肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法培训ppt课件

肿肿瘤瘤动动物模型和抗物模型和抗肿肿瘤瘤药药物的研究方法物的研究方法肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法1提纲提纲化疗药物的发展肿瘤的药物治疗抗肿瘤新药的发现和治疗靶点抗肿瘤药物筛选及评价2肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法提纲化疗药物的发展2肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法2化疗药物的发展n近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。n50年代通过动物筛选化疗药物发现了5FU、MTX、CTX等，化疗学有了发展。n60年代认识到肿瘤细胞动力学及化疗药药代动力学的重要性。大部分目前所用的抗癌药已发现，有急淋、HD、睾丸癌等可化疗治愈。3肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法化疗药物的发展近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。3肿瘤动物3n70年代形成肿瘤内科学，更多肿瘤有了比较成熟的化疗方案。n80年代研究以生物反应修饰剂等药物来提高化疗疗效，探索抗药性产生的原因，5%肿瘤患者可治愈。n90年代新抗癌药进入临床，多药耐药基因发现，生物治疗，基因治疗辅助治疗改善等，疗效进一步提高。4肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法70年代形成肿瘤内科学，更多肿瘤有了比较成熟的化疗方案。4肿45肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法5肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法51、细胞毒类抗肿瘤药细胞毒类抗肿瘤药2、以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物3、肿瘤新生血管生成抑制药物肿瘤新生血管生成抑制药物4、肿瘤耐药逆转剂肿瘤耐药逆转剂5、分化诱导剂分化诱导剂6、基因调节药物、基因调节药物7、单克隆抗体药物、单克隆抗体药物肿瘤的药物治疗肿瘤的药物治疗6肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法1、细胞毒类抗肿瘤药肿瘤的药物治疗6肿瘤动物模型和抗肿瘤药物6a、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂b、胸苷酸合成酶抑制剂、胸苷酸合成酶抑制剂c、铂类抗肿瘤药物、铂类抗肿瘤药物1、细胞毒类抗肿瘤药细胞毒类抗肿瘤药7肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法a、拓扑异构酶抑制剂1、细胞毒类抗肿瘤药7肿瘤动物模型和抗肿7原理：真核细胞DNA拓扑异构酶（Topo)是生物体内及其重要的细胞核内酶，参与DNA复制、转录和修复等所有关键的核内过程。DNA拓扑异构酶已成为重要的抗肿瘤药物研究新靶点。拓扑异构酶抑制剂已成为高选择性抗肿瘤药物研究的一个主攻方向。代表药物：喜树碱类化合物对S期的毒性作用，这一作用需共价TopoIDNA复合物的形成和DNA复制。TopoI抑制剂诱导的细胞凋亡而非DNA断裂是引起细胞最终死亡的原因。a、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂8肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：a、拓扑异构酶抑制剂8肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究8原理：胸苷酸合成酶（TS）把单磷酸脱氧尿嘧啶（DUMP）转换成单磷酸胸腺嘧啶（TMP），在DNA复制和细胞生长过程中起着关键作用。是已知抗肿瘤药物的重要有效靶点之一。胸苷酸合成酶抑制剂导致了DNA断裂从而导致细胞死亡。代表药物：培美曲塞它是一种结构上含有核心为吡咯嘧啶基团的抗叶酸制剂，通过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞复制，从而抑制肿瘤的生长。体外研究显示，培美曲塞能够抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰核苷酸甲酰转移酶活性，这些酶都是合成叶酸所必需的酶。一旦培美曲塞进入细胞内，它就在叶酰多谷氨合成酶的作用下转化为多谷氨酸的形式。多谷氨酸存留于细胞内成为胸苷酸合成酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶的抑制剂。多谷酸化在肿瘤细胞内呈现时间-浓度性过程，而在正常组织内浓度很底。多谷氨酸化代谢物在肿瘤细胞内的半衰期延长，从而也就延长了药物在肿瘤细胞内的作用时间。b、胸苷酸合成酶抑制剂、胸苷酸合成酶抑制剂9肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：b、胸苷酸合成酶抑制剂9肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研9原理：铂络合物产生抗肿瘤活性的原因，是由于其与肿瘤细胞DNA结合，从而干扰DNA的复制，抑制肿瘤细胞的分裂。代表药物：顺铂和奥沙利铂c、铂类抗肿瘤药物、铂类抗肿瘤药物10肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：c、铂类抗肿瘤药物10肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究10a、蛋白酪氨激酶（PTK）抑制剂b、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂C、法尼基转移酶抑制剂2、以细胞信号转导分子以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物为靶点的抗肿瘤药物11肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法a、蛋白酪氨激酶（PTK）抑制剂2、以细胞信号转导分子为靶点11原理：通过扩散进入肿瘤细胞，与EGFR的胞内段激酶结合区结合，从而抑制EGFR受体的磷酸化，阻断受体下游信号通路的传导，发挥抗肿瘤作用。代表药物：吉非替尼研究表明吉非替尼的作用通过上调P27KIP1和P21CIP/WAF1的表达，导致细胞G1期阻滞或诱导细胞凋亡。