人类疾病动模型评估及分类课件

第一第一节节 人人类类疾病疾病动动模型模型评评估及分估及分类类人类疾病动物模型人类疾病动物模型()()：是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。的动物实验对象和相关材料。一、复制人一、复制人类类疾病疾病动动物模型的物模型的评评估估 1相似性相似性 复制的动物模型应尽可能近似人复制的动物模型应尽可能近似人类疾病，最好能找到与人类疾病相同的类疾病，最好能找到与人类疾病相同的自发性疾病。自发性疾病。2重复性重复性 理想的人类疾病动物模型应该是理想的人类疾病动物模型应该是可重复的，应是可标准化的，不能重复可重复的，应是可标准化的，不能重复的动物模型是无法进行应用研究的。的动物模型是无法进行应用研究的。3可靠性可靠性 复制的动物模型应力求可靠地反映人复制的动物模型应力求可靠地反映人类疾病，即类疾病，即 可特异地反映该种疾病或某种机能、代谢、可特异地反映该种疾病或某种机能、代谢、结构变化，结构变化，同时应具备该种疾病的主要症状和体征，同时应具备该种疾病的主要症状和体征，并经受一系并经受一系 列检测列检测(如心电图、临床生理、生化指标如心电图、临床生理、生化指标检验、病理切片等检验、病理切片等)得以证实。得以证实。4适用性和可控性适用性和可控性 设计复制人类疾病动物模型，应尽量考虑在今后设计复制人类疾病动物模型，应尽量考虑在今后临床能应用和便于控制其疾病的发展，以便于开展研临床能应用和便于控制其疾病的发展，以便于开展研究工作。究工作。5易行性和经济性易行性和经济性 复制动物模型设计，应尽量做到方法容易执行和合乎复制动物模型设计，应尽量做到方法容易执行和合乎经济原则。经济原则。二、二、动动物模型的分物模型的分类类 按产生原因分类按产生原因分类1 1诱发性动物模型诱发性动物模型()()：是是指指研研究究者者通通过过使使用用物物理理的的、化化学学的的、生生物物的的和和复复合合的的致致病病因因素素作作用用于于动动物物，造造成成动动物物组组织织、器器官官或或全全身身一一定定的的损损害害，出出现现某某些些类类似似人人类类疾疾病病时时的的功功能能、代代谢谢或或形形态态结结构构方方面面的的病病变变，即即为为人人工工诱诱发发出出特定的疾病动物模型。特定的疾病动物模型。物理因素物理因素 ：机械损伤、放射线损伤、气压、手术：机械损伤、放射线损伤、气压、手术化学因素化学因素 ：化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧：化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧 伤、某种有机成分的增加或减少导致营伤、某种有机成分的增加或减少导致营养养 性疾病等。性疾病等。生物因素生物因素 ：细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等：细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等 。复合因素复合因素 ：2自发性动物模型自发性动物模型()：指实验动物未经任何人工处置，在自然条件下动指实验动物未经任何人工处置，在自然条件下动物自然发生、或由于基因突变的异常表现通过遗传育物自然发生、或由于基因突变的异常表现通过遗传育种保留下来的动物模型。种保留下来的动物模型。优点：完全在自然条件下发生的疾病，排除了人为的优点：完全在自然条件下发生的疾病，排除了人为的 因素，疾病的发生、发展与人类相应的疾病很因素，疾病的发生、发展与人类相应的疾病很 相似。相似。缺点：来源比较困难，种类有限。缺点：来源比较困难，种类有限。3抗疾病型动物模型抗疾病型动物模型()：是指特定的疾病不会在某种动物身上发生，从而是指特定的疾病不会在某种动物身上发生，从而可以用来探讨为何这种动物对该疾病有天然的抵抗力可以用来探讨为何这种动物对该疾病有天然的抵抗力 的动物模型。的动物模型。4生物医学动物模型生物医学动物模型()：是指利用健康动物生物学特征来提供人类疾病相是指利用健康动物生物学特征来提供人类疾病相似表现的疾病模型。似表现的疾病模型。第二第二节节 肿肿瘤疾病瘤疾病动动物模型物模型分类：分类：自发性肿瘤（自发性肿瘤（）动物模型：）动物模型：指实验动物未经任何有意识的人工处置，在自指实验动物未经任何有意识的人工处置，在自然情况下发生的肿瘤所形成的模型。然情况下发生的肿瘤所形成的模型。诱发性肿瘤（诱发性肿瘤（）动物模型：）动物模型：是使用致癌因素在实验条件下诱发动物发生肿是使用致癌因素在实验条件下诱发动物发生肿瘤的动物模型。瘤的动物模型。移植性肿瘤（移植性肿瘤（）动物模型：）动物模型：指将动物或人体肿瘤移植同种或异种动物连续指将动物或人体肿瘤移植同种或异种动物连续传代而培养出的模型。传代而培养出的模型。诱发性肿瘤模型：诱发性肿瘤模型：方法：方法：原位诱发：指将致癌物直接与动物靶组织或靶器官原位诱发：指将致癌物直接与动物靶组织或靶器官接触而诱发该组织或器官发生肿瘤，接触方法可通接触而诱发该组织或器官发生肿瘤，接触方法可通过涂抹、灌注、喂养或埋置等过涂抹、灌注、喂养或埋置等。异位诱发：将与致癌物接触后的动物组织或器官埋异位诱发：将与致癌物接触后的动物组织或器官埋置于该动物或另一正常动物皮下而产生的该组织或置于该动物或另一正常动物皮下而产生的该组织或器官的肿瘤。异位诱发肿瘤具有易于观察和取材的器官的肿瘤。异位诱发肿瘤具有易于观察和取材的优点。优点。诱癌物：诱癌物：放射线局部照射、化学致癌物（烷化剂、亚硝放射线局部照射、化学致癌物（烷化剂、亚硝胺类、芳香胺类）、生物毒素（黄曲酶毒素）、细胺类、芳香胺类）、生物毒素（黄曲酶毒素）、细菌（幽门螺杆菌）、肿瘤病毒感染。菌（幽门螺杆菌）、肿瘤病毒感染。举例：举例：二乙基亚硝胺二乙基亚硝胺()诱发小鼠肺癌：诱发小鼠肺癌：采用小鼠皮下注射采用小鼠皮下注射1水溶液，每周一次，水溶液，每周一次，(每次剂量为每次剂量为56体重，总剂量为体重，总剂量为868)。