梅毒实验室检测技术剖析课件

梅毒实验室检测技术剖析梅毒实验室检测技术剖析16、人民应该为法律而战斗，就像为了城墙而战斗一样。赫拉克利特17、人类对于不公正的行为加以指责，并非因为他们愿意做出这种行为，而是惟恐自己会成为这种行为的牺牲者。柏拉图18、制定法律法令，就是为了不让强者做什么事都横行霸道。奥维德19、法律是社会的习惯和思想的结晶。托伍威尔逊20、人们嘴上挂着的法律，其真实含义是财富。爱献生梅毒实验室检测技术剖析16、人民应该为法律而战斗，就像为了城1梅毒实验室检测技术剖析课件2梅毒实验室检测技术剖析课件3梅毒实验室检测技术剖析课件4梅毒实验室检测技术剖析课件5结果如何解读和合理应用结果如何解读和合理应用6如何发挥实验室检测作用实验室检测实验室检测 实验室诊断实验室诊断艾滋病检测策略最新进展（艾滋病检测策略最新进展（2019）v 确证（诊）试验 补充试验v 阳、阴性有、无反应v 增加了各种检测策略v 强调临床诊断 如何发挥实验室检测作用实验室检测 实验室诊断7梅毒是一个可以临床治愈的传染病病例诊断依据v病史v症状v实验室检查实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义梅毒是一个可以临床治愈的传染病病例诊断依据8如和达到实验室检测的基本要求检测方法检测方法检测策略检测策略质量保证质量保证管理层面（行政、疾控）生产厂家医疗机构（医生、检验、防保）如和达到实验室检测的基本要求检测方法管理层面9常用梅毒实验室检测方法检测方法病原学检测梅毒螺旋体血清学试验非梅毒螺旋体血清学组织病理学检测白细胞检测蛋白检测常用梅毒实验室检测方法检测方法病原学检测10未经治疗的梅毒病人的自然病程感染梅毒螺旋体感染梅毒螺旋体一期梅毒一期梅毒二期梅毒二期梅毒隐形梅毒隐形梅毒三期梅毒三期梅毒梅毒树胶肿梅毒树胶肿脊髓痨脊髓痨,麻痹性痴呆麻痹性痴呆心血管梅毒心血管梅毒72%30%终生隐形梅毒终生隐形梅毒中枢神经系统感染中枢神经系统感染28%感染梅毒螺旋体感染梅毒螺旋体2-62-6周周1-3月月 1-3月月2-50年年未经治疗的梅毒病人的自然病程感染梅毒螺旋体一期梅毒二期梅毒隐11病原学检查v原理：一期、二期梅毒时一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。v方法：（1）暗视显微镜检查 （2）镀银染色法 （3）核酸检测（血液标本？）注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。病原学检查12病原学检查的临床意义v螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。v如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。病原学检查的临床意义螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于13梅毒血清学检测方法(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。问题：问题：问题：问题：为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？梅毒血清学检测方法14非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理v梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）。v未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。中华人民共和国卫生行业中华人民共和国卫生行业标准标准 WS/T4912019:梅毒非特异性抗体检测操作指南梅毒非特异性抗体检测操作指南-发布发布 -实施实施非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可15非梅毒螺旋体抗原血清学原理v方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验(VDRL)等。v基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇v抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见v上述方法的敏感性和特异性都基本相似非梅毒螺旋体抗原血清学原理16非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图17非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪，转速？转幅？水平旋转仪，转速？转幅？2、定性试验n加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内均匀地涂布在整个圈内n加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1 1滴抗原滴抗原n反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29），亮光下观察结果？滴/mL，1滴=？ul非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1、仪器：水平旋转仪，转速18非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪，转速、转幅水平旋转仪，转速、转幅 2、定性试验n加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内均匀地涂布在整个圈内n加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1 1滴抗原滴抗原n反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29），亮光下观察结果60滴/mL，1滴=17ul100r/min约18mm非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1、仪器：水平旋转仪，转速19非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验n稀释夜准备：在反应纸板圈内反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开n加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。n 下同定性试验。？1:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512问题：定量试验原倍血清滴度是多少？问题：定量试验原倍血清滴度是多少？问题：定量试验原倍血清滴度是多少？问题：定量试验原倍血清滴度是多少？问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验？