b、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂12肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：通过扩散进入肿瘤细胞，与EGFR的胞内段激酶1213肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法13肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法13原理：法尼基转移酶是近年来发现的与Ras蛋白异戊二烯化修饰密切相关的一种必需酶。抑制法尼基转移酶活性，阻止Ras蛋白的活化，可以有效地抑制肿瘤细胞的增殖代表药物：替匹法尼c、法尼基转移酶抑制剂法尼基转移酶抑制剂14肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：c、法尼基转移酶抑制剂14肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研14原理：原理：原发肿瘤的生长和转移是依赖于新生血管生成的，开发和研究能够破坏或原发肿瘤的生长和转移是依赖于新生血管生成的，开发和研究能够破坏或抑制血管生成、有效地抑制肿瘤生长和转移的药物（称为抑制血管生成、有效地抑制肿瘤生长和转移的药物（称为TA 抑制剂），抑制剂），是新型抗肿瘤药物研究的活跃领域之一。是新型抗肿瘤药物研究的活跃领域之一。代表药物：代表药物：angiostatin和和endostatin AvastinEndostatin可直接与血管内皮细胞受体结合抑制内皮细胞的增生；可直接与血管内皮细胞受体结合抑制内皮细胞的增生；可与肝素样的硫酸蛋白结合，抑制血管生成；可与肝素样的硫酸蛋白结合，抑制血管生成；可抑制可抑制VEGF等血管生长因子，从而抑制内皮细胞的增殖等血管生长因子，从而抑制内皮细胞的增殖 与肿瘤与肿瘤的生长；的生长；可抑制抗凋亡蛋白可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x1,促使血管内皮细胞凋亡加速。促使血管内皮细胞凋亡加速。3、肿瘤新生血管生成抑制药物肿瘤新生血管生成抑制药物15肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：3、肿瘤新生血管生成抑制药物15肿瘤动物模型和抗肿瘤药1516肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法16肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法1617肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法17肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法17原理：原理：根据肿瘤耐药的特点可分为原药耐药根据肿瘤耐药的特点可分为原药耐药(PDR)和多药耐药和多药耐药(MDR)两大类。前者只对两大类。前者只对诱导药物产生耐药性而对其它药物不产生交叉耐药性，如抗代谢药甲氨蝶呤诱导药物产生耐药性而对其它药物不产生交叉耐药性，如抗代谢药甲氨蝶呤(MTX)，5-氟尿嘧啶氟尿嘧啶(5-Fu)等；后者则是指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药等；后者则是指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机制各异的药物也产生交叉耐药性，这是一种性，同时对其它结构上无关、作用机制各异的药物也产生交叉耐药性，这是一种独特的广谱耐药现象。许多天然来源的抗肿瘤药物如秋水仙碱、紫杉醇等及蒽环独特的广谱耐药现象。许多天然来源的抗肿瘤药物如秋水仙碱、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如阿霉素、柔红霉素都极易发生类抗癌抗生素如阿霉素、柔红霉素都极易发生MDR。肿瘤耐药产生的可能原因是药物代谢障碍、肿瘤耐药产生的可能原因是药物代谢障碍、DNA修复机制障碍、修复机制障碍、DNA多聚酶活性多聚酶活性改变等。另外，耐药是凋亡抑制的表现。一些与凋亡抑制相关的癌基因改变等。另外，耐药是凋亡抑制的表现。一些与凋亡抑制相关的癌基因(如如bcl-2,bcr/abl,NF/KB等等)的表达产物可阻断或阻碍多种因素的表达产物可阻断或阻碍多种因素(如化疗药物、辐射、激素如化疗药物、辐射、激素等等)诱导的肿瘤细胞凋亡，产生耐药性。诱导的肿瘤细胞凋亡，产生耐药性。研究表明研究表明MDR的产生是由于细胞内药物的产生是由于细胞内药物积聚发生障碍，此后研究证实细胞内药物积聚降低的同时，有一分子量约为积聚发生障碍，此后研究证实细胞内药物积聚降低的同时，有一分子量约为170 000细胞膜蛋白过度表达，称之为细胞膜蛋白过度表达，称之为P-糖蛋白糖蛋白(Pgp)代表药物：钙拮抗药（维拉帕米及其衍生物）、钙调蛋白拮抗药（包括氯丙嗪等代表药物：钙拮抗药（维拉帕米及其衍生物）、钙调蛋白拮抗药（包括氯丙嗪等吩噻嗪类衍生物）、环孢素类（环孢素及其衍生物吩噻嗪类衍生物）、环孢素类（环孢素及其衍生物PSC833，SDZ280-466等）及等）及抗雌激素类化合物（他莫昔芬）等。抗雌激素类化合物（他莫昔芬）等。4、肿瘤耐药逆转剂、肿瘤耐药逆转剂18肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：4、肿瘤耐药逆转剂18肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方18EXTRACELLULAREXTRACELLULARINTRACELLULARINTRACELLULARATPATPPGPPGP170170ATPATPDrugDrugDrugDrugPlasmaPlasmaMembraneMembrane19肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法EXTRACELLULARINTRACELLULARATP19 环胞菌素A(CsA)是一种从真菌属中提取的天然药物，具有选择性的免疫抑制功能，广泛用于器官移植后的抗排斥反应及治疗免疫性疾病。它能竞争性的和Pgp结合，阻断Pgp泵出药物的功能，提高胞内药物浓度，从而对抗MDR，通过进一步研究表明，CsA的作用机制并非单一，除了通过结合Pgp而调节药物浓度外，还可通过与细胞内，靶结构之间的相互作用而增加化学敏感因子自身的细胞毒性。CsA在MDR中可调节药物的运输，使抗癌药在细胞内积累增加，外排减少，从而增加抗肿瘤药物的敏感性。20肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法20肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法20原理：通过诱导肿瘤细胞凋亡达到肿瘤缩小、消退的目的已成为当今肿瘤治疗的研究热点。促进恶性细胞向成熟分化的抗癌药物称分化诱导剂。