临床病理基本知识及病理技术课件

诊断病理学基本知识诊断病理学基本知识 病理学的研究对象病理学的研究对象（一）人体病理学研究对象（一）人体病理学研究对象尸体解剖（尸体解剖（AutopsyAutopsy）活体组织检查（活体组织检查（BiopsyBiopsy）细胞学检查（细胞学检查（CytologyCytology）（二）实验病理学研究对象（二）实验病理学研究对象动物实验（动物实验（Animal ExperimentAnimal Experiment）组织和细胞培养（组织和细胞培养（Tissue and Cell Tissue and Cell CultureCulture）诊断病理学的概念诊断病理学的概念 临床实际工作中，许多病例的疾临床实际工作中，许多病例的疾病诊断有赖于对病变器官或组织的病病诊断有赖于对病变器官或组织的病理检查，这种检查称为活体组织检查理检查，这种检查称为活体组织检查(biopsy)(biopsy)。病理学关于这方面的实践。病理学关于这方面的实践和理论范畴称诊断病理学或外科病理和理论范畴称诊断病理学或外科病理学。学。一、病理诊断的重要性与局限性一、病理诊断的重要性与局限性（一）重要性（一）重要性1 1建建立立在在全全面面系系统统病病理理检检查查基基础础上上的的病理诊断是疾病诊断的病理诊断是疾病诊断的“金标准金标准”；2 2有有计计划划的的定定期期活活检检有有助助于于了了解解疾疾病病的动的动 态变化和疗效判断；态变化和疗效判断；3 3系系统统、完完整整的的病病理理资资料料有有助助于于认认识识新的新的 疾病或疾病类型。疾病或疾病类型。（二）局限性（二）局限性1 1形态学的局限性形态学的局限性 只只能能对对有有形形态态学学改改变变的的疾疾病病，尤尤其其是对是对 有有特特征征改改变变的的疾疾病病作作出出诊诊断断。对对无无明显明显 形形态态学学改改变变的的功功能能性性或或代代谢谢性性疾疾病病，病病 理学检查不能确诊；理学检查不能确诊；同病异形和同形异病：同病异形和同形异病：同一疾病在不同病例常呈不同形态。同一疾病在不同病例常呈不同形态。不同疾病常呈相同或极相似形态。不同疾病常呈相同或极相似形态。疾病形态的复杂多变导致病理诊断的复杂性。疾病形态的复杂多变导致病理诊断的复杂性。鉴别诊断有赖于临床资料和病理鉴别诊断技术。鉴别诊断有赖于临床资料和病理鉴别诊断技术。2 2小块活检组织的小块活检组织的“代表性代表性”有限。有限。3 3病理医生的主观性病理医生的主观性 病理诊断受病理医师的经验和思维方式影响，病理诊断受病理医师的经验和思维方式影响，带主观性和经验性。带主观性和经验性。二、病理标本的采集和送检二、病理标本的采集和送检（一）活检小标本（一）活检小标本1 1淋巴结活检淋巴结活检 当当一一组组淋淋巴巴结结肿肿大大时时，各各个个淋淋巴巴结结的的病病变变常常常是不同步的。常是不同步的。若多组淋巴结肿大，勿取腹股沟淋巴结；若多组淋巴结肿大，勿取腹股沟淋巴结；若一组多个淋巴结肿大，勿取最小淋巴结；若一组多个淋巴结肿大，勿取最小淋巴结；尽可能将淋巴结完整取出；尽可能将淋巴结完整取出；若疑为淋巴瘤，勿要求冰冻报告。若疑为淋巴瘤，勿要求冰冻报告。2 2勿用电灼作病理取材勿用电灼作病理取材3 3取材时注意：取材时注意：善于识别病灶；善于识别病灶；勿仅取坏死组织；勿仅取坏死组织；勿过度挤压组织，活检钳必须锐利；勿过度挤压组织，活检钳必须锐利；若剖腹作病理活检，待得到阳性病理若剖腹作病理活检，待得到阳性病理 报告后关腹；报告后关腹；刮宫标本必须全部送检。刮宫标本必须全部送检。（二）肿物或器官切除标本送检（二）肿物或器官切除标本送检 无无论论术术前前有有无无病病理理诊诊断断，手手术术标标本本都都应应送送检检。术术前前活活检检的的病病理理诊诊断断往往往往有有局局限限性性甚甚至至有有误误，最最后后诊诊断断应应根根据肿物或器官的全面检查作出。据肿物或器官的全面检查作出。肿物或器官切开的方法：肿物或器官切开的方法：肿块肿块 沿最长径线切第一刀，以后切面与第沿最长径线切第一刀，以后切面与第 一刀平行。一刀平行。乳腺乳腺 沿肿块中央与乳头连线切第一刀。