第五章-酶学诊断课件

第五章第五章 诊断酶学诊断酶学DiagnosticEnzymology第五章诊断酶学DiagnosticEnzymology1 目的：目的：学习并掌握血清酶的基本知识及其在学习并掌握血清酶的基本知识及其在临床检验诊断中的应用。临床检验诊断中的应用。学习内容：学习内容：第一节第一节 概述概述第二节第二节 酶测定技术酶测定技术第三节第三节 常用酶及同工酶测定的临床应用常用酶及同工酶测定的临床应用目的：学习并掌握血清酶的基本知识及其在临床检验诊断中的2第一节第一节 概概 述述第一节概述3与酶催化反应有关的名词与酶催化反应有关的名词 酶促反应：酶促反应：酶催化的反应；酶催化的反应；酶活性酶活性(activity)(activity)：酶催化反应的能力；酶催化反应的能力；底物底物(substrate(substrate，S)S)：酶所作用的物质；酶所作用的物质；产物产物(product(product，P)P)：酶促反应的生成物；酶促反应的生成物；酶的激活剂酶的激活剂(activator(activator）：）：加速酶促反应加速酶促反应 的物质；的物质；酶的抑制剂酶的抑制剂(inhibitor(inhibitor）：）：减慢或终止酶减慢或终止酶促反应的物质促反应的物质与酶催化反应有关的名词酶促反应：酶催化的反应；4(一一)酶的组成、结构与功能酶的组成、结构与功能n组成组成单纯酶单纯酶(simple enzyme)(simple enzyme)：仅由氨基酸残基构成的酶仅由氨基酸残基构成的酶结合酶（结合酶（conjugated enzyme)conjugated enzyme)：由蛋白质部分和非蛋白质部分（辅由蛋白质部分和非蛋白质部分（辅助因子）构成的酶。助因子）构成的酶。(一)酶的组成、结构与功能组成单纯酶(simpleenzy5结构结构*单体酶：单体酶：具有一、二、三级结构具有一、二、三级结构*寡聚酶：寡聚酶：具有一、二、三、四级结构具有一、二、三、四级结构每一种酶分子内具有与催化功能密切相关的空间结每一种酶分子内具有与催化功能密切相关的空间结构区域构区域-活性中心（活性中心（active centeractive center）结构*单体酶：6底底物物活性中心以外活性中心以外的必需基团的必需基团结合基团结合基团催化基团催化基团活性中心活性中心目目录录底物活性中心以外的必需基团结合基团催化基团活性中心目7酶的功能及其特性酶的功能及其特性功能：功能：对生物体内的化学反应起催化作用。对生物体内的化学反应起催化作用。酶催化作用的特性：酶催化作用的特性：高度催化效率、高度特异性及高度可调高度催化效率、高度特异性及高度可调 节性。节性。酶的功能及其特性功能：8（二）酶的催化作用机制（二）酶的催化作用机制酶底物复合物酶底物复合物E+S E+P ES*诱导契合假说诱导契合假说(induced-fithypothesis)酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，进而相互结合。这一过相互变形和相互适应，进而相互结合。这一过程称为酶程称为酶-底物结合的诱导契合假说底物结合的诱导契合假说 。（二）酶的催化作用机制酶底物复合物E+SE+P9第五章-酶学诊断课件10【酶促反应动力学酶促反应动力学】q概念概念 研究各种因素对研究各种因素对酶促反应速度酶促反应速度影响的学科影响的学科-酶促反应动力学。酶促反应动力学。酶促反应速度：酶促反应速度：用单位时间内底物的消耗用单位时间内底物的消耗量或产物的生成量表示量或产物的生成量表示【酶促反应动力学】概念11V=VmaxS/Km+S米米-曼氏方程（曼氏方程（michaelismentenequation)V=VmaxS/Km+S米-曼氏方程（michae12【KmKm】KmKm的定义的定义由米由米-曼氏方程可以导出曼氏方程可以导出：（Vmax-v）SKm=v当当v=1/2Vmaxv=1/2Vmax时，时，Km=Km=S S。因此。因此KmKm值为反应速度值为反应速度相当于最大反应速度一半时的底物浓度。相当于最大反应速度一半时的底物浓度。KmKm值是酶的值是酶的特征常数，具有重要的应用价值。特征常数，具有重要的应用价值。大多数酶大多数酶KmKm在在10-610-2mmol/L10-610-2mmol/L之间之间【Km】由米-曼氏方程可以导出：（Vmax-v13Km值的应用值的应用1.1.反映酶与底物的亲合力反映酶与底物的亲合力 KmKm值越大，酶与底物亲合力越小，值越大，酶与底物亲合力越小，KmKm值越小，酶与底物亲合力越大。值越小，酶与底物亲合力越大。2.2.选择酶的最适底物选择酶的最适底物 KmKm值取决于酶的种类和底物的性质，在酶一定时，值取决于酶的种类和底物的性质，在酶一定时，不同底物有不同的不同底物有不同的KmKm值值,Km,Km值最小的底物为酶的最适值最小的底物为酶的最适底物。底物。酶活力测定时，应优先选择酶的最适底物，使酶酶活力测定时，应优先选择酶的最适底物，使酶促反应容易进行，并节省底物用量。促反应容易进行，并节省底物用量。Km值的应用1.反映酶与底物的亲合力Km值越大，酶与底物亲143.3.计算不同底物浓度时酶促反应速度和相当于最计算不同底物浓度时酶促反应速度和相当于最大反应速度的比率大反应速度的比率 根据米根据米-曼氏方程可以计算曼氏方程可以计算 4.4.设计适宜的底物浓度，可通过米设计适宜的底物浓度，可通过米-曼氏方程曼氏方程来推算工具酶的用量。来推算工具酶的用量。酶促反应进程曲线表明，只有初速度才能真正酶促反应进程曲线表明，只有初速度才能真正代表酶活性，一般要求初速度达到最大速度的代表酶活性，一般要求初速度达到最大速度的90%90%95%95%、底物消耗率为、底物消耗率为1%1%5%5%。这样既可以近似地表示。这样既可以近似地表示酶活性，又不致于使底物浓度过高而造成浪费。酶活性，又不致于使底物浓度过高而造成浪费。3.计算不同底物浓度时酶促反应速度和相当于最根据米-曼氏方程155.鉴定酶的种类鉴定酶的种类Km值是酶的特征常数，在反应条件一定时，只值是酶的特征常数，在反应条件一定时，只与酶的种类和底物的性质有关，与酶的浓度无关。与酶的种类和底物的性质有关，与酶的浓度无关。