代表药物：维A酸类化合物咪唑衍生物利阿唑5、分化诱导剂、分化诱导剂21肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法原理：5、分化诱导剂21肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法21维A酸类化合物维甲酸类化合物(Retinoicacids)在调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动中起重要作用。其在体内的生理活性代谢产物包括全反式维甲酸(ATRA)、13-顺维甲酸(13-cis-RA)和9-顺维甲酸(9-cis-RA)，它们可通过核维甲酸受体(RAR)结合于DNA应答元件，从而调节靶基因的转录。22肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法维A酸类化合物维甲酸类化合物(Retinoi22nRight now we lump patients together and treat them with the same drugs and then deal with their variable response to treatment.Were essentially treating different diseases with the same medicine.”nRichard Klausner,1997 23肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法23肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法23a、反义药物b、Decoy核酸C、RNA干扰6、基因治疗、基因治疗24肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法a、反义药物6、基因治疗24肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方24a、反义药物反义药物又称反义寡核苷酸药物（AODNs），是指人工合成长度为1030个碱基的DNA分子及其类似物。根据核苷酸杂交原理，反义药物能与特定的基因杂交，在基因水平上干扰致病蛋白质的产生过程。AODNs可以与其靶RNA链互补结合，形成RNA-DNA杂交双链。形成的杂交双链可以被RNA酶H识别并消化RNA链，由此释放出的AODN可以继续与靶RNA链结合，最终导致编码基因沉默。由此可推RNA酶H过多表达可增强各种AODNs效应，反之RNA酶H受抑则降低其作用。有些AODNs并不能激活RNA酶H，相反与翻译元件竞争空间因此可抑制RNA翻译。另外，AODNs如果和mRNA结合可作用于内含子外显子接合处以中断其拼接过程。AODNs还可以占领校正RNA细胞内定位的蛋白RNA作用序列，从而扰乱RNA运输，药物：Vitravenea、反义药物、反义药物25肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法a、反义药物a、反义药物25肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方255-ACGCT-33-TGCGA-5mRNARNAseHAntisenseDNA26肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法5-ACGCT-33-TGCGA-5mRNARNAs26 Decoy核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚核核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚核酸酸,通过竞争性抑制转录因子与调控区域的结合通过竞争性抑制转录因子与调控区域的结合,调控调控转录来改变下游基因的异常表达转录来改变下游基因的异常表达,从而抑制肿瘤恶性增从而抑制肿瘤恶性增殖殖.体外筛选结合转录因子体外筛选结合转录因子AP2的的decoy核酸药物核酸药物,结果结果K102对多种肿瘤细胞生长有显著的抑制作用对多种肿瘤细胞生长有显著的抑制作用,在异植在异植人肿瘤细胞人肿瘤细胞NCIH460的裸鼠模型中的裸鼠模型中,静脉注射高中低静脉注射高中低三剂量组的三剂量组的decoy核酸核酸K102,抑瘤率分别达抑瘤率分别达 71.8%、64.4%及及 57.3%.通过凝胶阻抑试验通过凝胶阻抑试验,验证了验证了K102与转与转录因子产生特异性结合录因子产生特异性结合.实验结果为实验结果为decoy核酸转录调核酸转录调控药物的研究提供了依据。控药物的研究提供了依据。b、Decoy核酸核酸27肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法Decoy核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚核酸27DesignoligoswhichcanspecificallybindtothetranscriptionfactorJUN/ATFandDesignoligoswhichcanspecificallybindtothetranscriptionfactorJUN/ATFandblockdownstreanmultipleoncogenesexpressionblockdownstreanmultipleoncogenesexpression28肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法Designoligoswhichcanspecif28RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)引发的转录后基因静默机制.RNAi是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制。由于RNA干扰是针对转录后阶段的基因沉默，相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除，整个流程设计更简便，且作用迅速，效果明显，为基因治疗开辟了新的途径。其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制，控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达。c、RNA干扰29肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法RNA干扰(RNAinterference，RNA29 单克隆抗体单克隆抗体(单抗单抗)药物就是通过淋巴细胞杂交瘤技术或基因工程药物就是通过淋巴细胞杂交瘤技术或基因工程技术制备的抗体。起初用于诊断剂或检测剂，后来用于治疗肿瘤、技术制备的抗体。起初用于诊断剂或检测剂，后来用于治疗肿瘤、病毒性感染、心血管病以及其它疾病。治疗肿瘤的优越性：病毒性感染、心血管病以及其它疾病。