观察时间为。观察时间为100d左右。此模型诱发左右。此模型诱发率约率约40%。若将总剂量增到。若将总剂量增到1176时，半年诱发率可达时，半年诱发率可达90以以上。上。亚胺基偶氮甲苯亚胺基偶氮甲苯()诱发小鼠肝癌：诱发小鼠肝癌：用用l苯溶液涂于动物两肩胛间皮肤上，隔日苯溶液涂于动物两肩胛间皮肤上，隔日1次，每次次，每次23滴、一般涂滴、一般涂100次。次。7个月以上诱发肝肿瘤约个月以上诱发肝肿瘤约55。黄曲霉素诱发大鼠肝癌：黄曲霉素诱发大鼠肝癌：在大鼠饲料中加入黄曲霉素，含在大鼠饲料中加入黄曲霉素，含0.011-0.015，喂养，喂养6个个月，诱发率达月，诱发率达80。注意：注意：必须适当选择：致瘤方法、动物种系、致癌物种类必须适当选择：致瘤方法、动物种系、致癌物种类与溶剂、给药剂量与途径及观察时间等尽量简便可与溶剂、给药剂量与途径及观察时间等尽量简便可行，有较好的重复性，并有利于与人肿瘤比较。行，有较好的重复性，并有利于与人肿瘤比较。方法和种系应对所用致瘤物敏感。方法和种系应对所用致瘤物敏感。致癌物的剂量应能保证动物存活率较高、诱发期较致癌物的剂量应能保证动物存活率较高、诱发期较短而又可诱发较高频率的肿瘤短而又可诱发较高频率的肿瘤 移植性肿瘤模型：移植性肿瘤模型：方法：方法：实体瘤移植：实体瘤移植：肿瘤细胞皮下接种肿瘤细胞皮下接种7-10d处死荷瘤动物处死荷瘤动物选择生长良好、无坏死液化的瘤组织选择生长良好、无坏死液化的瘤组织2-33+生理盐水或其它营养液生理盐水或其它营养液无菌套管针抽吸无菌套管针抽吸接种接种同种受体动物右前腋窝皮下。同种受体动物右前腋窝皮下。腹水瘤移植：腹水瘤移植：肿瘤细胞皮下接种肿瘤细胞皮下接种7-10d处死荷瘤动物处死荷瘤动物取腹水取腹水含葡萄糖平衡盐水稀释至适当浓度含葡萄糖平衡盐水稀释至适当浓度腹腔注射（腹水瘤）或皮下注射（实体瘤）。腹腔注射（腹水瘤）或皮下注射（实体瘤）。评价评价:同时接种同样量的瘤细胞，生长速度较一致，个体同时接种同样量的瘤细胞，生长速度较一致，个体差异较小。差异较小。接种成活率近接种成活率近100%。对宿主影响相类似。对宿主影响相类似。可连续传代，试验周期短，条件易于控制。可连续传代，试验周期短，条件易于控制。主要问题是宿主对移植物产生免疫排斥反应。主要问题是宿主对移植物产生免疫排斥反应。第三第三节节 心血管疾病心血管疾病动动物模型物模型高脂饲料诱发高血脂及动脉粥样硬化症高脂饲料诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型模型非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型模型高脂饲料诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型高脂饲料诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型 造模机制：造模机制：动物饲料中加入过量的胆固醇和脂肪，饲养一定动物饲料中加入过量的胆固醇和脂肪，饲养一定时间后，其主动脉及冠状动脉处逐渐形成粥时间后，其主动脉及冠状动脉处逐渐形成粥样硬化斑块，并出现高血脂症。样硬化斑块，并出现高血脂症。高胆固醇和高脂饮食，加入少量胆酸盐，可增加高胆固醇和高脂饮食，加入少量胆酸盐，可增加胆固醇的吸收，如再加入甲状腺抑制药甲基胆固醇的吸收，如再加入甲状腺抑制药甲基硫氧嘧啶或丙基硫氧嘧啶可进一步加速病变硫氧嘧啶或丙基硫氧嘧啶可进一步加速病变的形成。的形成。造模方法造模方法:1.1.小型猪：小型猪：选用系小型猪较为理想，用选用系小型猪较为理想，用1 12 2高脂高脂食物饲喂食物饲喂6 6个月即可形成动脉粥样硬化病变。个月即可形成动脉粥样硬化病变。评价：形成动脉粥样硬化病变特点及分布都与评价：形成动脉粥样硬化病变特点及分布都与人类近似。人类近似。2.2.猴：猴：选用选用3.53.510.510.5，3 36 6岁的恒河猴饲喂高脂岁的恒河猴饲喂高脂饲料饲料(50(50麦粉、麦粉、8 8玉米粉、玉米粉、8 8麦麸、麦麸、1 1胆固醇、胆固醇、8 8蛋黄、蛋黄、8 8猪油、猪油、1717白糖及适量的小苏打和食白糖及适量的小苏打和食盐盐)。1 1个月后造成猴的实验性高血脂症。血清胆固个月后造成猴的实验性高血脂症。血清胆固醇较正常时升高醇较正常时升高3.13.13.23.2倍。倍。评价：猴的胆固醇代谢、血浆脂蛋白组成及高评价：猴的胆固醇代谢、血浆脂蛋白组成及高脂血症与人相似，是较理想的模型。脂血症与人相似，是较理想的模型。3.3.兔：兔：选选用用2 2左左右右体体重重，每每天天胆胆固固醇醇0.3g0.3g，4 4个个月月后后形形成成主主动动脉脉粥粥样样硬硬化化斑斑块块；剂剂量量增增至至0.5g0.5g，3 3个个月月出出现现斑斑块块；增增至至1.0g1.0g，可可缩缩为为2 2个个月月。在在饲饲料料中中加加人人1515蛋蛋黄黄粉粉、0.50.5胆胆固固醇醇和和5%5%猪猪油油，3 3周周后后，将将胆胆固固醇醇减减去去再再喂喂3 3周周，可可使使斑斑块块发发生生率率达达100100，血血清清胆胆固固醇可升高至醇可升高至20002000。评评价价：对对喂喂饲饲胆胆固固醇醇非非常常敏敏感感，在在短短期期内内便便能能出出现现明明显显的的病病变变。因因为为兔兔对对外外源源性性胆胆固固醇醇的的吸吸收收率率可可高高达达75759090，对对高高血血脂脂的的清清除除能能力力低低(静静脉脉注注射射胆胆固醇后，高脂血症可持续固醇后，高脂血症可持续3 34 4天天)。但但兔兔作作模模型型不不够够理理想想，主主要要表表现现为为血血源源性性泡泡沫沫细胞增多，且病变分布与人的病变也有差异。细胞增多，且病变分布与人的病变也有差异。4.4.大鼠：大鼠：配配方方一一饲饲料料(1(1-4-4胆胆固固醇醇、1010猪猪油油，0.2%0.2%甲甲基基硫硫氧氧嘧嘧啶啶、8989-86-86基基础础饲饲料料)，喂喂服服7 71010天天。可形成高胆固醇血症。