不同种类的酶其不同种类的酶其Km值不同，对于一种未知的酶，可值不同，对于一种未知的酶，可在规定的条件下测定其在规定的条件下测定其Km值加以鉴定。值加以鉴定。5.鉴定酶的种类Km值是酶的特征常数，在反应16 某些酶的某些酶的KmKm值值酶酶底物底物Km(mmol/L)乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶丙酮酸丙酮酸0.017己糖激酶己糖激酶D-葡萄糖葡萄糖0.05D-果糖果糖1.5-半乳糖苷酶半乳糖苷酶D-乳糖乳糖4.0碳酸酐酶碳酸酐酶H2CO39.0过氧化氢酶过氧化氢酶H2O225蔗糖酶蔗糖酶蔗糖蔗糖28糜蛋白酶糜蛋白酶甘氨酰酪氨酰甘氨酸甘氨酰酪氨酰甘氨酸108某些酶的Km值酶176.6.分别测定正逆方向反应的分别测定正逆方向反应的KmKm值及底物浓度，值及底物浓度，可推断该酶在体内的反应方向和催化效率。可推断该酶在体内的反应方向和催化效率。7.7.根据根据KmKm值可帮助寻找酶反应体系的限速酶。值可帮助寻找酶反应体系的限速酶。酶反应体系中，酶反应体系中，KmKm大的酶可能为限速酶。大的酶可能为限速酶。6.分别测定正逆方向反应的Km值及底物浓度，可推断该酶在体内18【酶促反应进程酶促反应进程】酶活性浓度即酶的催化活性浓度，用酶促反酶活性浓度即酶的催化活性浓度，用酶促反应速度表示，指在规定条件下单位时间内底物的应速度表示，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。减少量或产物的生成量。v=-dS/dt或或v=dP/dt。底物浓度为底物浓度为S S,产物浓度为产物浓度为P P,时间为时间为t t，反应速度为，反应速度为v v注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的生成量为好。生成量为好。【酶促反应进程】酶活性浓度即酶的催化活性浓度，用酶19酶促反应中基质酶促反应中基质SS、产物、产物PP和反应速率和反应速率V V在不同在不同时间变化的模式图时间变化的模式图酶促反应中基质S、产物P和反应速率V在不同时间变化的20n酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度(v)(v)达到最大速度达到最大速度VmaxVmax，即在过量底物存在，即在过量底物存在下的零级反应期的速度。下的零级反应期的速度。酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度(v)达到最大速度Vm21【酶促反应的影响因素和反应条件的选择酶促反应的影响因素和反应条件的选择】影响酶促反应的因素影响酶促反应的因素：酶浓度酶浓度底物浓度底物浓度pHpH温度温度电解质电解质辅酶辅酶激活剂激活剂抑制剂抑制剂【酶促反应的影响因素和反应条件的选择】影响酶促反应的因素：22酶促反应的最适条件：酶促反应的最适条件：我国检验学会文件提出的最适条件为我国检验学会文件提出的最适条件为1.1.选合适的底物、辅因子、活化剂、变构剂的选合适的底物、辅因子、活化剂、变构剂的种类和浓度。种类和浓度。2.2.指示酶和辅助酶的种类和浓度。指示酶和辅助酶的种类和浓度。3.3.反应混合液的最适反应混合液的最适pHpH，缓冲液种类和浓度。，缓冲液种类和浓度。其它影响酶活性的因素，如去除各种抑制剂。其它影响酶活性的因素，如去除各种抑制剂。4.4.在某些情况下，为了获得更好的测定重复性在某些情况下，为了获得更好的测定重复性或更大的临床价值，可考虑对上述或更大的临床价值，可考虑对上述“最适条最适条件件”作适度的修改。作适度的修改。酶促反应的最适条件：我国检验学会文件提出的最适条件为23(三三)酶的命名酶的命名1.1.习惯命名法：习惯命名法：根据酶所催化的底物、反应根据酶所催化的底物、反应的性质以及酶的来源等进行命名。的性质以及酶的来源等进行命名。2.2.系统命名法：系统命名法：规定每一种酶均有一个系统规定每一种酶均有一个系统名称，它标明酶的底物与反应性质，底物名称，它标明酶的底物与反应性质，底物之间以之间以“：”分隔开。分隔开。3.3.应用：应用：为应用方便，对每一个酶同时推荐为应用方便，对每一个酶同时推荐一个习惯命名。一个习惯命名。(三)酶的命名24(四四)酶的分类与编号酶的分类与编号 氧化还原酶类（氧化还原酶类（oxidoreductasesoxidoreductases）转移酶类（转移酶类（transfereasestransfereases）水解酶类（水解酶类（hydrolaseshydrolases）裂解酶类（裂解酶类（lyaseslyases）异构酶类（异构酶类（isomerasesisomerases）合成酶类（合成酶类（synthetasesynthetase）(四)酶的分类与编号25临床常用酶的名称与编号临床常用酶的名称与编号习惯用名习惯用名英文缩写英文缩写EC 编号编号系统名系统名乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶LD(LDH)1.1.1.27L乳酸：乳酸：NAD+氧化还原酶氧化还原酶异柠檬酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶ICD(ICDH)1.1.1.42异柠檬酸异柠檬酸:NADP+氧化还原酶氧化还原酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶G6PD(G6PDH)1.1.1.49葡萄糖葡萄糖-6-磷酸：磷酸：NADP+氧化还原酶氧化还原酶谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶GLD(GLDH)1.4.1.3L谷氨酸：谷氨酸：NAD+氧化还原酶氧化还原酶单胺氧化酶单胺氧化酶MAO1.4.3.4单胺：单胺：氧化还原酶氧化还原酶-谷氨酰转移酶谷氨酰转移酶-GT/GGT/GGTP2.3.2.2-谷氨酰肽：氨基酸谷氨酰肽：氨基酸-谷氨酰转移酶谷氨酰转移酶糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶GP2.4.1.11,4-D葡聚糖：磷酸葡聚糖：磷酸-D-葡萄糖基转移酶葡萄糖基转移酶谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶GST2.5.1.18RX:谷胱甘肽谷胱甘肽R-转移酶转移酶门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶AST2.6.1.1L(天天)门冬氨酸：门冬氨酸：-酮戊二酸氨基转移酶酮戊二酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶ALT2.6.1.2L丙氨酸：丙氨酸：-酮戊二酸氨基转移酶酮戊二酸氨基转移酶肌酸激酶肌酸激酶CK2.7.3.2三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶脂肪酶脂肪酶LPS(LIP)3.1.1.3甘油三酯酰基水解酶甘油三酯酰基水解酶胆碱酯酶胆碱酯酶ChE3.1.1.8酰基胆碱酰基水解酶酰基胆碱酰基水解酶碱性磷酸酶碱性磷酸酶ALP(AKP)3.1.3.1正磷酸单酯磷酸水解酶正磷酸单酯磷酸水解酶酸性磷酸酶酸性磷酸酶ACP3.1.3.2正磷酸单酯磷酸水解酶正磷酸单酯磷酸水解酶5-核苷酸酶核苷酸酶5-NT3.1.3.55-核糖核苷酸磷酸水解酶核糖核苷酸磷酸水解酶-淀粉酶淀粉酶AMY(AMS)3.2.1.11,4-糖苷糖苷水解酶糖苷糖苷水解酶临床常用酶的名称与编号习惯用名英文缩写EC编号系统名乳酸脱26二、同工酶及亚型的测定二、同工酶及亚型的测定（一）同工酶的概念与特征（一）同工酶的概念与特征同工酶（同工酶（isoenzymeisoenzyme）是催化相同的化学反是催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构、理化性质和免应，而酶蛋白的分子结构、理化性质和免疫性能都存在差异的一组酶。疫性能都存在差异的一组酶。1959年年Markert首次用电泳分离法发现动物首次用电泳分离法发现动物的乳酸脱氢酶具有多种分子形式，并将其称的乳酸脱氢酶具有多种分子形式，并将其称为同工酶。为同工酶。二、同工酶及亚型的测定（一）同工酶的概念与特征同工酶（is27（二）同工酶的分类与命名（二）同工酶的分类与命名按基因分类法：按基因分类法：单基因决定的同工酶、等单基因决定的同工酶、等位基因同工酶、多基因决定的同工酶和修饰位基因同工酶、多基因决定的同工酶和修饰的同工酶。的同工酶。常用的分类方法是按组织来源分类。常用的分类方法是按组织来源分类。同工酶不仅存在于同一个个体的不同组织中，同工酶不仅存在于同一个个体的不同组织中，甚至同一组织、同一细胞的不同亚细胞结构甚至同一组织、同一细胞的不同亚细胞结构中。中。（二）同工酶的分类与命名按基因分类法：单基因决定的同工酶、28人体重要的同工酶酶 同工酶种类 相关疾病 CK CK-BB CK-MB CK-MM 心肌梗死、肌病、颅脑损伤、肿瘤 LD LD1、LD2、LD3、LD4、LD5 心肌梗死、肌病、肺梗死、肝病、肿瘤 ALP 肝、小肠、骨、胎盘、肾 肝胆疾病、骨病、妊娠、结肠炎、肿瘤 ACP 红细胞、前列腺、溶酶体 前列腺癌、血液病、骨肿瘤-GT-GT1-GT2-GT3-GT4 肝癌、梗阻性黄疸 AMY P-AMY、S-AMY 急慢性胰腺炎、腮腺炎 ALT ALTs、ALTm 心肌梗死、肝病 AST ASTs、ASTm 心肌梗死、肝病 人体重要的同工酶29检测同工酶及其亚型的临床意义检测同工酶及其亚型的临床意义 1.1.测定某一种或几种酶诊断疾病测定某一种或几种酶诊断疾病2.2.组织分布、细胞内定位、发生发育方面组织分布、细胞内定位、发生发育方面都可能有所差异，可增加诊断的特异性都可能有所差异，可增加诊断的特异性.例：例：CKCK，大量存在于三种肌肉组织中，单，大量存在于三种肌肉组织中，单独总独总CKCK升高很难判断；骨骼肌升高很难判断；骨骼肌CK-MMCK-MM，平滑，平滑肌肌CK-BBCK-BB，心肌，心肌CK-MB*CK-MB*。检测同工酶及其亚型的临床意义例：CK，大量存在于三种肌肉30三、工具酶三、工具酶临床诊断工具酶：酶学分析作为试剂用于测临床诊断工具酶：酶学分析作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶定化合物浓度或酶活性的酶最常用工具酶：最常用工具酶：1.1.氧化酶系统（偶联氧化酶系统（偶联H2O2H2O2的工具酶）的工具酶）2.2.脱氢酶系统脱氢酶系统三、工具酶最常用工具酶：2.脱氢酶系统31氧化酶系统氧化酶系统原理原理待检物质在相应的氧化酶的催化下，生成待检物质在相应的氧化酶的催化下，生成H H2 2O O2 2。H H2 2O O2 2在以氢为受体的指示酶参与的指示反应中生成在以氢为受体的指示酶参与的指示反应中生成有色物质有色物质应用应用广泛用于血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、胆固醇、广泛用于血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、胆固醇、甘油三酯等化合物浓度项目的测定甘油三酯等化合物浓度项目的测定氧化酶系统原理待检物质在相应的氧化酶的催化下，生成H2O2。32脱氢酶系统脱氢酶系统 利用氧化利用氧化-还原酶反应使其连接到还原酶反应使其连接到NAD(P)-NAD(P)-NAD(P)HNAD(P)H的正的正/逆反应后，通过分光光度法或其他方逆反应后，通过分光光度法或其他方法直接测定法直接测定NAD(P)HNAD(P)H的变化量。的变化量。脱氢酶系统33（二）酶循环法（二）酶循环法 （enzymatic cycling methodsenzymatic cycling methods）是采用两种工具酶进行的循环反映，使被检物信是采用两种工具酶进行的循环反映，使被检物信号放大扩增，从而提高检测灵敏度的酶学方法，号放大扩增，从而提高检测灵敏度的酶学方法，可用于检测微量的标本可用于检测微量的标本6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖+NADP+6-磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖酸+CO2+NADPH6PGD谷氨酸谷氨酸+NADP+NH3+-酮戊二酸戊二酸+NADPHGLDH（二）酶循环法是采用两种工具酶进行的循环反映，使被检物信号放34酶循环法原理：酶循环法原理：物质物质A A 在酶在酶a(Ea)a(Ea)和底物和底物a(Sa)a(Sa)的存在下转化为的存在下转化为物质物质B,B,同时生成产物同时生成产物a(Pa);a(Pa);物质物质B B 又在酶又在酶b(Eb)b(Eb)和底物和底物b(Sb)b(Sb)的存在下转化为物质的存在下转化为物质A,A,同时同时生成产物生成产物b(Pb)b(Pb)。