治疗肿瘤的优越性：（1）单抗药物对肿瘤细胞的选择性杀伤作用）单抗药物对肿瘤细胞的选择性杀伤作用 （2）单抗药物具有更高的疗效）单抗药物具有更高的疗效 （3）单抗药物对肿瘤相关靶点的特异性作用）单抗药物对肿瘤相关靶点的特异性作用 其研究重点主要集中在将抗体与化学药物、酶、放射性核素、毒其研究重点主要集中在将抗体与化学药物、酶、放射性核素、毒素和生物诱导剂等耦联后直接杀伤肿瘤或者利用抗体促进肿瘤细素和生物诱导剂等耦联后直接杀伤肿瘤或者利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。目前，国际上与肿瘤治疗相胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。目前，国际上与肿瘤治疗相关的抗体研究主要集中在将抗体与耦联物作用后直接杀伤肿瘤细关的抗体研究主要集中在将抗体与耦联物作用后直接杀伤肿瘤细胞，利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。胞，利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。7、单克隆抗体药物、单克隆抗体药物30肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法单克隆抗体(单抗)药物就是通过淋巴细胞杂交瘤技术或3031肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法31肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法31 代表药物：曲妥珠单抗（代表药物：曲妥珠单抗（trastuzumab，Herceptin）Trastuzumab为靶向结合为靶向结合HER2的人的人IgG1类单抗，类单抗，HER2为酪氨为酪氨酸激酶受体，在约酸激酶受体，在约20%25%的进展期乳腺癌患者过表达。的进展期乳腺癌患者过表达。HER2分子具有以下的特点，因此成为乳腺癌治疗的靶分子：分子具有以下的特点，因此成为乳腺癌治疗的靶分子：HER2的表达水平与乳腺癌的发病机理及预后相关；的表达水平与乳腺癌的发病机理及预后相关；肿瘤的肿瘤的HER2表达水平及基因拷贝数远高于正常组织，有效的减表达水平及基因拷贝数远高于正常组织，有效的减轻了轻了HER2靶向治疗药物的毒性；靶向治疗药物的毒性；HER2表达阳性的肿瘤细胞比例很高，而且在肿瘤细胞表面高表表达阳性的肿瘤细胞比例很高，而且在肿瘤细胞表面高表达，因此在患者体内可以靶向大多数的肿瘤细胞；达，因此在患者体内可以靶向大多数的肿瘤细胞；HER2在原发肿瘤及转移灶均有表达，因此在原发肿瘤及转移灶均有表达，因此HER2靶向治疗对原靶向治疗对原发及转移病灶均有效。发及转移病灶均有效。32肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法代表药物：曲妥珠单抗（trastuzumab，Herc32曲妥珠单抗（曲妥珠单抗（trastuzumab）的作用机制：）的作用机制：抑制受体信号传导。抑制受体信号传导。HER2可以活化多种信号传导通路，包括可以活化多种信号传导通路，包括PI3K、MAPK等。等。Trastuzumab减少了这些信号通路的传导，将细胞阻减少了这些信号通路的传导，将细胞阻滞于调定点，诱导细胞凋亡。受体信号传导的降低是由于滞于调定点，诱导细胞凋亡。受体信号传导的降低是由于trastuzumab介导的介导的HER2受体内化及降解。受体内化及降解。通过调节通过调节p27kipl阻滞细胞于阻滞细胞于G1调定点。调定点。Trastuzumab处理的细胞处理的细胞被阻滞于被阻滞于G1调定点，细胞增殖减少。细胞阻滞于调定点，细胞增殖减少。细胞阻滞于G1调定点与细胞调定点与细胞周期依赖的激酶抑制蛋白周期依赖的激酶抑制蛋白p27kipl相关。相关。诱导细胞凋亡。体内研究表明诱导细胞凋亡。体内研究表明trastuzumab可以诱导乳腺癌细胞凋可以诱导乳腺癌细胞凋亡，凋亡的发生与亡，凋亡的发生与Ki67的表达无关。的表达无关。抑制血管形成。高表达抑制血管形成。高表达HER2的肿瘤细胞新生血管及的肿瘤细胞新生血管及VEGF的表达显的表达显著增加。体内研究结果显示著增加。体内研究结果显示trastuzumab处理后，乳腺癌肿瘤体积处理后，乳腺癌肿瘤体积减小，微血管密度降低；体外研究表明减小，微血管密度降低；体外研究表明trastuzumab处理后，内皮处理后，内皮细胞的迁移能力下降。细胞的迁移能力下降。抑制抑制DNA修复。体外研究显示可与许多化疗药物产生协同效应。修复。体外研究显示可与许多化疗药物产生协同效应。Trastuzumab或联合化疗药物促进或联合化疗药物促进DNA损伤，并抑制损伤，并抑制DNA的修复，的修复，最终导致细胞凋亡。最终导致细胞凋亡。33肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法曲妥珠单抗（trastuzumab）的作用机制：33肿瘤动物3334肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法34肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法34抗肿瘤新药发现抗肿瘤新药发现35肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法抗肿瘤新药发现35肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法35MathematicalmodelCellBiologyTargetselectionDrugdesign(Pre)clinicaltesting36肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法MathematicalCellBiologyTarge36How many drug targets are there?n8,000targetsofpharmacologicalinterest,ofwhichnearly5,000couldbepotentiallyhitbytraditionaldrugsubstances,nearly2,400byantibodiesand800byproteinpharmaceuticals.37肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法Howmanydrugtargetsarether37DrugTarget:Enzymes38肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:Enzymes38肿瘤动物模型和抗38DrugTarget:EnzymesII39肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:EnzymesII39肿瘤动物模39DrugTarget:EnzymesIII40肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:EnzymesIII40肿瘤动物40DrugTarget:EnzymesIII41肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