可形成高胆固醇血症。配配方方二二饲饲料料(10(10蛋蛋黄黄粉粉、5 5猪猪油油、0.50.5胆胆盐、盐、8585基础饲料基础饲料)，喂服，喂服7 7天可形成高胆固醇血症。天可形成高胆固醇血症。评评价价：饲饲养养方方便便、抵抵抗抗力力强强、食食性性与与人人相相近近。所所形形成成的的病病理理改改变变与与人人早早期期者者相相似似，不不易易形形成成似似人人体体的的后期病变，较易形成血栓。后期病变，较易形成血栓。5.5.小鼠：小鼠：雄雄性性小小鼠鼠饲饲以以1 1胆胆固固醇醇及及1010猪猪油油的的高高脂脂饲饲料料，7 7天天后后血血清清胆胆固固醇醇即即升升为为3431534315；若若在在饲饲料料中中再再加加入入0.30.3的的胆胆酸酸，连连饲饲7 7天天，血血清清胆胆固固醇醇可可高高达达5303653036 评评价价：容容易易饲饲养养和和节节省省药药品品等等优优点点，但但是是取取血血不不便便，难做动态观察，所以较少采用。难做动态观察，所以较少采用。6.6.鸡：鸡：4 48 8周周的的莱莱克克亨亨鸡鸡，在在饲饲料料中中加加入入1 1-2-2胆胆固固醇醇或或1515蛋蛋黄黄粉粉，再再加加5 51010猪猪油油，经经过过6 61010周周，血血胆胆固固醇醇即即升升至至1000100040004000，胸胸主主动动脉脉斑斑块发生率达块发生率达100100。评评价价：鸡鸡为为杂杂食食动动物物，仅仅在在普普通通饲饲料料中中加加入入胆胆固固醇醇，就就可可形形成成动动脉脉粥粥样样硬硬化化斑斑块块。病病变变发发生生较较快快，在在斑斑块中有时伴有钙化和形成溃疡。块中有时伴有钙化和形成溃疡。非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型 造模方法造模方法:1.免疫法：免疫法：将大鼠主动脉匀浆给兔注射，可引起血胆固将大鼠主动脉匀浆给兔注射，可引起血胆固醇、醇、脂蛋白及甘油三酯升高。给兔注射马脂蛋白及甘油三酯升高。给兔注射马血清血清10次，共次，共4次，每次间隔次，每次间隔17天。天。评价评价:动脉内膜损伤率为动脉内膜损伤率为88，冠状动脉亦有粥样，冠状动脉亦有粥样硬化的病变，若同时给予高胆固醇饲料，病硬化的病变，若同时给予高胆固醇饲料，病变更加明显。变更加明显。2.2.儿茶酚胺法：儿茶酚胺法：给给兔兔静静脉脉滴滴注注去去甲甲肾肾上上腺腺素素24h24h，时时间间为为3030。一一种种方方法法是是先先滴滴1515，休休息息5 5后后再再滴滴1515。另另一一种种方方法法是是每每次点滴次点滴5 5和休息和休息5 5，反复，反复6 6次。次。评价评价:持持续续两两周周，均均可可引引起起主主动动脉脉病病变变，呈呈现现血血管管壁壁中中层层弱弱性性纤纤维维拉拉长长、劈劈裂裂或或断断裂裂，病病变变中中出出现现坏坏死死及及钙化。钙化。3.3.半胱氨酸法：半胱氨酸法：给给兔兔皮皮下下注注射射同同型型半半胱胱氨氨酸酸硫硫代代内内酯酯每每天天202025(25(以以5 5葡萄糖溶液配成的浓度葡萄糖溶液配成的浓度)，连续，连续20202525天。天。评价：评价：成成年年兔兔及及幼幼兔兔均均可可出出现现动动脉脉粥粥样样硬硬化化的的典典型型病病变变。冠冠状状动动脉脉管管腔腔变变窄窄、动动脉脉壁壁内内膜膜肌肌细细胞胞增增生生、纤纤维维状状异异物物质质。如如同同时时在在饮饮料料中中加加入入2020的的胆胆固固醇醇，则则出现显著的动脉粥样硬化病变。出现显著的动脉粥样硬化病变。4.4.表面活化剂法：表面活化剂法：给大鼠腹腔注射给大鼠腹腔注射 339 300 339 300体重。体重。评价评价:给给药药9h9h后后可可使使血血清清胆胆固固醇醇升升高高3 34 4倍倍；20h20h后后雄雄性性大大鼠鼠血血清清胆胆固固醇醇仍仍为为正正常常的的3-43-4倍倍，而而雌雌性性大大鼠鼠却却为为6 6倍倍左左右右。用用药药后后24h24h左左右右升升脂脂作作用用达达最最高高点点，48h48h左左右右恢恢复复正正常常。其其中中以以甘甘油油三三酯酯升升高高最最强强，其其次次是是磷脂、游离胆固醇，对胆固醇酯没有影响。磷脂、游离胆固醇，对胆固醇酯没有影响。第四第四节节 呼吸、消化疾病呼吸、消化疾病动动物模型物模型肝纤维化动物模型肝纤维化动物模型支气管哮喘动物模型支气管哮喘动物模型 肝纤维化动物模型肝纤维化动物模型 模型概述：模型概述：任何可引起肝损伤的因素长期、反复作用于肝脏，均可任何可引起肝损伤的因素长期、反复作用于肝脏，均可产生肝细胞变性、坏死，继而肝细胞再生和纤维组产生肝细胞变性、坏死，继而肝细胞再生和纤维组织增生，导致肝纤维化。织增生，导致肝纤维化。已有化学性损伤、免疫性、生物学、酒精性和营养性肝已有化学性损伤、免疫性、生物学、酒精性和营养性肝纤维化模型。每种方法因致病因素不同，给药途径纤维化模型。每种方法因致病因素不同，给药途径不同，产生肝硬化的机理、纤维化出现早晚、稳定不同，产生肝硬化的机理、纤维化出现早晚、稳定性、出现率、重复性及机体自然患病过程相似程度性、出现率、重复性及机体自然患病过程相似程度等都不尽相同。等都不尽相同。造模方法：造模方法：1.1.免疫法：免疫法：免免疫疫性性肝肝纤纤维维化化产产生生的的机机理理是是型型变变态态反反应应引引起起，白白蛋蛋白白和和血血清清的的大大分分子子物物质质，作作为为异异种种抗抗原原进进入入大大鼠鼠体体内内后后，刺刺激激其其产产生生相相应应的的抗抗体体，当当抗抗原原再再次次进进人人机机体体后后抗抗原原抗抗体体结结合合，形形成成抗抗原原抗抗体体免免疫疫复复合合物物()()，抗抗原原的的反反复复、长长期期刺刺激激，过过量量的的免免疫疫复复合合物物来来不不及及被被清清除除，沉沉积积于于肝肝脏脏的的血血管管壁壁内内外外，引引起起血血管管炎炎，造造成成肝肝损损伤伤。反反复复导导致致肝肝细细胞胞变变性性、坏坏死死，再再生生，纤纤维维增增生生等等变变化化，最最后后发发展展为为肝肝纤纤维维化、肝硬化。化、肝硬化。动动物物选选用用雄雄性性大大鼠鼠，体体重重130g130g左左右右。