往往差往往发生在反生在反应的第二步。一些的第二步。一些还原性物原性物质如尿酸、如尿酸、维生素生素 C、胆、胆红素和谷胱甘素和谷胱甘肽等，可等，可与色原性物与色原性物质竞争争过氧化氧化氢，从而消，从而消耗反耗反应过程中所程中所产生的生的过氧化氧化氢，产生生竞争性抑制，使争性抑制，使测定定结果偏低。但果偏低。但是是对测定定结果无果无显著影响。著影响。实验误差分析：差分析：29精选ppt葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶法法：该法特异性高，反法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄条件温和，能反映血中葡萄糖的真糖的真实含量，且已推广出含量，且已推广出试剂盒，广泛盒，广泛应用与用与临床。床。Folin-Wu法法：该法法对葡萄糖无特异性，一切葡萄糖无特异性，一切还原物原物质均可均可产生同生同样的反的反应。虽血液中葡萄糖血液中葡萄糖为主要主要还原物原物质，但仍存在其他非糖，但仍存在其他非糖还原原物物质，故，故该法其参考法其参考值较其他方法略高。其他方法略高。邻-甲苯胺法甲苯胺法：该法涉及法涉及强酸、加酸、加热等反等反应条件，不便于大条件，不便于大规模模检测，且且邻甲苯胺甲苯胺须蒸蒸馏后使用，有毒性，后使用，有毒性，临床和科研上已很少采用。床和科研上已很少采用。血糖血糖测定方法特点定方法特点30精选ppt31精选pptTHE END32精选ppt