:EnzymesIII41肿瘤动物41DrugTarget:ReceptorsI42肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:ReceptorsI42肿瘤动物42DrugTarget:ReceptorsII43肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:ReceptorsII43肿瘤动43DrugTarget:ReceptorsIII44肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:ReceptorsIII44肿瘤44DrugTarget:ReceptorsIII45肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:ReceptorsIII45肿瘤45DrugTarget:Ionchannels46肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:Ionchannels46肿瘤动46DrugTarget:Transportproteins47肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:Transportprotein47DrugTarget:DNA/RNAandtheribosome48肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:DNA/RNAandther48DrugTarget:Targetsofmonoclonalantibodies49肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:Targetsofmonocl49DrugTarget:Variousphysicochemicalmechanisms50肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法DrugTarget:Variousphysicoch50抗肿瘤药物的筛选和评价抗肿瘤药的临床前药理研究包括药效学和毒性研究两部分抗肿瘤药物药效学需研究内容：体外抗肿瘤试验体内抗肿瘤试验评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。51肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法抗肿瘤药物的筛选和评价抗肿瘤药的临床前药理研究包括药效学和毒51体外抗肿瘤活性试验目的：n对候选化合物进行初步筛选；n了解候选化合物的抗瘤谱；n为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等。52肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验目的：52肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究52体外抗肿瘤活性试验常用方法体外试验常用方法有：n染料排斥法n四氮唑盐还原法n阿拉马蓝法n磺酰罗丹明染色法n集落形成法n生长曲线测定法。药物与细胞共培养时间一般为48-72小时，贴壁细胞需先贴壁24小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照53肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验常用方法体外试验常用方法有：53肿瘤动物模53体外抗肿瘤活性试验常用方法n染料排斥法（dyeexclusionassay）n试验原理：活细胞有排斥某些染料如伊红、台盼蓝、苯胺黑等的能力，而死细胞由于膜完整性的破坏，可被着色。因此培养的肿瘤细胞中加入这些染料，一定时间后，对着色和未着色的细胞进行计数，即可算出被杀死的细胞比例。n方法要点：向一定容积的待检细胞悬液加入定量的某种染液，最常用的是0.4%台盼蓝液，混匀，室温染色5-15min，将已染色的细胞悬液滴加至血细胞计数板，直接在光镜下计数活细胞数和细胞总数。n观测指标：按（未染色细胞数/细胞总数）X100%计算活细胞率，对照组活细胞率应在90%以上。根据活细胞率计算受试样品的半数致死剂量（IC50）作为药物抗肿瘤活性的指标。54肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验常用方法染料排斥法（dyeexclusi54体外抗肿瘤活性试验常用方法n阿拉马蓝法（alamarblueassay）n试验原理：非荧光性蓝色底物阿拉马蓝可被活细胞中的线粒体内的NADPH相关的脱氢酶类还原为强荧光性粉红色底物，采用微培养板自动读数仪在激发与发射波长分别为530nm和590nm处读取荧光强度值，与活细胞数呈良好的线性关系。n方法要点：细胞经受试样品处理后，加入10-20ul阿拉马蓝染液，继续培养一定时间，用微培养板自动读数仪在激发与发射波长分别为530nm和590nm处读取荧光强度值。n观测指标：根据荧光强度可以计算细胞生长抑制率，适当时可进一步计算IC50值。55肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验常用方法阿拉马蓝法（alamarblue55体外抗肿瘤活性试验常用方法n集落形成法（clonogenicassay）n试验原理：克隆原细胞具有持续增殖能力，当单个细胞分裂6代或6代以上时，其后代所组成的群体(集落)便含50个以上细胞。通过集落计数可对克隆原细胞作定量分析。它反映了单个细胞的增殖潜力，故能较灵敏地测定抗癌药的活性，日前被认为是一种较理想的检测方法。n方法要点：将浓度为500个细胞/ml的对数生长期细胞悬液2ml种至35ml的培养皿，并加受试样品适量，培养7d或更长时间，姬姆萨染色，解剖显微镜下计数含50细胞以上的集落。n观测指标：根据集落数计算集落形成率，对照组集落形成率不应低于40%，再计算用药组的集落形成抑制率，根据情况可进一步采用Logit法计算受试样品的IC50值。集落形成率=集落数/细胞接种数X100%集落形成抑制率=（1-用药组集落形成率）/对照组集落形成率X100%56肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验常用方法集落形成法（clonogenic56体外抗肿瘤活性试验常用方法n生长曲线测定法（growth-curvedetermination）n试验原理：在最适条件下，肿瘤细胞在培养液中呈指数生长，如取细胞数的对数与培养时间作图可得一条直线，故称此时为对数生长期。随着细胞密度不断增高，由于代谢产物的积聚及营养物的消耗，细胞生长逐渐减慢以致停止，此时称高坪期或稳定期。因此药物对细胞生长的影响可通过生长曲线反映出来。n方法要点：将浓度为10000个细胞/ml的对数生长期细胞悬液按每瓶5ml种至25ml的培养瓶，或按每孔100微升种至96孔板，并加受试样品适量，培养后分别于即刻和1、2、3、4、5、6、7d进行检测。