取取猪猪血血清清0.50.5，腹腹腔腔内内注注射射，每每周周2 2次次，共共8 8次次(猪猪血血清清的的制制备备：取取新新鲜鲜猪猪血血，离离心心制制血血清清，滤滤过过除除菌菌，分分装装放低温冰箱备用放低温冰箱备用)。评价评价:大大鼠鼠第第3 3周周出出现现肝肝细细胞胞变变性性、坏坏死死，第第4 4周周增增生生的的胶胶原原纤纤维维形形成成纤纤维维束束，从从中中央央静静脉脉到到门门管管区区之之间间相相互互伸延，发生纤维化。伸延，发生纤维化。模型特点：模型特点：肝纤维化出现早，出现率高；肝纤维化出现早，出现率高；动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；纤维化组织中大量胶原增生，纤维化组织中大量胶原增生，、型前胶原增多。型前胶原增多。慢慢性性活活动动性性肝肝炎炎患患者者循循环环免免疫疫复复合合物物多多为为阳阳性性，猪猪血血清清模模型型可可用用慢慢性性肝肝炎炎所所致致肝肝纤纤维维化化的的研研究究，对对于于研研究究免免疫疫复复合合物物的的形形成成，沉沉积积和和清清除除及及对对于于防防治治免免疫疫损伤性肝纤维化有效药物的筛选，具有意义。损伤性肝纤维化有效药物的筛选，具有意义。指标指标猪血清模型猪血清模型白蛋白模型白蛋白模型方法方法简单复杂价格价格经济较贵出现率出现率86.7%77.7%死亡率死亡率040%/31.6%周期周期28d95d猪血清模型与白蛋白模型相比猪血清模型与白蛋白模型相比 2.2.化学性损伤法：化学性损伤法：雄雄性性大大鼠鼠，体体重重130 130 g g左左右右，用用硫硫代代乙乙酰酰胺胺腹腹腔腔内内注注射射，第第1 1次次20100g20100g体体重重，从从第第二二次次起起12100g12100g体体重重，每周注射每周注射2 2次，共次，共8 8周。周。评价评价:第第3 3周周，在在肝肝小小叶叶间间中中间间带带出出现现大大片片的的肝肝细细胞胞变变性性坏坏死死和和炎炎细细胞胞浸浸润润，炎炎细细胞胞浸浸润润、坏坏死死细细胞胞数数和和程程度度超超过过猪猪血血清清模模型型。6 6周周后后出出现现增增生生纤纤维维束束，纤纤维维增增生生晚晚于于和和少少于于猪猪血血清清模模型型。大大鼠鼠肝肝纤纤维维组组织织中中有有I I型型胶原的增多。胶原的增多。3.3.四氯化碳法：四氯化碳法：180180200g 200g 或或大大鼠鼠，皮皮下下注注射射4050440504，油油溶溶液液(0.3100g)(0.3100g)，每每周周2 2次次，第第2 2周周始始，隔隔日日以以2020-30-30酒酒精精灌灌胃胃(或或作作为为唯唯一一饮饮料料)，饲饲以以单单纯纯玉玉米米面面(混混以以0.50.5胆固醇胆固醇)，共，共1010周。周。评评价价：第第2 2周周出出现现小小叶叶中中心心小小片片状状肝肝细细胞胞变变性性坏坏死死，第第4 4周周开开始始有有较较薄薄的的纤纤维维间间隔隔形形成成，第第6 6周周肝肝脏脏间间隔隔进进一一步步增增厚厚，有有假假小小叶叶形形成成：第第8 8周周形形成成厚厚的的纤纤维维间间隔隔，分分割形成假小叶。大鼠成活率割形成假小叶。大鼠成活率6080%6080%。该该模模型型是是目目前前国国内内外外常常采采用用的的动动物物模模型型，可可靠靠且且复复制制时时间间短短，肝肝纤纤维维化化进进展展稳稳定定，适适合合于于肝肝硬硬化化过过程程的动态研究。的动态研究。支气管哮喘动物模型支气管哮喘动物模型 大鼠、豚鼠和狗最常用。根据制模方式可分为：大鼠、豚鼠和狗最常用。根据制模方式可分为：主动免疫致敏动物模型：主动免疫致敏动物模型：利用哺乳类大动物利用哺乳类大动物(如狗、羊和猴如狗、羊和猴)在自然状态下在自然状态下感染线圆虫类寄生虫感染线圆虫类寄生虫(主要是蛔虫主要是蛔虫)，血清中长期存在，血清中长期存在高滴度的抗某一寄生虫抗原的特应性抗体高滴度的抗某一寄生虫抗原的特应性抗体()()，再次受，再次受到这一寄生虫抗原的攻击，即迅速地产生抗原抗体反到这一寄生虫抗原的攻击，即迅速地产生抗原抗体反应，并使呼吸道产生支气管嗜喘反应；应，并使呼吸道产生支气管嗜喘反应；被动免疫致敏动物模型：被动免疫致敏动物模型：在实验前，用特殊的抗原及免疫辅佐剂注入动物在实验前，用特殊的抗原及免疫辅佐剂注入动物体内，使动物致敏后，制备抗血清输入动物使其被动体内，使动物致敏后，制备抗血清输入动物使其被动致敏，再用同一抗原进行攻击建立哮喘模型。致敏，再用同一抗原进行攻击建立哮喘模型。卵白蛋白激发哮喘模型卵白蛋白激发哮喘模型造模机制：造模机制：过过敏敏原原卵卵白白蛋蛋白白注注入入豚豚鼠鼠体体内内，其其可可溶溶性性抗抗原原刺刺激激机机体体产产生生抗抗体体，使使机机体体处处于于致致敏敏状状态态。当当豚豚鼠鼠再再次次接接触触此此抗抗原原时时，介介导导发发生生抗抗原原抗抗体体反反应应，使使细细胞胞脱脱颗颗粒粒，释释放放出出活活性性化化学学物物质质如如组组胺胺、嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞趋趋化因子等，作用于支气管引起气道高反应致哮喘。化因子等，作用于支气管引起气道高反应致哮喘。造模方法：造模方法：豚豚鼠鼠：200200300g300g豚豚鼠鼠，第第1 1天天和和8 8天天，0.50.5卵卵白白蛋蛋白白溶溶于于生生理理盐盐水水1010加加至至超超声声雾雾化化吸吸入入器器，用用简简易易面面罩罩雾雾化化吸吸入入1010，第第16201620天天将将致致敏敏动动物物置置于于密密闭闭的的容容器器内内，用用1 1卵卵白白蛋蛋白白气气雾雾激激发发，使使动动物物暴暴露露在在卵卵白白蛋蛋白白气气雾中雾中10103030，至出现哮喘样发作。，至出现哮喘样发作。评价：评价：出出现现咳咳嗽嗽、烦烦躁躁、口口唇唇和和四四肢肢紫紫绀绀，呼呼吸吸费费力力。生生理理记记录录仪仪描描记记呼呼吸吸曲曲线线，出出现现呼呼吸吸频频率率加加快快和和呼呼吸吸加加深深。病病理理检检查查发发现现毛毛细细血血管管扩扩张张，嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞浸浸润，腺体分泌活动亢进。