沿肿块中央与乳头连线切第一刀。肺叶肺叶 沿肺门作冠状切开。沿肺门作冠状切开。食管食管 沿病灶对侧纵行切开。沿病灶对侧纵行切开。胃胃 沿胃大、小弯剪开沿胃大、小弯剪开 肠肠 沿病灶对侧纵行剪开沿病灶对侧纵行剪开 子宫子宫 沿宫颈向宫底作冠状切开沿宫颈向宫底作冠状切开 肾肾 沿肾门作冠状切开沿肾门作冠状切开 重点检查部位或细微病灶要作标记，并在重点检查部位或细微病灶要作标记，并在 送检单上说明。送检单上说明。(三）术中冰冻切片三）术中冰冻切片送标本作冰冻切片检查的原则：送标本作冰冻切片检查的原则：只只有有当当临临床床须须根根据据冰冰冻冻切切片片病病理理报报告告决决定定手手术术方方式式或或范范围围时时才才送送标标本本作作术术中中冰冰冻冻检检查；查；剖腹活检剖腹活检 免疫荧光检查等标本须作冰冻切片，但免疫荧光检查等标本须作冰冻切片，但 不必作术中冰冻检查；不必作术中冰冻检查；（四）体液（四）体液(胸腹水、尿、脑脊液、痰胸腹水、尿、脑脊液、痰)的送检：的送检：新鲜（新鲜（2 2小时内）送检或冰箱储存；小时内）送检或冰箱储存；勿加固定液；勿加固定液；沉淀物必须送检；沉淀物必须送检；指导病人取痰。指导病人取痰。(五五)送检单填写重点内容：送检单填写重点内容：术中所见或病灶描写；冰冻送检单须说术中所见或病灶描写；冰冻送检单须说 明送检物是何种组织；明送检物是何种组织；刮宫标本须说明末次月经日期；刮宫标本须说明末次月经日期；疑血液病标本须说明外周血像和骨髓涂片疑血液病标本须说明外周血像和骨髓涂片 结果结果临床诊断临床诊断 可能诊断可能诊断1 1，2 2，3 3；尽可能不；尽可能不要写要写“肿块性质待查肿块性质待查”，“发热原因待查发热原因待查”旧病理号，以前病理诊断；旧病理号，以前病理诊断；住院号；姓名；年龄；住院号；姓名；年龄；三、标本的固定三、标本的固定（一）固定的意义（一）固定的意义 使各种酶灭活，防止组织自溶。使各种酶灭活，防止组织自溶。保保 存细胞亚结构，促进各种化学成存细胞亚结构，促进各种化学成分在分在 原位凝固沉淀。原位凝固沉淀。（二）固定的时机（二）固定的时机 越快越好，最迟不超过离体后越快越好，最迟不超过离体后2 2小时小时（三）固定液种类和选择（三）固定液种类和选择1 110%10%福尔马林福尔马林 1 1份体积市售福尔马林加份体积市售福尔马林加9 9份体积缓冲液份体积缓冲液 （PH7.4PH7.4）一适用于手术及活检标本固定；）一适用于手术及活检标本固定；2 295%95%酒精酒精 适用于细胞涂片，刷片固定适用于细胞涂片，刷片固定3 34%4%戌二醛戌二醛 适用于电镜标本固定适用于电镜标本固定4 4特殊固定液，如糖原固定液，等特殊固定液，如糖原固定液，等 （四）固定液的量（四）固定液的量 大于标本的大于标本的4 4倍体积，或固定液水平面倍体积，或固定液水平面 高于标本高于标本（五）哪些标本不必固定？（五）哪些标本不必固定？术中冰冻检查标本；术中冰冻检查标本；肾穿刺标本；肾穿刺标本；免疫荧光、某些免疫组化检查标本；免疫荧光、某些免疫组化检查标本；肌病标本肌病标本 四、病理标本的长期保存四、病理标本的长期保存 根据不同目的用不同方根据不同目的用不同方法法 液体保存液体保存 石蜡包埋石蜡包埋 塑料包埋塑料包埋 液氮保存液氮保存 低温冰箱（低于低温冰箱（低于-20-20保保存）存）五、病理检查的基本过程五、病理检查的基本过程 第一天第一天 肉眼检查、取材，固定、肉眼检查、取材，固定、脱脱 水、浸蜡。水、浸蜡。第二天第二天 石蜡包埋，切片，染石蜡包埋，切片，染色，初验色，初验 第三天第三天 复验，发出病理报告复验，发出病理报告 第四、五天第四、五天 复杂疑难病例需复杂疑难病例需补取材，补取材，特殊特殊 检查、会诊检查、会诊 中华医学会：临床技术操作规范中华医学会：临床技术操作规范(2004年年)规定病理报告于规定病理报告于5个工作个工作日内发出日内发出六、病理报告的形式六、病理报告的形式（一）肯定诊断的报告（一）肯定诊断的报告（二二）未未完完全全肯肯定定诊诊断断的的报报告告，需需结结合临床其他资料综合判断合临床其他资料综合判断 1.1.