前者可采用台盼蓝染色计数活细胞，后者可采用MTT法或SRB法读取OD值，并据此进行作图与计算。n观测指标1、倍增时间(TD),将实际生在曲线进行直线回归求出0和t时刻的理论细胞数N0和Nt，据此计算：TD=0.301t/（logNtlogN0）；2增殖细胞杀伤率（%）=(N0N0)/N0100%；3细胞生长饱和密度（Ns），代表高坪期每毫升细胞数的均数。57肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验常用方法生长曲线测定法（growth-cu57体外抗肿瘤活性试验常用方法n磺酰罗丹明染色法（sulforhodamine B assay）n试验原理：SRB是一种蛋白质结合染料，粉红色，可溶于水。SRB可与生物大分子中的碱性氨基酸结合。其在515 nm波长的OD读数与细胞数呈良好的线性关系。故可用作细胞数的定量。MTT法的一个缺点是OD值可随放置时间而变，而SRB法无此现象。因此更适用于进行大规模的试验。n方法要点：用10%冷三氯乙酸与4固定已经受试样品处理的细胞1h，洗涤，干燥；加入4mg/ml SRB液100微升/孔 染色15min，1%冰醋酸洗涤，干燥；最后加入150微升/孔 的Tris溶液，在酶标仪上与515nm波长处检测OD值。n观测指标 同MTT法。另外，NCI目前采用以下指标评价化合物的体外抗肿瘤活性。测定的OD值包括对照组、加药组及加药时的细胞的OD值C、T、和T0。据此计算：生长抑制率（%）=（TT0）/（CT0）100%；细胞死亡率（%）=（TT0）/T0 100%。按生长抑制率或细胞死亡率对样品浓度绘出量效关系曲线图，并求出：GI50，即生长抑制率为50%时的样品浓度；TGI，即生长抑制率为100%时的样品浓度：LC50，即细胞死亡率为50%时的样品浓度。58肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验常用方法磺酰罗丹明染色法（sulforho58体外抗肿瘤活性试验常用方法n四氮唑盐还原法（tetrazolinmsaltreductionassay）n试验原理：四氮唑MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲月替(formazan)，而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽(DMSO)溶解甲月替后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。n方法要点：受试样品处理细胞结束后，加入5mg/mlMTT液20微升/孔，继续培养四小时。再加三联液并培养过夜。在酶标仪上于570nm波长处检测OD值。n观测指标直接指标为96孔板上各被测孔的OD值；然后按公式（对照组OD值-治疗组OD值）/对照组OD值100%计算出相应的细胞生长抑制率；剧情况可进一步采用Logit法计算50%生长抑制浓度IC50值。59肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验常用方法四氮唑盐还原法（tetrazoli59体外抗肿瘤活性试验体外筛选方法的优点：操作简单用药量少取材可直接用于人体肿瘤得出结果快速60肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验体外筛选方法的优点：60肿瘤动物模型和抗肿60Case:Case:Activity Activity of of 20 20 compounds compounds on on the the growth growth of of three three cancer cell linescancer cell linesProvider:C Biotech CompanyProvider:C Biotech Company61肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法Case:Activityof20compounds61HumanNCI-H460lungcancercellwithouttreatmentHumanNCI-H460lungcancercellWithCompoundAtreatment62肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法HumanNCI-H460lungcancerHum62体外抗肿瘤活性试验体外筛选方法的缺陷：1、细胞毒性易显阳性，有毒物质也常常显阳性，故假阳性率高2、非直接对肿瘤细胞作用的药物显示假阴性3、体外细胞并不能完全代表体内肿瘤的恶性细胞63肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体外抗肿瘤活性试验体外筛选方法的缺陷：63肿瘤动物模型和抗63体内抗肿瘤活性试验1、自发性肿瘤2、诱发的肿瘤3、移植性肿瘤（a）皮下肿瘤模型（b）腹水瘤模型（c）原位接种模型64肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法体内抗肿瘤活性试验1、自发性肿瘤64肿瘤动物模型和抗肿瘤药6465第一节第一节 自发性肿瘤动物模型自发性肿瘤动物模型(animalmodelofspontaneoustumorsanimalmodelofspontaneoustumors)概念概念概念概念:未经人为处理；自然发生未经人为处理；自然发生未经人为处理；自然发生未经人为处理；自然发生 自发性乳腺癌模型自发性乳腺癌模型自发性乳腺癌模型自发性乳腺癌模型 自发性白血病模型自发性白血病模型自发性白血病模型自发性白血病模型肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法65第一节自发性肿瘤动物模型(animalmodel6566 一、自发性乳腺癌模型一、自发性乳腺癌模型 生长在体表生长在体表,易早期发现易早期发现,罕有自发消退罕有自发消退,因因而能准确观察其大小与生长速度而能准确观察其大小与生长速度,便于进行实便于进行实验。验。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法66一、自发性乳腺癌模型生长在体表,易6667 现介绍三种自发性乳腺癌小鼠模型现介绍三种自发性乳腺癌小鼠模型C3H小鼠：小鼠：繁殖用雌鼠自发性乳腺癌发生率为繁殖用雌鼠自发性乳腺癌发生率为 85%85%100%100%。A系小鼠：系小鼠：经产雌鼠乳腺肿瘤发生率为经产雌鼠乳腺肿瘤发生率为30%30%80%80%。CBA小鼠小鼠：雌鼠自发性乳腺癌发生率为雌鼠自发性乳腺癌发生率为60%60%65%65%。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法67现介绍三种自发性乳腺癌小鼠模型C3H小鼠6768 在乳腺左右两侧及乳头部均可发生肿瘤。每在乳腺左右两侧及乳头部均可发生肿瘤。每只小鼠常见只小鼠常见1 1个以上肿瘤。选择肿瘤数目和大小个以上肿瘤。