润，腺体分泌活动亢进。该该模模型型是是国国内内外外常常用用的的方方法法，方方法法简简单单，复复制制性性强强，且且豚豚鼠鼠是是最最好好的的显显示示气气道道高高反反应应型型的的特特征征动动物物，其其哮哮喘喘发发作作与与人人表表现现相相似似。主主要要用用于于哮哮喘喘发发病病机机制制的的研究和治疗观察。研究和治疗观察。2.2.大鼠：大鼠：4 46 6周龄周龄120120180g180g雄性大鼠，腹腔注射雄性大鼠，腹腔注射卵白蛋白卵白蛋白100100抗原液抗原液1 1，灭活百日咳杆菌疫苗，灭活百日咳杆菌疫苗51095109个和氢氧化铝干粉个和氢氧化铝干粉100100致敏。致敏。2 2周后用超声雾化器向周后用超声雾化器向箱内喷雾箱内喷雾1 1卵白蛋白，吸入卵白蛋白，吸入2020激发。激发。3.3.评价：评价：4.4.表现呼吸气促，严重者呼吸减慢或节律不齐、表现呼吸气促，严重者呼吸减慢或节律不齐、轻度紫绀、四肢瘫软、行动迟滞或俯伏不动、反应轻度紫绀、四肢瘫软、行动迟滞或俯伏不动、反应迟钝，连续激发后大鼠体重减轻、毛色失去光泽、迟钝，连续激发后大鼠体重减轻、毛色失去光泽、反应迟钝。本模型适用于特异性抗原抗体反应的研反应迟钝。本模型适用于特异性抗原抗体反应的研究，有速发和迟发双相反应。究，有速发和迟发双相反应。邻苯二甲酸酐邻苯二甲酸酐()()致变应性哮喘模型致变应性哮喘模型机制：机制：苯苯酐酐是是小小分分子子化化合合物物，属属半半抗抗原原。由由于于半半抗抗原原不不能能刺刺激激机机体体产产生生免免疫疫反反应应，故故需需与与蛋蛋白白结结合合成成全全抗抗原原，形形成成新新的的抗抗原原决决定定簇簇而而发发挥挥致致敏敏作作用用。据据此此实实验验制制备备了了两两种种不不同同载载体体的的苯苯酐酐全全抗抗原原即即和和。用用致致敏敏的的抗抗血血清清给给正正常常动动物物注注射射使使其其致致敏敏，并并在在相相应应抗抗原原吸吸入入攻攻击击下下同样可诱发出哮喘。同样可诱发出哮喘。方法：方法：2-32-3月月龄龄250300g250300g豚豚鼠鼠。用用3030苯苯酐酐以以丙丙酮酮溶溶解解后后，加加入入4242 9%9%碳碳酸酸氢氢钠钠溶溶液液中中，并并搅搅拌拌1h1h形形成成。同同法法制制备备。将将制制备备的的抗抗原原与与弗弗氏氏完完全全佐佐剂剂等等量量研研磨磨，使使之之成成油油包包水水状状。腹腹腔腔或或后后腿腿肌肌肉肉注注射射0.20.20.30.3只只(含含蛋蛋白白4-6)4-6)。注注射射3 38 8周周后后抗抗原原吸吸入入激激发发。动动物物俯俯卧卧固固定定，激激发发前前描描记记正正常常的的呼呼吸吸曲曲线线。用用1:1000 1:1000 盐盐水水溶溶液液雾化后吸入雾化后吸入1 13 3，观察记录，观察记录0.5h0.5h。模型评价：模型评价：豚豚鼠鼠吸吸入入抗抗原原后后1-101-10内内，表表现现为为呼呼吸吸频频率率加加快快，由由100120100120次次增增加加到到140140160160次次；呼呼吸吸幅幅度度增增大大，同同时时伴伴有有咳咳嗽嗽、喷喷啑啑，重重者者呼呼吸吸极极度度费费力力、挣挣扎扎，有有短短暂窒息甚至死亡。发作一般持续暂窒息甚至死亡。发作一般持续30305050。是是确确切切的的职职业业性性致致喘喘物物质质。苯苯酐酐哮哮喘喘属属变变应应性性哮哮喘喘，患患者者体体内内可可测测出出特特异异性性抗抗体体，苯苯酐酐抗抗原原吸吸入入激激发发试试验验常常呈呈现现阳阳性性。本本模模型型的的建建立立，为为进进一一步步研研究该哮喘的病理变化提供了条件。究该哮喘的病理变化提供了条件。血小板活性因子血小板活性因子()()诱发哮喘模型诱发哮喘模型 造模机制造模机制 是是目目前前已已知知的的唯唯一一能能引引起起气气道道高高反反应应性性炎炎症症介介质质。引引发发哮哮喘喘发发作作的的原原因因可可能能是是通通过过嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞的的活活化化趋趋向向、脱脱颗颗粒粒、释释放放嗜嗜酸酸性性细细胞胞蛋蛋白白X()X()、嗜嗜酸酸性性细细胞胞阳阳离离子子蛋蛋白白()()和和碱碱性性蛋蛋白白等等细细胞胞毒毒性性物物质质引引起起气气道道上上皮皮细细胞胞损损伤伤和和脱脱落落。另另外外，激激活活的的嗜嗜酸酸性性细细胞胞本本身身又又合合成成和和释释放放，使使这这一一过过程程加加剧剧，最最终终引引起起气气道道高高反应性。反应性。方法方法:300500g300500g雄雄性性豚豚鼠鼠，激激发发实实验验当当天天，采采用用含含0.250.25生生理理盐盐水水，将将稀稀释释成成500500，按按15001500的的剂剂量量雾雾化化吸吸入入，即即引起豚鼠哮喘发作。引起豚鼠哮喘发作。评价评价:激激发发豚豚鼠鼠哮哮喘喘发发作作不不需需致致敏敏过过程程，直直接接利利用用其其特特性性而而引引发发气气道道的的高高反反应应性性，本本模模型型主主要要用用于于研研究究哮哮喘喘病因学和发病机制的研究。病因学和发病机制的研究。第五第五节节 内分泌、内分泌、营营养疾病养疾病动动物模型物模型糖尿病动物模型糖尿病动物模型缺铁性贫血动物模型缺铁性贫血动物模型维生素维生素D D缺乏性佝偻病动物模型缺乏性佝偻病动物模型模型概述模型概述 糖尿病动物模型复制方法主要包括糖尿病动物模型复制方法主要包括5 5种：种：注注射射致致高高血血糖糖因因子子，如如生生长长激激素素、胰胰高高糖糖素素、糖糖皮皮质质激激素素以以及及儿儿茶茶酚酚胺胺类类激激素素等等，复复制制出出某某些些继继发发性性糖糖尿尿病病模型。模型。注注射射化化学学物物质质引引起起胰胰岛岛细细胞胞的的损损伤伤，如如链链脲脲佐佐菌菌素素()()、四四氧氧嘧嘧啶啶、二二苯苯硫硫代代卡卡肥肥腙腙可可造造成成胰胰岛岛细细胞胞不不可可逆逆损损伤伤；环环丙丙庚庚哌哌、天天门门冬冬素素酶酶、66氨氨基基尼尼克克酰酰胺胺、22脱脱氧氧葡葡萄萄糖糖、甘甘露露庚庚酮酮糖糖可可引引起起细细胞胞可可逆逆性性损损伤。伤。糖尿病动物模型糖尿病动物模型3.3.