上述反应每循环一次。上述反应每循环一次,将消耗与将消耗与物质物质A A 等量的等量的Sa Sa 和和Sb,Sb,同时生成等当量的同时生成等当量的Pa Pa 和和PbPb。因此在一定时间内因此在一定时间内,循环反应的次数亦就是循环反应的次数亦就是Sa Sa 和和Sb Sb 消耗或消耗或Pa Pa 和和Pb Pb 生成相当于物质生成相当于物质A(A(或物质或物质B)B)的倍的倍数数,通过检测通过检测Sa Sa 或或Sb Sb 的减少或的减少或Pa Pa 或或Pb Pb 的生成就的生成就可以提高检测物质可以提高检测物质A(A(或物质或物质B)B)的的n n 倍灵敏度倍灵敏度.酶循环法原理：物质A在酶a(Ea)和底物a(Sa)35第五章-酶学诊断课件36酶循环法测定血总胆汁酸酶循环法测定血总胆汁酸酶循环法测定血总胆汁酸37固相酶（固相酶（immobilized enzymesimmobilized enzymes）固相酶是将水溶性酶用物理或化学方法处理，使之固相酶是将水溶性酶用物理或化学方法处理，使之成为不溶于水的，但仍具有酶活性的状态。成为不溶于水的，但仍具有酶活性的状态。物理法：物理法：吸附法、包埋法吸附法、包埋法化学法：化学法：共价偶联法、交联法共价偶联法、交联法优点优点:仍具高效催化性和高度专一性；提高了酶对酸仍具高效催化性和高度专一性；提高了酶对酸碱和温度改变的承受能力；反应后易与反应产物分碱和温度改变的承受能力；反应后易与反应产物分离离固相酶和离子敏感型电极组成的生物传感器，可用固相酶和离子敏感型电极组成的生物传感器，可用于测定由酶催化的反应底物于测定由酶催化的反应底物固相酶（immobilizedenzymes）固相酶是将水38（三）代谢物浓度的酶法测定技术（三）代谢物浓度的酶法测定技术1.终点法终点法直接法直接法酶偶联法酶偶联法2.动力学法动力学法（三）代谢物浓度的酶法测定技术1.终点法直接法酶偶联法2.动39第二节第二节 酶活性浓度的测定技术酶活性浓度的测定技术第二节酶活性浓度的测定技术40一、酶活性测定一、酶活性测定根据测定方法分类：根据测定方法分类：量气法、分光光度法（最常用）、荧光量气法、分光光度法（最常用）、荧光法、放射核素法、电极法和其它方法。法、放射核素法、电极法和其它方法。根据对酶促反应时间的选择不同分类：根据对酶促反应时间的选择不同分类：定时法定时法连续监测法连续监测法一、酶活性测定根据测定方法分类：根据对酶促反应时间的选择不同41（一）定时法（一）定时法n定义定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少量或产物的增加量。少量或产物的增加量。n特点：特点：优点是简单优点是简单。缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线 性期。性期。（一）定时法定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少量或42n注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般以以30306060分钟为宜。分钟为宜。注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般以3060分钟为43（二）连续监测法（二）连续监测法n定义：定义：测定底物或产物随时间的变化量，测定底物或产物随时间的变化量，又称为速率法。又称为速率法。n原理：原理：该方法每隔一定时间（该方法每隔一定时间（10s10s60s60s）测定）测定一次底物或产物的变化量，连续测定多点，一次底物或产物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对时间作图，绘制反应速度然后将测定结果对时间作图，绘制反应速度曲线。曲线。（二）连续监测法定义：测定底物或产物随时间的变化量，又称为速44优点优点:能动态观测酶促反应进程，可以明显地找到反能动态观测酶促反应进程，可以明显地找到反应的线性期，结果准确可靠，标本和试剂用量少，应的线性期，结果准确可靠，标本和试剂用量少，可在较短时间内完成测定。可在较短时间内完成测定。缺点：缺点：要求高，要求能够精确地控制温度、要求高，要求能够精确地控制温度、pHpH值和底物值和底物浓度等反应条件，要求仪器具有恒温装置及自动监浓度等反应条件，要求仪器具有恒温装置及自动监测功能，半自动及自动生化分析仪都能达到这些要测功能，半自动及自动生化分析仪都能达到这些要求。求。优点:缺点：451.1.直接连续监测法：直接连续监测法：特点：特点：使用各种分析手段，在不停止酶反应使用各种分析手段，在不停止酶反应条件下直接测反应体系中底物或产物的变条件下直接测反应体系中底物或产物的变化，从而计算出酶活性浓度。化，从而计算出酶活性浓度。v应用最多的方法为应用最多的方法为分光光度法分光光度法。v应用最广的反应系统应用最广的反应系统NAD(P)HNAD(P)H，可以测定大部分的脱氢酶，可以测定大部分的脱氢酶，色素原底物，色素原底物，其本身为无色或微黄色，其本身为无色或微黄色，在酶作用下生成有色化合物，适用于测在酶作用下生成有色化合物，适用于测定水解酶和一些转移酶。定水解酶和一些转移酶。直接连续监测法：46适用范围：当底物与产物之间，在光学性质适用范围：当底物与产物之间，在光学性质或其它理化性质有显著差异时。或其它理化性质有显著差异时。适用范围：当底物与产物之间，在光学性质或其它理化性质有显著差47NAD+（NADP+）和）和NADH（NADPH）相互转变）相互转变NAD+（NADP+）和NADH（NADPH）相互转变482.2.