选择肿瘤数目和大小相近的动物相近的动物,配对分组配对分组,给予受试药给予受试药,观察受试观察受试药对肿瘤发展的影响。药对肿瘤发展的影响。给药方案和给药途径可根据受试药物的特点给药方案和给药途径可根据受试药物的特点确定。因自发性乳腺癌发展较缓慢，故采用间确定。因自发性乳腺癌发展较缓慢，故采用间歇给药或小剂量连续给药较为合适。歇给药或小剂量连续给药较为合适。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法68在乳腺左右两侧及乳头部均可发生肿瘤。每只小鼠常见16869 结果判定结果判定 给药后每天观察肿瘤生长情况，记录发生时给药后每天观察肿瘤生长情况，记录发生时间和位置。间和位置。肿瘤结节长到一定程度肿瘤结节长到一定程度,每周用每周用脚规脚规测量皮下测量皮下肿瘤肿瘤2 2次。测定肿块的最大径次。测定肿块的最大径(a)(a)和最小径和最小径(b)b)。肿瘤体积肿瘤体积肿瘤体积肿瘤体积(cm(cm(cm(cm3 3 3 3)=ab)=ab)=ab)=ab2 2 2 2/2/2/2/2肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法69结果判定给药后每天观察肿瘤生长情况，记录发生时间6970 将将肿瘤体积肿瘤体积变化对变化对时间时间作出生长曲线作出生长曲线,可由曲可由曲线的斜率变化判断药物抑制肿瘤生长的作用线的斜率变化判断药物抑制肿瘤生长的作用,尤尤其应观察肿瘤能否完全消退。其应观察肿瘤能否完全消退。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法70将肿瘤体积变化对时间作出生长曲线,可由曲线的斜率变7071 注意事项注意事项注意事项注意事项 1 1.在同一品系内在同一品系内,发病率比较稳定发病率比较稳定,而不同品而不同品系间差别甚大。系间差别甚大。2 2.动物乳腺癌发生与遗传基因、乳癌因子动物乳腺癌发生与遗传基因、乳癌因子(即致乳癌病毒即致乳癌病毒)及激素有关。及激素有关。3 3.饲料的变更有明显影响饲料的变更有明显影响,要用固定全价营养要用固定全价营养饲料。饲料。4 4.配对分组。配对分组。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法71注意事项3.饲料的变更有明显影响,要用固定全价营7172 二、二、AKR白血病模型白血病模型 AKRAKR小鼠为白血病高发品系，淋巴细胞白血病小鼠为白血病高发品系，淋巴细胞白血病小鼠为白血病高发品系，淋巴细胞白血病小鼠为白血病高发品系，淋巴细胞白血病发病率雄性发病率雄性发病率雄性发病率雄性76%76%76%76%90%90%90%90%，雌性为，雌性为，雌性为，雌性为68%68%68%68%90%90%90%90%。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 实验用实验用实验用实验用6 6 6 6 12121212月龄月龄月龄月龄AKRAKRAKRAKR小鼠小鼠小鼠小鼠,此时鼠的脾和淋巴此时鼠的脾和淋巴此时鼠的脾和淋巴此时鼠的脾和淋巴结肿大结肿大结肿大结肿大,血象异常。血象异常。血象异常。血象异常。经血液检查确诊为白血病后的次日经血液检查确诊为白血病后的次日经血液检查确诊为白血病后的次日经血液检查确诊为白血病后的次日,配对分配对分配对分配对分组并开始给予受试药组并开始给予受试药组并开始给予受试药组并开始给予受试药,观察结果。观察结果。观察结果。观察结果。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法72二、AKR白血病模型AKR小鼠为白血病高发品系7273 观观观观察察察察指指指指标标标标：末末末末梢梢梢梢血血血血象象象象,白白白白细细细细胞胞胞胞数数数数,淋淋淋淋巴巴巴巴结结结结和和和和脾脾脾脾大大大大小小小小,动动动动物物物物生生生生存存存存时时时时间间间间。有有有有效效效效者者者者生生生生存存存存期期期期比比比比对对对对照照照照组组组组延延延延长长长长,并并并并根根根根据据据据血血血血象象象象评评评评价价价价药药药药物物物物的的的的诱诱诱诱导导导导缓缓缓缓解解解解和和和和维维维维持持持持缓缓缓缓解解解解作用。作用。作用。作用。各鼠白血病的病程不一各鼠白血病的病程不一各鼠白血病的病程不一各鼠白血病的病程不一,自发瘤确诊后自发瘤确诊后自发瘤确诊后自发瘤确诊后,实验实验实验实验时应时应时应时应配对分组配对分组配对分组配对分组。结果判定结果判定结果判定结果判定 注意事项注意事项注意事项注意事项 肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法73观察指标：末梢血象,白细胞数,淋巴结和脾大小,动物生存7374 自发性肿瘤的总体评价自发性肿瘤的总体评价 动物自发性肿瘤的病因往往是由动物的遗动物自发性肿瘤的病因往往是由动物的遗动物自发性肿瘤的病因往往是由动物的遗动物自发性肿瘤的病因往往是由动物的遗传特性决定的传特性决定的传特性决定的传特性决定的,与人癌的病因有较大距离。与人癌的病因有较大距离。与人癌的病因有较大距离。与人癌的病因有较大距离。各动物肿瘤生长速度差异较大各动物肿瘤生长速度差异较大各动物肿瘤生长速度差异较大各动物肿瘤生长速度差异较大,很难在限定很难在限定很难在限定很难在限定时间内获得大量生长均匀的荷瘤动物时间内获得大量生长均匀的荷瘤动物时间内获得大量生长均匀的荷瘤动物时间内获得大量生长均匀的荷瘤动物(tumor-(tumor-(tumor-(tumor-bearing animals)bearing animals)bearing animals)bearing animals)因此，自发性肿瘤动物模型很少在抗肿瘤因此，自发性肿瘤动物模型很少在抗肿瘤因此，自发性肿瘤动物模型很少在抗肿瘤因此，自发性肿瘤动物模型很少在抗肿瘤药物的常规筛选中广泛应用。药物的常规筛选中广泛应用。药物的常规筛选中广泛应用。药物的常规筛选中广泛应用。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法74自发性肿瘤的总体评价动物自发性肿瘤的病因往往是由7475第二第二节 诱发性肿瘤动物模型诱发性肿瘤动物模型(animalmodelsofinducedtumor)(animalmodelsofinducedtumor)概念概念概念概念:在实验条件下在实验条件下在实验条件下在实验条件下;使用致癌物使用致癌物使用致癌物使用致癌物(carcinogens);carcinogens);carcinogens);carcinogens);诱发动物发生肿瘤诱发动物发生肿瘤诱发动物发生肿瘤诱发动物发生肿瘤肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法75第二节诱发性肿瘤动物模型(animalmodel7576 基本原理基本原理 利用外源性致癌物引起细胞遗传特性改变，利用外源性致癌物引起细胞遗传特性改变，利用外源性致癌物引起细胞遗传特性改变，利用外源性致癌物引起细胞遗传特性改变，从而出现异常生长和高增殖活性细胞从而出现异常生长和高增殖活性细胞从而出现异常生长和高增殖活性细胞从而出现异常生长和高增殖活性细胞,形成肿瘤。