注射生物及生物制品引起注射生物及生物制品引起细胞破坏，如鼠脑炎、心肌炎病毒细胞破坏，如鼠脑炎、心肌炎病毒M M型变异可诱发若干品系的成年小鼠糖尿病，型变异可诱发若干品系的成年小鼠糖尿病，11在一定剂量和在一定剂量和范围内对范围内对细胞有选择性细胞毒作用，导致。细胞有选择性细胞毒作用，导致。4.4.手术切除胰腺的大部分或全部，并给予高糖饮食刺激，引起继手术切除胰腺的大部分或全部，并给予高糖饮食刺激，引起继发性永久性糖尿病。发性永久性糖尿病。5.5.筛选、引种、繁殖遗传性及自发性糖尿病，这类动物模型更接筛选、引种、繁殖遗传性及自发性糖尿病，这类动物模型更接近人类糖尿病的自然起病及发展，尤其适于研究糖尿病的病因近人类糖尿病的自然起病及发展，尤其适于研究糖尿病的病因学。学。造模方法造模方法 病毒诱发法病毒诱发法 2 2雌雌性性小小鼠鼠，皮皮下下接接种种脑脑炎炎、心心肌肌炎炎病病毒毒M M型型变变异异株株4747天天后后出出现现明明显显的的高高血血糖糖，伴有血中及胰腺中胰岛素含量降低。伴有血中及胰腺中胰岛素含量降低。评价：评价：其其高高血血糖糖为为特特发发性性，伴伴明明显显低低胰胰岛岛素素血血症症，在在某某些些小小鼠鼠中中可可自自然然缓缓解解，但但糖糖耐耐量量异异常常及及高高血血糖糖在在恢恢复复期期中中仍仍将将存存在在，其其生生化方面与人类相似。化方面与人类相似。2.2.四氧嘧啶法四氧嘧啶法 3.3.大大鼠鼠200g200g左左右右，4040四四氧氧嘧嘧啶啶静静脉脉注注射射1 1次次，观察血糖观察血糖300300，持续，持续2 2周可以认为造模成功。周可以认为造模成功。4.4.链脲佐菌致糖尿病大鼠链脲佐菌致糖尿病大鼠 5.5.链链脲脲佐佐菌菌素素可可造造成成动动物物胰胰岛岛细细胞胞大大量量坏坏死死，通通过过不不同同给给药药方方法法，可可复复制制出出速速发发型型类类似似和和迟迟发型类似的动物模型。发型类似的动物模型。1)1)速发型：速发型：2)2)用用0.10.1无无菌菌枸枸橼橼酸酸枸枸橼橼酸酸钠钠缓缓冲冲液液新新鲜鲜配配制制成成2 2溶溶液液，调调节节至至4.54.5，滤滤菌菌器器过过滤滤除除菌菌。大大鼠鼠禁禁食食10h10h按按50506565腹腹腔腔内内或或尾尾静静脉脉一一次次性性注注射射，24h24h内内随随机机血血糖糖16.716.7，稳稳定定5d5d即即可作为成功模型。可作为成功模型。3)3)迟发型：迟发型：4)4)链链脲脲佐佐菌菌配配制制同同前前，福福氏氏佐佐剂剂()()按按4:14:1称称取取液液体体石石蜡蜡和和羊羊毛毛脂脂，研研碎碎混混匀匀，经经高高压压消消毒毒后后低低温温保保存存，使使用用前前按按1.50.51.50.5加加入入无无菌菌灭灭活活卡卡介介苗苗。第第1 1天天腹腹腔腔注注射射0.50.5，次次日日按按2525腹腹腔腔内内注注射射溶溶液液。每每周周1 1次次，连连续续3 3周周，第第2 2周周部部分分大大鼠鼠就就可可成成模模型，第型，第3 3周成模率周成模率87.587.5。评价：评价：速速发发型型 一一次次足足量量给给予予链链脲脲佐佐菌菌素素，造造成成细细胞胞大大量量损损伤伤，胰胰岛岛素素合合成成和和分分泌泌减减少少，引引起起糖糖代代谢谢紊紊乱乱，导导致致糖糖尿尿病病。速速发发型型模模型型较较适适于于的的相相关关研研究究。通通常常单单剂剂量量达达5050体体重重不不出出现现自自然然缓缓解解现现象象，第第6 62727天天，胰胰岛岛有有一定程度再生，功能部分恢复，但仍处于高血糖状态。一定程度再生，功能部分恢复，但仍处于高血糖状态。迟迟发发型型 福福氏氏完完全全佐佐剂剂可可激激发发机机体体免免疫疫功功能能，将将小小剂剂量量和和联联合合使使用用，可可激激活活大大鼠鼠体体内内淋淋巴巴细细胞胞诱诱导导胰胰岛岛细细胞胞发发生生轻轻度度改改变变，被被激激活活的的可可将将轻轻度度变变性性的的细细胞胞作作靶靶细细胞胞攻攻击击，导导致致自自身身免免疫疫，胰胰岛岛细细胞胞损损害害加加重重，引引起起糖糖尿尿病病。迟迟发发型型模模型型有有免免疫疫学学的的改改变变，更更接接近近人人类类的的发发生生发发展展变变化化，有有报报道道可可测测得得大大鼠鼠体体内内抗抗胰胰岛岛细细胞胞抗体。抗体。化化学学诱诱导导是是一一种种简简便便，价价廉廉的的方方法法。其其中中优优于于四四氧氧嘧嘧啶啶，其其造造模模稳稳定定，快快速速，无无自自然然缓缓解解，种种属属选选择择性性不不强强(豚豚鼠鼠只只能能用用链链脲脲菌菌素素造造模模)，复复制制前前不不需需禁禁食食。糖糖尿尿病病形形成成后后无无需需特特意意安安排排动动物物饲饲养养条条件件。可可作作用用于于对对四四氧氧嘧嘧啶啶致致糖糖尿尿作作用用有有抵抵抗抗的的豚豚鼠鼠。但价格较四氧嘧啶贵。但价格较四氧嘧啶贵。四四氧氧嘧嘧啶啶和和链链脲脲菌菌素素均均为为一一种种可可以以选选择择性性作作用用于于胰胰岛岛细细胞胞的的化化学学物物质质，其其作作用用机机制制目目前前有有不不同同认认识识，有有人人认认为为是是破破坏坏了了细细胞胞本本身，有人则认为仅是细胞脱颗粒或是胞膜上葡萄糖受体的变化。身，有人则认为仅是细胞脱颗粒或是胞膜上葡萄糖受体的变化。4.4.高糖饲喂诱发法高糖饲喂诱发法 5.5.选用选用大鼠大鼠5 5周龄，喂饲含周龄，喂饲含5454庶糖饮食。庶糖饮食。1 1个月时，观察到异常，个月时，观察到异常，6.56.5个月时胰岛素反应异常，个月时胰岛素反应异常，9 9个月时可见体重减轻，衰弱。个月时可见体重减轻，衰弱。6.6.评价：评价：7.7.一些动物品系有自发或在施加诱导的条件下一些动物品系有自发或在施加诱导的条件下发生糖尿病的倾向。大鼠模型某些代谢和组织病理发生糖尿病的倾向。大鼠模型某些代谢和组织病理特征与人类非胰岛素依赖性糖尿病相似，该模型还特征与人类非胰岛素依赖性糖尿病相似，该模型还可观察糖尿病肝肾损害。可观察糖尿病肝肾损害。缺铁性贫血动物模型缺铁性贫血动物模型 缺铁性贫血（）发生的主要原因是缺铁性贫血（）发生的主要原因是由于铁的摄入不足和由于铁的摄入不足和/或铁丢失过多，引或铁丢失过多，引起机体血红蛋白合成障碍导致。模型有起机体血红蛋白合成障碍导致。