间接连续监测间接连续监测法法适用范围：适用范围：当底物与产物之间，在光学当底物与产物之间，在光学性质或其它理化性质无显著差异时。性质或其它理化性质无显著差异时。特点：特点：在反应系统中加入与酶反应无关的试在反应系统中加入与酶反应无关的试剂，使底物和产物在光学性质上区别。剂，使底物和产物在光学性质上区别。最常用间接法：最常用间接法：酶偶联法酶偶联法在原反应体系中加入另一些酶试剂，所进行在原反应体系中加入另一些酶试剂，所进行的酶促反应与被测酶反应偶联。的酶促反应与被测酶反应偶联。2.间接连续监测法适用范围：当底物与产物之间，在光学性质或其49【酶偶联反应酶偶联反应】酶偶联反应模酶偶联反应模式式（1 1）最简单的模式为：）最简单的模式为：Ex Ex 为待测酶，为待测酶，A A为底物，为底物，B B为中间产物。为中间产物。A A、B B二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二个酶个酶EiEi（为指示酶），其底物为（为指示酶），其底物为B B，反应产物为，反应产物为P P可直接测定。可直接测定。【酶偶联反应】酶偶联反应模式（1）最简单的模式为：50（2 2）如果一些酶促反应找不到合适的指示酶与其）如果一些酶促反应找不到合适的指示酶与其直接偶联，此时还可在始发反应和指示反应之间直接偶联，此时还可在始发反应和指示反应之间加入另一种酶，将二者连在一起，此反应称为辅加入另一种酶，将二者连在一起，此反应称为辅助反应。模式为：助反应。模式为：其中，其中，B B、C C均为中间产物，均为中间产物，EaEa、EiEi都为工具酶。都为工具酶。最后一个酶称指示酶最后一个酶称指示酶EiEi，其他外加的酶都为辅助，其他外加的酶都为辅助酶（酶（EaEa）。）。最常用的指示酶：脱氢酶最常用的指示酶：脱氢酶监测其反应物监测其反应物NAD(P)H在在340nm吸光度变化。吸光度变化。（2）如果一些酶促反应找不到合适的指示酶与其直接偶联，此时还51酶偶联反应原理酶偶联反应原理（1 1）预孵育期：只存在底物）预孵育期：只存在底物A A，不存在指示酶反，不存在指示酶反应。应。（2 2）延滞期：反应启动一段时间，产物）延滞期：反应启动一段时间，产物B B开始出开始出现并逐渐增加，指示酶反应速度也较低。现并逐渐增加，指示酶反应速度也较低。（3 3）线性反应期（稳态期）：）线性反应期（稳态期）：ExEx和和EiEi反应速率相反应速率相同。同。（4 4）非线性反应期：底物消耗，反应速度减慢。）非线性反应期：底物消耗，反应速度减慢。酶偶联反应原理（1）预孵育期：只存在底物A，不存在指示酶反应52酶偶联法测定酶偶联法测定ALTALT的吸光度变化图的吸光度变化图 酶偶联法测定ALT的吸光度变化图53对酶偶联反应的要求对酶偶联反应的要求n指示酶反应必须是一级反应，酶反应速度与指示指示酶反应必须是一级反应，酶反应速度与指示酶底物浓度相关。酶底物浓度相关。对酶偶联反应的要求指示酶反应必须是一级反应，酶反应速度与指示54n指示酶、辅助酶催化的最大反应速度必指示酶、辅助酶催化的最大反应速度必须远远大于测定酶，其所催化的反应必须远远大于测定酶，其所催化的反应必须在中间产物浓度很低的条件下进行，须在中间产物浓度很低的条件下进行，并且将此很快转变为最终产物，反应体并且将此很快转变为最终产物，反应体系中不应有中间产物堆积，否则导致误系中不应有中间产物堆积，否则导致误差。差。指示酶、辅助酶催化的最大反应速度必须远远大于测定酶，其所催化55n指示酶和辅助酶的选择指示酶和辅助酶的选择 高特异性的酶，尤其是指示酶。高特异性的酶，尤其是指示酶。辅助酶的数量较小，减少辅助酶就可以缩短辅助酶的数量较小，减少辅助酶就可以缩短延滞期。延滞期。酶偶联反应的合理性，尽量减少辅助酶。酶偶联反应的合理性，尽量减少辅助酶。应尽量选择应尽量选择Km值小的酶，以缩短延滞期值小的酶，以缩短延滞期 指示酶、辅助酶的最适条件尽量与测定酶接指示酶、辅助酶的最适条件尽量与测定酶接近。近。指示酶和辅助酶的选择56（三）干扰因素（三）干扰因素1.1.其他酶和物质的干扰其他酶和物质的干扰2.2.酶的污染酶的污染3.3.非酶反应非酶反应4.4.分析容器的污染分析容器的污染5.5.沉淀形成沉淀形成（三）干扰因素1.其他酶和物质的干扰57（四）血清酶活性浓度测定条件的优化（四）血清酶活性浓度测定条件的优化 1 1方方法法条条件件的的选选择择 尽尽可可能能采采用用连连续续监监测测法法；减减少少操操作作步步骤骤；化化学学试试剂剂须须具具有有一一定定纯纯度度，不不含含影影响响反反应应速速度度的的杂杂质质；试试验验用用水水最最好好是是纯纯水水或或双双蒸水；建议使用液体双试剂。蒸水；建议使用液体双试剂。2 2测测定定参参数数的的设设置置 内内容容包包括括：方方法法类类型型、波波长长、样样品品量量与与试试剂剂量量、稀稀释释水水量量、反反应应时时间间、孵孵育育时时间间、延延迟迟时时间间、监监测测时时间间、试试剂剂吸吸光光度度上上、下下限限、底底物物耗耗尽尽限限额额、试试剂剂空空白白速速率率、线线性性范范围围及计算因子及计算因子F F值。值。（四）血清酶活性浓度测定条件的优化1方法条件的选择尽583 3仪器和设备仪器和设备推荐使用半自动、全自动生化分析仪及配套设施。推荐使用半自动、全自动生化分析仪及配套设施。4 4试剂试剂化学试剂必须具有一定的纯度，试验用水最后是化学试剂必须具有一定的纯度，试验用水最后是纯水或双蒸水。纯水或双蒸水。3仪器和设备59（五）部分分析前因素对酶活性测定的干扰（五）部分分析前因素对酶活性测定的干扰1.溶血溶血2.抗凝剂抗凝剂3.标本储存温度标本储存温度（五）部分分析前因素对酶活性测定的干扰1.溶血60（六）酶活性浓度的单位（六）酶活性浓度的单位1.酶活性单位酶活性单位惯用单位惯用单位 酶活性测定方法的建立者所规定的单位。由于酶活性测定方法的建立者所规定的单位。由于单位定义不同，参考值差别很大，难以进行比较。单位定义不同，参考值差别很大，难以进行比较。国国际际单单位位（international international unitunit，IUIU）在在特特定定的的条条件件下下，1 1分钟使底物转化分钟使底物转化1 1 molmol的酶量为一个国际单位。的酶量为一个国际单位。以以IUIU表示，表示，1IU=11IU=1 mol.minmol.min-1-1。