1:21:420非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验n稀释夜准备：在反应纸板圈内反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开n加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。n 下同定性试验。1:11:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验1:11:2121非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义v非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。v因治疗后血清滴度可下降并阴性，故（1）可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；（2）结梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒现症感染和既往感染vVDRL试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验方法22血清固定血清固定早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后v 一期梅毒1年后转为阴性v 二期梅毒2年后转为阴性。v 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。血清固定：一直保持低滴度，不转阴血清固定：一直保持低滴度，不转阴 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点血清固定非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点231:11:21:81:41:16非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点前带现象前带现象1:11:21:81:41:16非梅毒螺旋体抗原血清学试验特24非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点假阳性反应假阳性反应v技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可排除。v生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应采用梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验如TPPA等进行排除。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点假阳性反应25梅毒螺旋体抗原血清学试验原理v抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。v感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。问问问问题题题题：梅梅梅梅毒毒毒毒螺螺螺螺旋旋旋旋体体体体抗抗抗抗原原原原血血血血清清清清学学学学试试试试验验验验的的的的定定定定量量量量试试试试验验验验在梅毒诊疗中有意义吗？在梅毒诊疗中有意义吗？在梅毒诊疗中有意义吗？在梅毒诊疗中有意义吗？梅毒螺旋体抗原血清学试验原理抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺26梅毒螺旋体抗原血清学试验方法v梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)v 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)v 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）v 化学发光免疫分析法（CLIA）v 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)v 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）v梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）-IgM、IgG梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPP27TPPATPPAvTPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。v TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。TPPATPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅毒28+明胶颗粒明胶颗粒梅毒抗原梅毒抗原+抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒血液中抗体血液中抗体抗原抗体凝集抗原抗体凝集TPPATPPA试验原理示意图+明胶颗粒梅毒抗原+抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒血液中抗体抗原抗294+：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 3+：粒子光滑覆盖大部分底 2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 1+：粒子光滑集聚覆概孔底，周围有一明显细胞环 ：粒子沉集孔底，中央形成一小点 ：粒子紧密沉积孔底中央 TPPATPPA试验结果判读a:均为RPR阳性标本304+：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 ELISA/ELISA/CLIACLIAvELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。v本法可用于大样本血清检测。化学发光法的临床应用意义基本同ELISA化学发光法的敏感性？ELISA/CLIA31梅毒免疫层析快速检测方法（全血法）32梅毒免疫层析快速检测方法（全血法）32梅毒免疫层析快速检测方法（血清、血浆法）梅毒免疫层析快速检测方法（血清、血浆法）33梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义v作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验，排除RPR 假阳性。v不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。v不能作为疗效观察的指标。梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(34梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据）问题问题：此：此结结果解果解释释适用于先天（胎适用于先天（胎传传）梅毒）梅毒吗吗？35梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据）问题：此结果梅毒IgMIgM抗体（TP-IgMTP-IgM）IgM抗体的产生是感染后的早期体液免疫应答反应。IgM分子比IgG较大，所以IgM抗体不能通过胎盘屏障。而母亲的IgG抗体可以通过胎盘屏障传给胎儿。因此若在新生儿血中检测到IgG抗体不能作为先天梅毒的诊断依据，而IgM抗体可为先天梅毒的诊断依据。IgM抗体检测其特异性较高，但敏感性较低。因此，IgM抗体检测阴性，不能排除先天梅毒感染。36梅毒IgM抗体（TP-IgM）IgM抗先天梅毒的诊断先天梅毒的诊断标准先天梅毒的诊断标准梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：1.暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性2.梅毒螺旋体IgM抗体阳性*3.RPR/TRUST检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上4.RPR/TRUST检测随访中，任何一次滴度不下降或反而上升5.满18月龄后，TPPA检测阳性37先天梅毒的诊断先天梅毒的诊断标准373838梅毒实验室检测策略梅毒实验室检测策略梅毒实验室检测技术剖析课件39梅毒实验室检测策略思考40非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验n排除试验假阳性排除试验假阳性n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染n排除治愈的既往感染者排除治愈的既往感染者n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染？RPR：初筛试验：初筛试验 TPPA：确证试验：确证试验梅毒实验室检测策略思考40非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺404141阳性 梅毒螺旋体血清试验（ELISA）阴性 报告：ELISA 阴性阴性 阳性 RPR 定性/定量试验 阴性 推荐 TPPA 复检 阳性 报告：ELISA 阳性 RPR 阳性及滴度 果 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阳性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阴性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 RPR 阴性 果 42阳性 梅毒螺旋体血清试验（ELISA）阴性 报告：E4343阳性 梅毒螺旋体血清试验（ELISA）阴性 报告：ELISA 阴性阴性 阳性 RPR 定性/定量试验 阴性 推荐 TPPA 复检 阳性 报告：ELISA 阳性 RPR 阳性及滴度 果 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阳性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阴性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 RPR 阴性 果 梅毒筛查最佳策略 44阳性 梅毒螺旋体血清试验（ELISA）阴性 报告：E梅毒实验室检测技术剖析课件452019非梅毒螺旋体血清学试剂评估非梅毒螺旋体血清学试剂评估462019非梅毒螺旋体血清学试剂评估462019梅毒螺旋体抗原血清学试剂评估梅毒螺旋体抗原血清学试剂评估472019梅毒螺旋体抗原血清学试剂评估47实验室生物安全防护要求v一级生物安全防护水平：适用于第四类病原微生物v二级生物安全防护水平：适用于第三类病原微生物二级生物安全防护水平：适用于第三类病原微生物v三级生物安全防护水平：适用于第二类病原微生物v四级生物安全防护水平：适用于第一类病原微生物48一般临床血标本处理是否需要在几级生物安全实验室操作一般临床血标本处理是否需要在几级生物安全实验室操作?实验室生物安全防护要求一级生物安全防护水平：适用于第四类病原48梅毒实验室安全生物暴露a)不慎发生标本污染工作台，不要立即用水冲洗，应先用纸巾、布等敷料加上消毒液（如10%次氯酸钠，75%乙醇等）消毒30分钟以上，然后再清洗。如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。b)实验时手部污染，应立即用肥皂洗手并冲洗干净，再外用消毒药水，如误入口内，应立即吐出，并用清水反复漱口，必要时根据实际情况用药。c）被刺伤、划伤等，应先挤压后冲洗，再擦以碘酒等简单处理后，立即到医院接受青霉素治疗，同时应做梅毒血清学检测（？）d)出现与所检测对检测对象引起的疾病相似症状时，立即就医。49梅毒实验室安全生物暴露a)不慎发生标本污染工作台，不要立即49梅毒控制规划中期评估梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（梅毒实验室检测知识调查（1）1.一旦感染梅毒，梅毒螺旋体特异性抗体通常会终身阳性 2.RPR/TRUST只能用于梅毒初筛3.二期梅毒时，TPPA和RPR两种血清学试验100阳性4.接受抗梅治疗的婴儿，随访18个月后TPPA（+）/RPR（-）可确诊为胎传梅毒 5.常规梅毒血清学检测的是IgG抗体，不能检测到IgM抗体6.TPPA（-）/RPR（+）结果一般可排除梅毒螺旋体感染 7.TPPA滴度检测是临床治疗梅毒效果评价的重要参考指标 50梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（1）1.一旦梅毒控制规划中期评估梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（梅毒实验室检测知识调查（2）8.新生儿血清TPPA（+）/RPR（+），可诊断为先天梅毒9.梅毒初筛可采用任何一种血清学检测方法10.RPR和TRUST的方法原理相同，所以两种方法的定量试验滴度结果一定一致11.TPPA（+）/RPR（-）可能是极早期梅毒12.ELISA法检测阳性，TPPA复检阴性，最终结果报告：TPPA试验阴性，解释ELISA法为假阳性。51梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（2）8.新Thank You!52Thank You!52END16、业余生活要有意义，不要越轨。华盛顿17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。罗素贝克18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。马云19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。雷锋20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。布尔沃END16、业余生活要有意义，不要越轨。华盛顿53