模型有大鼠、小鼠、兔、鸡、猫、狗、猴等，大鼠、小鼠、兔、鸡、猫、狗、猴等，其中以大鼠最为常用。其中以大鼠最为常用。方法：方法：给予低铁饮食。饲料含铁量给予低铁饮食。饲料含铁量5050能满足大鼠的基能满足大鼠的基本需要，低铁饲料的铁含量本需要，低铁饲料的铁含量1010，标准饲料，标准饲料铁含量为铁含量为220-270220-270。饲料配方以酪蛋白或脱脂。饲料配方以酪蛋白或脱脂奶粉作为蛋白来源，玉米淀粉或蔗糖作为碳奶粉作为蛋白来源，玉米淀粉或蔗糖作为碳水化合物来源，加入植物油，混合维生素和水化合物来源，加入植物油，混合维生素和混合无机盐配制。近来通过络合剂混合无机盐配制。近来通过络合剂1212除去国除去国产饲料中的铁，取得满意的实验结果。产饲料中的铁，取得满意的实验结果。给动物逐次少量放血，造成铁的慢性丢失。通常给动物逐次少量放血，造成铁的慢性丢失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起铁的采用剪尾的方法，一方面放血不但引起铁的丢失，而且还可以引起其它营养素的丢失；丢失，而且还可以引起其它营养素的丢失；另一方面剪尾易引起动物感染而死亡。另一方面剪尾易引起动物感染而死亡。低铁饮食辅以定期少量放血。低铁饮食辅以定期少量放血。评价：评价：大鼠早期大鼠早期(100)(100)表现为毛发生长差、脱毛、眼表现为毛发生长差、脱毛、眼球肿胀突出、苍白、兴奋为主，晚期球肿胀突出、苍白、兴奋为主，晚期(60)(60)表现为倦怠、活动减少，易感染为主；表现为倦怠、活动减少，易感染为主；血液学及生化检查表现为血红蛋白及骨髓铁血液学及生化检查表现为血红蛋白及骨髓铁(功功能池能池)、血清浓度、血清浓度(交换池交换池)、血清运铁蛋白及、血清运铁蛋白及肝脏铁含量肝脏铁含量(贮存池贮存池)均显著低于正常对照组。均显著低于正常对照组。其中以血红蛋白和骨髓铁的变化较敏感。其中以血红蛋白和骨髓铁的变化较敏感。低铁饲料喂养大鼠低铁饲料喂养大鼠5 5、6 6周即可复制出上述表现，周即可复制出上述表现，F344F344、大鼠的反应性优于大鼠。、大鼠的反应性优于大鼠。此模型形成期短、稳定、可行，是研究的一个可此模型形成期短、稳定、可行，是研究的一个可靠动物模型。靠动物模型。维生素维生素D缺乏性佝偻病动物模型缺乏性佝偻病动物模型 可从食物中摄取，即外源性，另外，皮肤中可从食物中摄取，即外源性，另外，皮肤中7-脱氢胆固醇经日光紫外线照射后可转变脱氢胆固醇经日光紫外线照射后可转变3，即内源性即内源性3。阻断饲料中维生素。阻断饲料中维生素D摄入减少光摄入减少光照，可制成维生素照，可制成维生素D缺乏性佝偻病模型。佝偻缺乏性佝偻病模型。佝偻病模型建立较方便、可行，重复性好，可采用病模型建立较方便、可行，重复性好，可采用不同动物。不同动物。方法：方法：1 1大鼠大鼠 20-21d 20-21d断奶大鼠给予不含饲料，常见配方断奶大鼠给予不含饲料，常见配方(玉米玉米76%76%，蛋清粉，蛋清粉5%5%，小麦麸，小麦麸13%13%，碳酸钙，碳酸钙5%5%，食盐，食盐1%1%或玉或玉米米76%76%，赖氨酸，赖氨酸0.5%0.5%，小麦麸，小麦麸20%20%，碳酸钙，碳酸钙3%3%，食盐，食盐1%)1%)。钙、磷的含量根据实验设计确定。大鼠饲养于避光环钙、磷的含量根据实验设计确定。大鼠饲养于避光环境，于境，于2l2l、3030、5555、77d77d活杀。活杀。大鼠在饲养大鼠在饲养20-30d20-30d时血清钙磷降低，碱性磷酸酶时血清钙磷降低，碱性磷酸酶增高；骨增高；骨X X光片示先期钙化带模糊，干垢端毛糙，毛刷光片示先期钙化带模糊，干垢端毛糙，毛刷状改变；骨病理切片显示软骨细胞向骨干呈舌岛状增状改变；骨病理切片显示软骨细胞向骨干呈舌岛状增生，骨化线参差不齐。判定模型成功。生，骨化线参差不齐。判定模型成功。2猪 用不含维生素D的饲料养母猪，避光，产仔后继续原饲料喂养，仔猪于6-12周时出现佝偻病体征。检测血清1-羟化酶活力增高，表示猪佝偻病模型成立。在治疗4周后(1，25-()2D3)，佝偻病仔猪1-羟化酶活力无变化。提示佝偻病仔猪为1，25-()2D3产生的先天缺陷。第六第六节节 神神经经系系统统疾病疾病动动物模型物模型疼痛动物模型疼痛动物模型记忆动物模型记忆动物模型癫痫动物模型癫痫动物模型疼痛动物模型疼痛动物模型 疼痛作为主观的感受和体验，是一种复杂的生理心理反应。动物实验只能间接借助由于伤害性刺激引起的“痛”反应作为测量指标。按刺激性质可分为四大类，即热刺激法、电刺激法、机械刺激法和化学刺激法。一、大鼠光热法一、大鼠光热法 造模机制：造模机制：用用小小型型聚聚光光灯灯产产生生一一定定强强度度的的光光束束，经经凸凸透透镜镜聚聚焦焦照照射射大大鼠鼠的的尾尾巴巴或或家家兔兔鼻鼻部部以以致致痛痛，大大鼠鼠以以甩甩尾尾为为痛痛反应指标，家兔以甩头为痛反应指标。反应指标，家兔以甩头为痛反应指标。方法：方法：200g雄雄性性大大鼠鼠，装装入入固固定定筒筒内内，尾尾巴巴外外露露，先先用用75乙乙醇醇擦擦净净尾尾部部，用用墨墨汁汁在在尾尾部部下下1/3处处标标出出光光刺刺激激点点的位置的位置(墨汁能易于吸热墨汁能易于吸热)。调调节节辐辐射射热热测测痛痛仪仪的的焦焦距距，在在聚聚焦焦的的鼠鼠台台档档板板作作标标记记，使使鼠鼠尾尾光光刺刺激激点点位位置置与与档档板板上上标标记记重重合合。每每次次实实验验于每日同一时间进行。于每日同一时间进行。照照射射开开始始到到甩甩尾尾反反应应的的潜潜伏伏期期为为痛痛阈阈。负负载载电电压压20V，选选用用潜潜伏伏期期在在5s以以内内的的动动物物。实实验验开开始始时时先先测测3次次，每次间隔每次间隔5，计算其平均值为基础痛阈。，计算其平均值为基础痛阈。为为防防止止皮皮肤肤灼灼伤伤，光光照照截截止止时时间间10s或或以以潜潜伏伏期期升升高高150为限。为限。模型评价模型评价 大大鼠鼠甩甩尾尾法法操操作作方方便便，反反应应恒恒定定，重重复复性性好好，对对于于筛筛选选麻麻醉醉性性镇镇痛痛药药及及非非麻麻醉醉性性镇镇痛痛药药均均适适用用，故故使使用用最最多多。