KatalKatal单单位位 在在规规定定条条件件下下，每每秒秒钟钟转转化化1mol1mol底底物物的的酶酶量量为为1kat1kat，1kat=1mol.s1kat=1mol.s-1-1。常用单位为。常用单位为 katalkatal或或 nkatalnkatal。n Kat Kat与与IUIU的换算关系为：的换算关系为：1IU=11IU=1 molminmolmin-1-1=16.67nmols=16.67nmols-1-1=16.67nkatal=16.67nkatal（六）酶活性浓度的单位1.酶活性单位惯用单位酶活性测定612.酶活性浓度单位酶活性浓度单位临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含的酶活性单位数表示，的酶活性单位数表示，U/L。连续监测法根据连续监测法根据摩尔消光系数摩尔消光系数进行酶活性浓度进行酶活性浓度的计算，公式如下：的计算，公式如下：2.酶活性浓度单位临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含的623.3.参考值和正常上限倍数的应用参考值和正常上限倍数的应用参考区间参考区间不同的实验室由于条件各不相同有不同的参考值，不同的实验室由于条件各不相同有不同的参考值，对于仪器、试剂盒提供的信息都应经过实际验证对于仪器、试剂盒提供的信息都应经过实际验证和统计学处理，以决定是否采用和统计学处理，以决定是否采用正常上限倍数正常上限倍数是把酶测定值转换为正常上限值的倍数，其意义是把酶测定值转换为正常上限值的倍数，其意义在于可将不同方法、不同单位，测定值、参考值在于可将不同方法、不同单位，测定值、参考值均不一致的结果进行比较均不一致的结果进行比较酶的异常以增加较为多见，因此不能以正常下限值酶的异常以增加较为多见，因此不能以正常下限值作为倍数指数作为倍数指数3.参考值和正常上限倍数的应用参考区间正常上限倍数酶的异常以63第五章-酶学诊断课件64(七七)系数系数K K值的计算及应用值的计算及应用 K称为酶活性浓度定量系数称为酶活性浓度定量系数用于临床酶活性测定的计算与校正。用于临床酶活性测定的计算与校正。如如LD活性浓度，已知活性浓度，已知NADH的的 为为6.22 103cm-1.mol-1，血清量为，血清量为50 l，底物液为，底物液为1ml，比色杯光，比色杯光径为径为1cm，则，则K=1.05 106/6.22 103 0.05 1=3376(七)系数K值的计算及应用K称为酶活性浓度定量系数如L65K值高，线性范围宽，重复性差；精密度好，值高，线性范围宽，重复性差；精密度好，K值低，值低，线性范围窄。线性范围窄。因此，因此，K值设置时应考虑测定酶的参考上限值和测定值设置时应考虑测定酶的参考上限值和测定时间时间对于一些参考值较低的酶，可延长测定时间，对于一些参考值较低的酶，可延长测定时间，K值值可设置大一些，最简单的方法是增加稀释倍数。可设置大一些，最简单的方法是增加稀释倍数。在实际工作中，结果会在实际工作中，结果会受到仪器诸多因素的影响，受到仪器诸多因素的影响，应定期检查和实际测定指示酶的应定期检查和实际测定指示酶的 和系数和系数K（即仪（即仪器实测器实测K值）值）K值高，线性范围宽，重复性差；精密度好，K值低，线性范围窄。66（八）临床酶学测定的标准化（八）临床酶学测定的标准化 自学自学（八）临床酶学测定的标准化自学67二、酶质量测定二、酶质量测定 1、免疫化学法测定酶质量的原理、免疫化学法测定酶质量的原理根据抗原抗体反应的原理，利用免疫化学技术，根据抗原抗体反应的原理，利用免疫化学技术，对一些不易测定或测定条件不易掌握的酶进行测对一些不易测定或测定条件不易掌握的酶进行测定，可以提高检验的灵敏度定，可以提高检验的灵敏度可以测定酶的活性和质量可以测定酶的活性和质量二、酶质量测定1、免疫化学法测定酶质量的原理根据抗原抗体反682 2、测定方法、测定方法 放放射射免免疫疫测测定定（RIARIA）、免免疫疫抑抑制制法法、化化学学发发光光免免疫疫测测定定（CLIACLIA）、酶酶免免疫疫测测定定（EIAEIA）、荧荧光光酶免疫测定（酶免疫测定（FEIAFEIA）。）。3 3、结果报告方式、结果报告方式 （1 1）用酶活性浓度单位，结果以）用酶活性浓度单位，结果以U/LU/L表示。表示。（2 2）用用质质量量浓浓度度单单位位，结结果果直直接接用用ng/mlng/ml或或 g/Lg/L表示。表示。4 4、血清酶活性与酶质量的变化的关系、血清酶活性与酶质量的变化的关系2、测定方法695 5、免疫化学测定法的优点：免疫化学测定法的优点：灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶；灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶；特异性高，不受体液中其他物质的影响；特异性高，不受体液中其他物质的影响；能测定一些不表现酶活性的酶蛋白；能测定一些不表现酶活性的酶蛋白；特别适用于测定同工酶。特别适用于测定同工酶。6 6、免疫化学测定的局限性：免疫化学测定的局限性：制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且 工作量大；工作量大；测定步骤多，操作繁琐；测定步骤多，操作繁琐；测定成本高。测定成本高。5、免疫化学测定法的优点：70三、同工酶的分析方法三、同工酶的分析方法 方法方法同工酶（或亚型）的性质差同工酶（或亚型）的性质差异异同工酶、亚型同工酶、亚型电泳法电泳法电荷不同电荷不同所有同工酶、亚型所有同工酶、亚型色谱法色谱法离子交换色谱离子交换色谱电荷不同电荷不同CK，LD免免 疫疫分分 析析法法免疫抑制法免疫抑制法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CK、LD、ACP免免疫疫化化学学测测定法定法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CK、LD、ACP、ALP、AMYACP免疫沉淀法免疫沉淀法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同底物特异性分析法底物特异性分析法底物底物Km、亲和力不同、亲和力不同ACP、CK、LD（-羟羟丁丁酸）酸）抑制剂分析法抑制剂分析法对对小小分分子子量量的的抑抑制制剂剂的的特异性抑制不同特异性抑制不同LD（草草酸酸）、ACP（L-酒酒石酸）、石酸）、ALP（L-苯丙氨酸）苯丙氨酸）pH分析法分析法最适最适pH不同不同LD、AST热失活分析法热失活分析法热稳定性不同热稳定性不同LD、ALP蛋白酶水解法蛋白酶水解法对蛋白水解酶敏感度不同对蛋白水解酶敏感度不同LD、AST三、同工酶的分析方法方法同工酶（或亚型）的性质差异同工酶、71（一）电泳法一）电泳法n同工酶氨基酸组成不同，等电点不同。