细胞化学染色实验课件

资料仅供参考,不当之处，请联系改正。一、过氧化物酶一、过氧化物酶(Peroxidase Stain，POX)染色染色【目的和原理目的和原理】细胞内的过氧化物酶能将底物的过氧细胞内的过氧化物酶能将底物的过氧化氢分解，产生新生态氧。后者将试剂中化氢分解，产生新生态氧。后者将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，后者与亚硝基的联苯胺氧化为联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，进而形成棕色化合物沉淀铁氰化钠结合，进而形成棕色化合物沉淀于酶的所在部位。于酶的所在部位。一、过氧化物酶(Peroxidase Stain，POX)染1 1资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【器材和试剂器材和试剂】1第一液第一液 联苯胺联苯胺 03g 360gL亚硝基铁氰化钠饱和液亚硝基铁氰化钠饱和液 lml 95L醇醇 加至加至 lOOml 贮存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分装贮存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分装备用。备用。2第二液第二液 (稀过氧化氢液，新鲜配制稀过氧化氢液，新鲜配制)3过氧化氢过氧化氢 03ml 蒸馏水蒸馏水 25ml【器材和试剂】2 2资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【步骤和方法步骤和方法】1于新鲜干燥血涂片或骨髓涂片上，滴加第于新鲜干燥血涂片或骨髓涂片上，滴加第一液一液5-8滴，使盖满整个血膜，作用滴，使盖满整个血膜，作用1-2min.2滴加等量的第二液，混匀，染滴加等量的第二液，混匀，染4-8min。3勿倾去染液，直接用水冲洗。勿倾去染液，直接用水冲洗。4干燥后再用瑞氏染液复染。干燥后再用瑞氏染液复染。【步骤和方法】3 3资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【结果结果】在细胞的胞浆中出现蓝色或蓝棕色颗粒为阳在细胞的胞浆中出现蓝色或蓝棕色颗粒为阳性反应。性反应。1阳性反应强度的判断：阳性反应强度的判断：阴性：无颗粒。阴性：无颗粒。弱阳性：颗粒小，分布稀疏。弱阳性：颗粒小，分布稀疏。阳性：颗粒略粗，分布较密集。阳性：颗粒略粗，分布较密集。强阳性：颗粒粗大，密布于整个胞质中。强阳性：颗粒粗大，密布于整个胞质中。【结果】4 4资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2粒细胞系统：早期原始粒细胞阴性，晚粒细胞系统：早期原始粒细胞阴性，晚期期(分化好分化好)原始粒细胞以下各阶段呈阳性，原始粒细胞以下各阶段呈阳性，粒细胞越成熟粒细胞越成熟POX反应越强。但衰老的中反应越强。但衰老的中性粒细胞酶活性降低，反应程度减弱，甚性粒细胞酶活性降低，反应程度减弱，甚至呈阴性反应。嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，至呈阴性反应。嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色，嗜碱性粒细胞阴性。呈深蓝色，嗜碱性粒细胞阴性。2粒细胞系统：早期原始粒细胞阴性，晚期(分化好)原始粒细5 5资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3单核细胞系统：除早期原始阶段外皆呈弱单核细胞系统：除早期原始阶段外皆呈弱阳性反应。其颗粒细小，弥散分布，可覆阳性反应。其颗粒细小，弥散分布，可覆盖核上，有的也可呈阴性反应。盖核上，有的也可呈阴性反应。4正常网状细胞正常网状细胞(分化型分化型)及吞噬细胞：可呈及吞噬细胞：可呈不同程度阳性反应。不同程度阳性反应。5淋巴细胞、浆细胞、红细胞、巨核细胞系淋巴细胞、浆细胞、红细胞、巨核细胞系统等：均为阴性。统等：均为阴性。6Auer小体：呈阳性。小体：呈阳性。3单核细胞系统：除早期原始阶段外皆呈弱阳性反应。其颗粒细小6 6资料仅供参考,不当之处，请联系改正。细胞化学染色实验课件7 7资料仅供参考,不当之处，请联系改正。细胞化学染色实验课件8 8资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【临床意义临床意义】POX染色是鉴别急性粒细胞白血病染色是鉴别急性粒细胞白血病(简简称急粒称急粒)、急性单核细胞白血病、急性单核细胞白血病(简称急单简称急单)、急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病(简称急淋简称急淋)类型的重要类型的重要细胞化学方法。细胞化学方法。【临床意义】9 9资料仅供参考,不当之处，请联系改正。1急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原始粒细胞呈阳性反应，阳性率可始粒细胞呈阳性反应，阳性率可30%，在分化较差的白血病，如在分化较差的白血病，如AML-M0和未分和未分化型（化型（AML-M1）的部分病例，原粒细胞）的部分病例，原粒细胞的的POX染色也可呈阴性。染色也可呈阴性。2急性早幼粒细胞白血病时白血病细胞呈强急性早幼粒细胞白血病时白血病细胞呈强阳性反应。