形成肿瘤。形成肿瘤。形成肿瘤。外源性致癌物主要有外源性致癌物主要有外源性致癌物主要有外源性致癌物主要有化学性化学性化学性化学性、物理性物理性物理性物理性(如放射如放射如放射如放射性物质性物质性物质性物质)及及及及生物性生物性生物性生物性(如诱发动物肿瘤的病毒如诱发动物肿瘤的病毒如诱发动物肿瘤的病毒如诱发动物肿瘤的病毒),其中其中其中其中以化学性致癌物最为常用。以化学性致癌物最为常用。以化学性致癌物最为常用。以化学性致癌物最为常用。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法76基本原理利用外源性致癌物引起细胞遗传特性改7677 一、诱发性肿瘤动物模型的基本方法一、诱发性肿瘤动物模型的基本方法 实验时实验时实验时实验时,必需注意选择必需注意选择必需注意选择必需注意选择合适的致癌方法合适的致癌方法合适的致癌方法合适的致癌方法、动物种动物种动物种动物种系系系系、致癌物致癌物致癌物致癌物及其及其及其及其溶剂溶剂溶剂溶剂、给予剂量给予剂量给予剂量给予剂量、途径途径途径途径以及以及以及以及观察观察观察观察时间时间时间时间等。致癌物的剂量应能保证动物的存活率较等。致癌物的剂量应能保证动物的存活率较等。致癌物的剂量应能保证动物的存活率较等。致癌物的剂量应能保证动物的存活率较高、诱发期较短和诱发肿瘤频率较高。高、诱发期较短和诱发肿瘤频率较高。高、诱发期较短和诱发肿瘤频率较高。高、诱发期较短和诱发肿瘤频率较高。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法77一、诱发性肿瘤动物模型的基本方法实验时,7778常用的致癌物给予方法和途径常用的致癌物给予方法和途径 1 1.涂抹法涂抹法:涂抹在背部及耳部皮肤涂抹在背部及耳部皮肤,主要用主要用于诱发皮肤肿瘤。于诱发皮肤肿瘤。2 2.经口给药法：经口给药法：通过饮水、饲料或灌喂动通过饮水、饲料或灌喂动物。常用于食道癌、胃癌及大肠癌等。物。常用于食道癌、胃癌及大肠癌等。3 3.注射法：注射法：致癌物制成溶液致癌物制成溶液,经皮下、肌内、经皮下、肌内、静脉或体腔等途径注入体内静脉或体腔等途径注入体内,本法较常用。本法较常用。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法78常用的致癌物给予方法和途径1.涂抹法:涂抹在背部及7879常用的致癌物给予方法和途径常用的致癌物给予方法和途径 4 4.气管注入法：气管注入法：常用于诱发肺癌。常用于诱发肺癌。5 5.穿线法：穿线法：将致癌物置于无菌试管内将致癌物置于无菌试管内,加加热使之液化热使之液化,吸附于预制的线结上吸附于预制的线结上,再将此线再将此线结穿入靶组织而诱发肿瘤。结穿入靶组织而诱发肿瘤。6 6.埋藏法：埋藏法：包埋于皮下或其他组织内。包埋于皮下或其他组织内。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法79常用的致癌物给予方法和途径4.气管注入法：常用于诱发7980二、诱发性肿瘤模型的动物和致癌物二、诱发性肿瘤模型的动物和致癌物动物：动物：大鼠，小鼠，犬等大鼠，小鼠，犬等致癌物：致癌物：n多环碳氢类多环碳氢类n亚硝胺类亚硝胺类n偶氮类偶氮类n黄曲霉毒素黄曲霉毒素 （饲料中含（饲料中含0 0.001.0010.015ppm0.015ppm黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1,B1,喂喂养养6 6个月个月,诱发大鼠肝癌）。诱发大鼠肝癌）。ppm=partspermillion肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法80二、诱发性肿瘤模型的动物和致癌物动物：大鼠，小鼠，犬等肿8081肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法81肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法8182 诱发性肿瘤模型的总体评价诱发性肿瘤模型的总体评价 约约约约80%80%80%80%人癌是由环境因素引起的人癌是由环境因素引起的人癌是由环境因素引起的人癌是由环境因素引起的,诱发性肿瘤的诱发性肿瘤的诱发性肿瘤的诱发性肿瘤的病因与人癌的情况近似病因与人癌的情况近似病因与人癌的情况近似病因与人癌的情况近似,且均经过较长演变过程而且均经过较长演变过程而且均经过较长演变过程而且均经过较长演变过程而成瘤。动物诱发性肿瘤是比较类似于人类肿瘤的动成瘤。动物诱发性肿瘤是比较类似于人类肿瘤的动成瘤。动物诱发性肿瘤是比较类似于人类肿瘤的动成瘤。动物诱发性肿瘤是比较类似于人类肿瘤的动物模型。物模型。物模型。物模型。然而然而然而然而,人癌的发生原因十分复杂人癌的发生原因十分复杂人癌的发生原因十分复杂人癌的发生原因十分复杂,往往并非由已往往并非由已往往并非由已往往并非由已知的动物致癌物所引起。另外知的动物致癌物所引起。另外知的动物致癌物所引起。另外知的动物致癌物所引起。另外,动物诱发性肿瘤的动物诱发性肿瘤的动物诱发性肿瘤的动物诱发性肿瘤的组织病理类型、发生发展过程也不一定与人癌完全组织病理类型、发生发展过程也不一定与人癌完全组织病理类型、发生发展过程也不一定与人癌完全组织病理类型、发生发展过程也不一定与人癌完全一致。一致。一致。一致。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法82诱发性肿瘤模型的总体评价约80%人癌是8283 本模型的本模型的本模型的本模型的最大困难最大困难最大困难最大困难是诱癌时间长、成癌率常达是诱癌时间长、成癌率常达是诱癌时间长、成癌率常达是诱癌时间长、成癌率常达不到不到不到不到100%100%100%100%,而且动物之间肿瘤而且动物之间肿瘤而且动物之间肿瘤而且动物之间肿瘤发生时间发生时间发生时间发生时间、发展速发展速发展速发展速度度度度的个体差异很大的个体差异很大的个体差异很大的个体差异很大,难以将未治疗的动物作为治难以将未治疗的动物作为治难以将未治疗的动物作为治难以将未治疗的动物作为治疗动物的对照。疗动物的对照。疗动物的对照。疗动物的对照。肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法83本模型的最大困难是诱癌时间长、成癌率常达不到1008384第三节第三节第三节第三节移植性移植性肿瘤瘤动物模型物模型(Animal model of transplanting tumorsAnimal model of transplanting tumors)肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法84第三节肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法8485 移植性肿瘤动物模型是指将动物或人体肿瘤移植性肿瘤动物模型是指将动物或人体肿瘤移植性肿瘤动物模型是指将动物或人体肿瘤移植性肿瘤动物模型是指将动物或人体肿瘤移植到同种或异种动物体内连续传代而形成的肿移植