同工酶氨基酸组成不同，等电点不同。n简单快速、分离效果好，不会破坏酶的简单快速、分离效果好，不会破坏酶的天然状态。天然状态。n应注意巨球分子酶的形成应注意巨球分子酶的形成 酶与免疫球蛋白形成复合物酶与免疫球蛋白形成复合物 酶与其他蛋白形成复合物酶与其他蛋白形成复合物（一）电泳法72血清血清LDLD同工酶琼脂糖凝胶电泳图谱同工酶琼脂糖凝胶电泳图谱 血清LD同工酶琼脂糖凝胶电泳图谱73（二）层析法（二）层析法 离子交换层析和亲和层析等常用于同离子交换层析和亲和层析等常用于同工酶的提纯与制备，也可用于临床同工酶工酶的提纯与制备，也可用于临床同工酶常规检测。常规检测。（三）免疫分析法（三）免疫分析法同工酶一级结构不同，免疫化学性质不同。同工酶一级结构不同，免疫化学性质不同。（四）同工酶的其他分析方法（四）同工酶的其他分析方法（二）层析法74第五章-酶学诊断课件75第三节第三节 常用酶及同工酶测定的常用酶及同工酶测定的 临床应用临床应用第三节常用酶及同工酶测定的76一、一、血清酶血清酶（一）血清酶的来源与去路一）血清酶的来源与去路n血浆特异酶：血浆特异酶：主要作为血浆蛋白的固有成主要作为血浆蛋白的固有成分，在血浆中发挥特定的催化作用的酶。分，在血浆中发挥特定的催化作用的酶。n非血浆特异酶：非血浆特异酶：在血浆中浓度很低且在血在血浆中浓度很低且在血浆中活性很低的酶。浆中活性很低的酶。外分泌酶：外分泌酶：指来源于外分泌腺的酶。指来源于外分泌腺的酶。细胞酶：细胞酶：指存在于各组织细胞中进行代谢指存在于各组织细胞中进行代谢的酶类，随着细胞的新陈代谢，有少量酶的酶类，随着细胞的新陈代谢，有少量酶释出释出放入血流中。放入血流中。一、血清酶（一）血清酶的来源与去路77血浆酶的来源血浆酶的来源血浆酶血浆酶血浆特异酶血浆特异酶非血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶外分泌酶细胞内酶细胞内酶血浆酶的来源血浆酶血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶细胞78酶的区域化分布酶的区域化分布 诊断常用血清断常用血清酶酶的来源的来源鸟氨酸氨基甲酰转移酶鸟氨酸氨基甲酰转移酶OCT肝肝卵磷脂胆固醇酰基转移酶卵磷脂胆固醇酰基转移酶LCAT肝肝谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶GLDH肝肝山梨醇脱氢酶山梨醇脱氢酶SDH肝肝丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶ALT肝、肾、心肝、肾、心异柠檬酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶ICD肝、胎盘、心肝、胎盘、心-谷氨酰转肽酶谷氨酰转肽酶-GT肝、胆、肾、小肠肝、胆、肾、小肠5-核苷酸酶核苷酸酶5-NT肝、胆道肝、胆道单胺氧化酶单胺氧化酶MAO肝、肾、脑肝、肾、脑天门冬氨酸氨基转移酶天门冬氨酸氨基转移酶AST心、肝、骨骼肌心、肝、骨骼肌肌酸激酶肌酸激酶CK骨骼肌、心、脑骨骼肌、心、脑乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶LDH心、肾、骨骼肌、肝、肺心、肾、骨骼肌、肝、肺碱性磷酸酶碱性磷酸酶ALP小肠、胎盘、肝、肾小肠、胎盘、肝、肾酸性磷酸酶酸性磷酸酶ACP前列腺、红细胞、血小板前列腺、红细胞、血小板淀粉酶淀粉酶AMY胰、唾液腺胰、唾液腺脂肪酶脂肪酶LPS胰胰血清酶血清酶符号符号来源来源酶的区域化分布诊断常用血清酶的来源鸟氨酸氨基甲酰转移酶79血清酶的去路血清酶的去路血清酶的半寿期血清酶的半寿期(T1/2)(T1/2)：酶失活至原来的一半时所需的时间。是衡酶失活至原来的一半时所需的时间。是衡量酶从血清中清除快慢的指标。量酶从血清中清除快慢的指标。血清酶的失活和排泄：血清酶的失活和排泄：酶主要在血管内失活或分解。酶经蛋白酶酶主要在血管内失活或分解。酶经蛋白酶水解成低分子多肽或氨基酸，重新利用或水解成低分子多肽或氨基酸，重新利用或排出体外。排出体外。血清酶的去路血清酶的半寿期(T1/2)：80血浆中酶的半寿期血浆中酶的半寿期酶酶半寿期半寿期ASTAST175h175hALTALT4710h4710hGLDGLD181h181hLDLD1 111360h11360hLDLD5 5102h102hCKCK约约15h15hCK-MMCK-MM174h174hCk-MBCk-MB124h124hCK-BBCK-BB约约5h5hALPALP3-73-7天天GGTGGT3-43-4天天CHECHE约约1010天天AMYAMY3-6h3-6hLPSLPS3-6h3-6h血浆中酶的半寿期半寿期AST175hALT4710hGL81（二）血清酶的生理差异（二）血清酶的生理差异1.1.性别：性别：男性男性CKCK、ALPALP、GGTGGT较女性高。较女性高。2.2.年龄：年龄：儿童儿童ACPACP、ALPALP较成人高；新生儿较成人高；新生儿CKCK、LDLD较成人高。较成人高。3.3.进食：进食：高脂、高糖饮食可使高脂、高糖饮食可使ALPALP增高；长期饮酒增高；长期饮酒可使可使GGTGGT增高；禁食可致增高；禁食可致AMYAMY降低。降低。4.4.运动：运动：激烈的肌肉运动可使激烈的肌肉运动可使CKCK、LDLD、ASTAST、ALTALT等增高。等增高。5.5.妊娠：妊娠：妊娠时可使妊娠时可使ALPALP、LDLD、LAPLAP增高。增高。6.6.