但但甩甩尾尾反反应应是是一一种种脊脊髓髓反反应应，骨骨骼骼肌肌松松弛弛药药也也可出现阳性结果。可出现阳性结果。二、小鼠热板法二、小鼠热板法造模机制造模机制 把把小小鼠鼠放放在在事事先先加加热热到到55的的金金属属板板上上，以以舔舔后足或跳跃作为疼痛反应指标。后足或跳跃作为疼痛反应指标。方法：方法：20g雌性小鼠。雌性小鼠。恒恒温温水水浴浴至至550.5，金金属属盘盘的的底底部部接接触触水水面面，记记录录小小鼠鼠自自投投人人热热板板至至出出现现舔舔后后足足的的时时间间(s)作作为为该该鼠鼠的的痛痛阈阈值。值。给给药药前前先先测测定定每每只只小小鼠鼠的的痛痛阈阈(共共测测2次次，以以平平均均值值不不超超过过30s者为合格者为合格)。给药后每隔。给药后每隔0.5-1h测定测定1次，连续数次。次，连续数次。痛痛阈阈值值超超过过60s，即即停停止止测测试试并并按按60s计计(时时间间过过久久，易易烫烫伤足部伤足部)。模型评价模型评价本本法法简简便便易易行行，痛痛感感指指标标明明确确易易于于观观察察，对对组组织织损损伤伤小小，动动物物可可反反复复利利用用，为为目目前前常常用用的的方方法法之之一一，但但对对作作用用较弱的镇痛药不太敏感。较弱的镇痛药不太敏感。室室温温对对实实验验有有影影响响，室室温温过过低低小小鼠鼠反反应应迟迟钝钝，过过高高则则敏敏感感，易引起跳跃。室温在易引起跳跃。室温在13-18范围内动物反应波动较小。范围内动物反应波动较小。动动物物实实验验前前应应通通过过跳跳台台试试验验()、避避暗暗试试验验()、迷迷津津(，包包括括Y型型迷迷宫宫、水水迷迷宫宫等等)进进行行训训练练，使使动动物物建建立立一一定定的的条条件件反反射射，学学习习和和记记忆忆逃逃避避电电击击或或寻寻觅觅食食物物的的能能力力，然然后后给给予予损损害害中中枢枢神神经经系系统统因因素素后后，观观察察动动物物记忆的保留情况。记忆的保留情况。记忆动物模型记忆动物模型一、跳台试验一、跳台试验雄性小鼠，体重雄性小鼠，体重25-28g。跳跳台台试试验验装装置置：跳跳台台为为13l3l7的的被被动动回回避避反反应应箱箱，底底板板设设有有铜铜栅栅，可可通通交交流流电电；电电压压为为30V。铜铜栅栅的的一一角角放放置置一一直直径径为为4、高高4.5的的橡橡皮皮圆圆台台为为安安全全区区。动动物物可可停停留留在在圆圆台台上上回回避避电击。电击。3.先先将将小小鼠鼠放放入入回回避避反反应应箱箱内内自自由由活活动动2熟熟悉悉环环境境，然然后接通铜栅电源，动物即跳到橡皮圆台上回避电击。后接通铜栅电源，动物即跳到橡皮圆台上回避电击。4.训训练练小小鼠鼠使使之之在在圆圆台台上上能能持持续续停停留留5的的目目标标，记记录录在在达达此此目目标标前前动动物物跳跳下下台台的的次次数数(错错误误次次数数)和和每每次次受受到到电击的时间总和，并以此作为学习训练的成绩。电击的时间总和，并以此作为学习训练的成绩。5.学学习习训训练练完完成成后后15重重新新将将小小鼠鼠放放到到圆圆台台上上，记记录录5内内小小鼠鼠跳跳下下台台的的次次数数(错错误误次次数数)及及在在台台下下受受电电击击的的时时间间总总和和，以以此此成成绩绩作作为为第第一一次次记记忆忆试试验验成成绩绩。24h后后重重复上述试验为第二次记忆试验成绩。复上述试验为第二次记忆试验成绩。二、水迷宫二、水迷宫体重体重250-300 9雄性大鼠。雄性大鼠。跳跳台台反反应应箱箱与与回回避避反反应应箱箱结结构构类类似似而而体体积积较较大大，为为90l860有有机机玻玻璃璃箱箱，用用不不透透明明板板分分隔隔为为5间间。箱箱底底为为铜铜栅栅，通通电电压压为为36V的的交交流流电电，每每间间内内置置一一高高4.5、直直径径6.5的的橡橡皮皮垫垫，作作为为大大鼠回避电击的安全区。鼠回避电击的安全区。整整个个迷迷路路设设置置四四个个盲盲端端，终终点点有有一一高高出出水水平平面面的的安全台。水深安全台。水深20，水温，水温252。4.学习获得期：学习获得期：5.正正式式训训练练前前将将大大鼠鼠放放在在安安全全台台附附近近，让让其其自自行行游游上上终终点点安安全全台台二二次次。然然后后分分别别从从中中部部和和起起点点让让其其自自行行游上终点安全台一次，进行预训练。游上终点安全台一次，进行预训练。6.预预训训练练后后选选取取体体重重和和灵灵活活性性等等较较一一致致者者，每每天天一一次次逐逐只只依依次次游游迷迷宫宫。以以大大鼠鼠自自迷迷宫宫起起点点游游至至终终点点安安全全台台所所需需要要的的时时间间和和途途中中进进入入盲盲端端的的错错误误次次数数，作作为为衡量大鼠学习获得能力的指标。衡量大鼠学习获得能力的指标。5.记忆巩固期：记忆巩固期：6.大鼠预训练后，选取体重和灵活性一致者，进行水大鼠预训练后，选取体重和灵活性一致者，进行水迷宫学习训练。迷宫学习训练。7.每天每只大鼠每天每只大鼠10次测试，连续训练次测试，连续训练5d，以连续，以连续4次在次在10s内，进入盲端次数不超过一次，到达终点作为学内，进入盲端次数不超过一次，到达终点作为学会游迷宫的标准。会游迷宫的标准。8.实验处理后，通过大鼠对已掌握的游迷宫正确途径实验处理后，通过大鼠对已掌握的游迷宫正确途径在在7d内巩固的程度，衡量其记忆巩固的能力。内巩固的程度，衡量其记忆巩固的能力。9.以大鼠自迷宫起点游至终点安全台所需要的时间和以大鼠自迷宫起点游至终点安全台所需要的时间和进入盲端的错误次数作为衡量记忆巩固的指标。进入盲端的错误次数作为衡量记忆巩固的指标。第七第七节节 骨骼系骨骼系统统疾病疾病动动物模型物模型脊髓损伤的动物模型脊髓损伤的动物模型坐骨神经长段缺损模型坐骨神经长段缺损模型脊髓损伤的动物模型脊髓损伤的动物模型 脊髓损伤分为四大类，即脊髓撞击伤、脊髓压迫脊髓损伤分为四大类，即脊髓撞击伤、脊髓压迫伤、脊髓缺血性损伤及脊髓横断损伤。脊髓血伤、脊髓缺血性损伤及脊髓横断损伤。脊髓血供丰富，但侧支循环供血较差，易发生缺血。供丰富，但侧支循环供血较差，易发生缺血。缺血可由脊髓外动脉闭塞引起，也可与脊髓损缺血可由脊髓外动脉闭塞引起，也可