阳性反应。1急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原始粒细胞呈阳性反应，1010资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3急性淋巴细胞呈阴性反应，急性淋巴细胞呈阴性反应，FAB分型规定分型规定POX阳性率阳性率20%，但难于区，但难于区分原粒和原单时可进一步作酯酶染色鉴别。分原粒和原单时可进一步作酯酶染色鉴别。3急性淋巴细胞呈阴性反应，FAB分型规定POX阳性率3%，阳性颗粒较为细小、稀疏。，阳性颗粒较为细小、稀疏。细胞化学染色实验课件1212资料仅供参考,不当之处，请联系改正。6、中性粒细胞髓过氧化酶缺陷症：中性粒、中性粒细胞髓过氧化酶缺陷症：中性粒细胞细胞POX染色，纯合子呈阴性，杂合子多染色，纯合子呈阴性，杂合子多为弱阳性。在一些髓系细胞白血病，如部为弱阳性。在一些髓系细胞白血病，如部分慢性髓细胞白血病（分慢性髓细胞白血病（CML）患者，中性）患者，中性粒细胞粒细胞POX染色可呈阴性或弱阳性，提示染色可呈阴性或弱阳性，提示POX获得性缺陷。获得性缺陷。6、中性粒细胞髓过氧化酶缺陷症：中性粒细胞POX染色1313资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【注意事项注意事项】1过氧化氢必须新鲜配制。过氧化氢的最适过氧化氢必须新鲜配制。过氧化氢的最适浓度是浓度是005molL左右，浓度过高，反左右，浓度过高，反而抑制酶作用。一般采用而抑制酶作用。一般采用5ml蒸馏水，加蒸馏水，加3过氧化氢一滴。若用过氧化氢一滴。若用30的过氧化氢时，的过氧化氢时，只能在只能在100ml蒸馏水中加蒸馏水中加12滴。涂片中滴。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示过氧化氢过浓。若过氧化氢加绿色，即示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示无效。于血片上不产生气泡，则示无效。【注意事项】1414资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.染色时稀释过氧化氢之后必须与联苯胺液染色时稀释过氧化氢之后必须与联苯胺液充分混合，否则同一涂片细胞染色情况不充分混合，否则同一涂片细胞染色情况不一致。一致。2.染色时稀释过氧化氢之后必须与联苯胺液充分混合，否则同一涂1515资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【评价评价】POX染色是鉴别急性白血病类型最常染色是鉴别急性白血病类型最常用的细胞化学染色方法。但若原始细胞均用的细胞化学染色方法。但若原始细胞均呈阴性（阳性率呈阴性（阳性率10粒。粒。(3)细胞内铁：用油镜计数100个中、晚幼红细胞，记录胞浆中2222资料仅供参考,不当之处，请联系改正。(4)环形铁粒幼红细胞的标准为含铁粒在环形铁粒幼红细胞的标准为含铁粒在6粒粒以上，其中以上，其中23以上的铁粒围核成完全或以上的铁粒围核成完全或不完全性环形不完全性环形(围核围核12以上的区域有铁粒以上的区域有铁粒环绕环绕)。(4)环形铁粒幼红细胞的标准为含铁粒在6粒以上，其中23以2323资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【临床意义临床意义】1参考值参考值 细胞外铁细胞外铁+-+(23人为人为“+”，13人为人为“+”)。细胞内铁阳性。细胞内铁阳性率为率为19-44，平均，平均214，以，以I型为型为主，少数为主，少数为型，所见铁粒较细而浅染，型，所见铁粒较细而浅染，散在分布，一般位于胞浆的外侧，散在分布，一般位于胞浆的外侧，及及型以及环形铁粒幼红细胞少见。型以及环形铁粒幼红细胞少见。【临床意义】2424资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2鉴别缺铁性贫血及某些溶血性贫血。鉴别缺铁性贫血及某些溶血性贫血。缺铁性贫血骨髓细胞外铁和内铁显著减少缺铁性贫血骨髓细胞外铁和内铁显著减少或消失，铁粒幼红细胞阳性率或消失，铁粒幼红细胞阳性率0-28，平，平均均34，所见铁粒极细少而着色浅，以，所见铁粒极细少而着色浅，以I型为主，型为主，型者极少见，型者极少见，型以上者不型以上者不见见。2鉴别缺铁性贫血及某些溶血性贫血。缺铁性贫血骨髓细2525资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3用于诊断铁粒幼红细胞性贫血用于诊断铁粒幼红细胞性贫血 这时能这时能找到数量不等的环型铁粒幼红细胞，并多找到数量不等的环型铁粒幼红细胞，并多见粗颗粒的见粗颗粒的型与型与型铁粒幼红细胞。型铁粒幼红细胞。3用于诊断铁粒幼红细胞性贫血 这时能找到数量不等2626资料仅供参考,不当之处，请联系改正。【注意事项注意事项】1玻璃片需经无铁处理玻璃片需经无铁处理 将新片经清洁液将新片经清洁液浸泡浸泡24h，取出反复水洗后浸入，取出反复水洗后浸入95%酒精酒精中中24h，晾干，再浸泡在，晾干，再浸泡在5盐酸中盐酸中24h，用双重蒸馏水反复浸洗玻片，取出烤干后用双重蒸馏水反复浸洗玻片，取出烤干后备用。备用。2酸性亚铁氰化钾液须新鲜配制。酸性亚铁氰化钾液须新鲜配制。3水洗时勿在水流下猛冲，以免髓粒脱落水洗时勿在水流下猛冲，以免髓粒脱落。【注意事项】2727