其他：其他：如种族差异、体重、身高、体位、昼夜如种族差异、体重、身高、体位、昼夜变化及家庭等。变化及家庭等。（二）血清酶的生理差异性别：男性CK、ALP、GGT较女性高82（三）血清酶的临床应用（三）血清酶的临床应用n酶合成异常酶合成异常1.1.合成减少：合成减少：器官病变及酶基因变异时引起酶合器官病变及酶基因变异时引起酶合成减少。成减少。2.2.合成增多：合成增多：增生性疾病可致酶合成增加；酶诱增生性疾病可致酶合成增加；酶诱导作用可使一些血清酶活性增高。导作用可使一些血清酶活性增高。n酶释放增加酶释放增加 酶从病变细胞中释放增加是疾病时大多数血清酶从病变细胞中释放增加是疾病时大多数血清 酶增高的主要机制。酶增高的主要机制。（三）血清酶的临床应用酶合成异常83影响细胞酶释放量的因素影响细胞酶释放量的因素细胞内外酶浓度的差异：细胞内外酶浓度的差异：细胞内酶浓度显著大于细胞外，少量酶释入血液，细胞内酶浓度显著大于细胞外，少量酶释入血液，即引起血清酶明显增高。即引起血清酶明显增高。酶的相对分子量酶的相对分子量酶从细胞内释出的速度与酶的相对分子量成反比。酶从细胞内释出的速度与酶的相对分子量成反比。酶的组织分布酶的组织分布 含酶量高且血流丰富的组织器官，其细胞内酶进入含酶量高且血流丰富的组织器官，其细胞内酶进入 血流的可能性较大，发生病变时可引起血清酶活性变化。血流的可能性较大，发生病变时可引起血清酶活性变化。酶在细胞内的定位和存在形式酶在细胞内的定位和存在形式 存在细胞液中的酶容易释出，存在于线粒体中酶则较存在细胞液中的酶容易释出，存在于线粒体中酶则较 难释出。酶复合体较难释出，而单体难释出。酶复合体较难释出，而单体(游离游离)酶较易释出。酶较易释出。影响细胞酶释放量的因素细胞内外酶浓度的差异：84酶排泄异常酶排泄异常*肾功能减退时，肾功能减退时，可致血清可致血清AMYAMY增高；增高；*胆道梗阻时，胆道梗阻时，可致梗阻区可致梗阻区ALPALP合成增合成增 多，排泄受阻而使多，排泄受阻而使血清血清ALP增高。增高。ALPALP增增高。高。酶排泄异常85血清酶变化机制血清酶变化机制 血清酶变化机制86酶学检测项目的选择及应用酶学检测项目的选择及应用肝病有关酶肝病有关酶ALTALT与与AST AST 肝细胞损害肝细胞损害 轻、中度损伤轻、中度损伤ALTALT升高升高 为主，重度损伤以为主，重度损伤以ASTAST升高明显。升高明显。ALPALP与与GGT GGT 胆汁淤滞，在胆汁排泄受阻的肝胆胆汁淤滞，在胆汁排泄受阻的肝胆 疾病时升高。骨疾病时升高。疾病时升高。骨疾病时升高。MAO MAO 肝脏纤维化，肝纤维化病变及肝硬肝脏纤维化，肝纤维化病变及肝硬 化时可升高。化时可升高。ChE ChE 肝实质细胞功能，肝实质损害致肝肝实质细胞功能，肝实质损害致肝 功能不全时，功能不全时，ChEChE减低。减低。酶学检测项目的选择及应用肝病有关酶ALT与AST肝细胞损87疾病疾病ALTASTAST/ALT病毒性病毒性肝炎肝炎随不同病期和严随不同病期和严重程度而异，常重程度而异，常明显升高，可达明显升高，可达10-100U/L同同ALT，但，但程度没有程度没有ALT明显明显0.8重症肝重症肝炎炎不超过不超过20U/L，出现出现“肝疸分离肝疸分离”增高程度常增高程度常超过超过ALT1.7肝硬化肝硬化 常轻度增高常轻度增高同同ALT，但，但增高程度常增高程度常超过超过ALT2.0疾病ALTASTAST/ALT病毒性肝炎随不同病期和严重程度88GGT的组织分布的组织分布组织组织单位单位/克湿组织克湿组织与血清的比例与血清的比例肾肾22257420胰胰184.5614肝肝86.5288脾脾34113心心13脑脑1137肠肠2170血清血清0.31GGT的组织分布89疾病疾病GGT胆道疾病胆道疾病(胆石症、胆石症、胆道炎症胆道炎症)明显增高明显增高,5-30 U 肝实质疾病肝实质疾病(肝炎，肝硬化肝炎，肝硬化)轻度增高轻度增高,2-5 U 肝癌肝癌明显增高明显增高,5-30 U诱导作用诱导作用(乙醇，苯乙醇，苯巴比妥，含雌激素避巴比妥，含雌激素避孕药等孕药等)轻度升高，停药后降轻度升高，停药后降至正常至正常疾病GGT胆道疾病明显增高,5-30U肝实质疾病轻度增90血清血清ALP升高的主要疾病升高的主要疾病肝胆疾病肝胆疾病骨疾病骨疾病其他情况其他情况阻塞性黄疸阻塞性黄疸畸形性骨炎畸形性骨炎正常发育正常发育胆汁性肝硬化胆汁性肝硬化佝偻病佝偻病妊娠妊娠肝占位性损伤肝占位性损伤骨折愈合期骨折愈合期甲亢甲亢病毒性肝炎病毒性肝炎骨转移癌骨转移癌肝内胆汁淤滞肝内胆汁淤滞软骨病软骨病酒精性肝硬化酒精性肝硬化成骨肉瘤成骨肉瘤血清ALP升高的主要疾病91心肌损伤有关酶心肌损伤有关酶CKCK与与CK-MB CK-MB AMIAMI、心肌炎和肌病、骨骼肌损伤指标。、心肌炎和肌病、骨骼肌损伤指标。AMIAMI时时出现变化及达峰值时间早，但持续时间短；出现变化及达峰值时间早，但持续时间短；CK-MBCK-MB敏感性高于敏感性高于CKCK。AST AST AMIAMI时可升高，其变化仅晚于时可升高，其变化仅晚于CKCK和和CK-MBCK-MB，但早，但早于于LDLD及及LD1LD1。LDLD及及LDLD同工酶同工酶 AMIAMI等心肌病变、肝脏及骨骼肌病变的指标。等心肌病变、肝脏及骨骼肌病变的指标。AMIAMI时时LDLD及及LD1LD1升高，持续时间长，晚于升高，持续时间长，晚于CKCK、ASTAST；肝脏病变时；肝脏病变时LDLD及及LD5LD5升高。升高。心肌损伤有关酶CK与CK-MB92AMIAMI时心肌酶时相变化时心肌酶时相变化 AMI时心肌酶时相变化93人体各组织中人体各组织中LD同工酶分布（同工酶分布（%）组织组织LD1LD2LD3LD4LD5心肌心肌*6729411肾肾52281641肝肝*24112756红细胞红细胞42361552骨骼肌骨骼肌49212741人体各组织中LD同工酶分布（%）94胰腺疾病有关酶胰腺疾病有关酶AMY AMY 血、尿血、尿AMYAMY升高反映急性胰腺炎、慢性胰腺炎升高反映急性胰腺炎、慢性胰腺炎急性发作、胰腺癌和胰腺导管阻塞。血急性发作、胰腺癌和胰腺导管阻塞。血AMYAMY变变化早于尿，但尿化早于尿，但尿AMYAMY升高持续时间长。升高持续时间长。LPS LPS 急性胰腺炎时急性胰腺炎时L