倾向性诊断倾向性诊断 2.2.可能性诊断可能性诊断（三）描述性报告（三）描述性报告（四）否定性报告（四）否定性报告七、病理报告阴性或差错的原因七、病理报告阴性或差错的原因 1 1）取材失当）取材失当 2 2）制片质量差）制片质量差 3 3）病理医生经验不足或阅片匆忙）病理医生经验不足或阅片匆忙草率草率 4 4）疾病形态的复杂性和病理检查）疾病形态的复杂性和病理检查的局限性的局限性 若病理报告与临床不符，临床与若病理报告与临床不符，临床与病理医生必须沟通，讨论。病理医生必须沟通，讨论。正确评价病理科的功过。正确评价病理科的功过。病病 理理 学学 技技 术术1.组织化学组织化学2.免疫组织化学免疫组织化学3.电子显微镜电子显微镜4.基因芯片、组织芯片基因芯片、组织芯片5.激光显微切割激光显微切割6.原位分子杂交、原位荧光杂交原位分子杂交、原位荧光杂交7.比较基因组杂交比较基因组杂交一、免疫组织化学的概念一、免疫组织化学的概念免疫组织化学是在免疫学和组织化学的基础免疫组织化学是在免疫学和组织化学的基础上发展起来病理学技术。用特异性的单克上发展起来病理学技术。用特异性的单克隆或多克隆抗体检测组织切片中是否存在隆或多克隆抗体检测组织切片中是否存在相应抗原。相应抗原。特异性抗体在适当条件下与组织切片中特异性抗体在适当条件下与组织切片中的抗原结合后，通过标记在抗体分子上的的抗原结合后，通过标记在抗体分子上的酶将显色剂氧化，显色物质沉淀在抗原抗酶将显色剂氧化，显色物质沉淀在抗原抗体结合的部位从而显示抗原所在的位置体结合的部位从而显示抗原所在的位置（细胞膜、细胞核、胞浆）和抗原的多寡（细胞膜、细胞核、胞浆）和抗原的多寡或强弱。或强弱。二、免疫组化的基本原理二、免疫组化的基本原理组织抗原第一抗体（鼠抗人）第二抗体（羊抗鼠）过氧化物酶氧化底物生成棕色产物玻片卵白素生物素过氧化物酶法 可用免疫组织化学方法检测的抗原包括可用免疫组织化学方法检测的抗原包括人体和病原微生物的各种抗原成分。人体和病原微生物的各种抗原成分。免疫组织化学技术可作为核酸原位杂交免疫组织化学技术可作为核酸原位杂交的技术基础。的技术基础。三、免疫组化技术在诊断病理学中的应用三、免疫组化技术在诊断病理学中的应用1.1.肿瘤分类的鉴别诊断而不是肿瘤与非肿瘤肿瘤分类的鉴别诊断而不是肿瘤与非肿瘤或良恶性肿瘤的鉴别诊断或良恶性肿瘤的鉴别诊断2.2.肿瘤相关标志的检测肿瘤相关标志的检测3.3.某些病原微生物的检测，如某些病原微生物的检测，如HPVHPV、CMVCMV、EBVEBV、HBVHBV等等标记物类别标记物类别抗体名称抗体名称阳性标记的常见肿瘤阳性标记的常见肿瘤铬粒素铬粒素A(Cg.A)A(Cg.A)突触素突触素(Syn)s-100(Syn)s-100蛋白蛋白神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶 NSENSE胶质纤维酸性蛋白胶质纤维酸性蛋白 GFAP GFAP神经内分泌标记神经内分泌标记胶质瘤胶质瘤神经内分泌肿瘤神经内分泌肿瘤波形蛋白（波形蛋白（VimentinVimentin）间叶组织标记间叶组织标记肌动蛋白肌动蛋白(actin)(actin)HHF35HHF35结蛋白结蛋白(desmin)(desmin)肌源性肿瘤肌源性肿瘤间叶组织肿瘤间叶组织肿瘤间皮间皮间皮瘤间皮瘤CEACEA腺癌腺癌上皮性肿瘤上皮性肿瘤细胞角蛋白（细胞角蛋白（CKCK）上皮组织标记上皮组织标记常用免疫组化标志常用免疫组化标志HBVHBV感染感染HBsAg HBcAgHBsAg HBcAgCMVCMV感染感染CMVCMVHPVHPV感染感染HPV-AgHPV-Ag某些微生物标记某些微生物标记胃肠间质瘤胃肠间质瘤CD117CD117（C-kitC-kit）抑癌基因突变或过表达抑癌基因突变或过表达P53P53，P21P21肿瘤增殖活性肿瘤增殖活性Ki-67,PCNAKi-67,PCNA生殖细胞肿瘤生殖细胞肿瘤胎盘硷性磷酸酶胎盘硷性磷酸酶(PLAP)(PLAP)前列腺癌前列腺癌PSAPSA，P504SP504S肝癌，内胚窦瘤肝癌，内胚窦瘤AFPAFP乳腺癌，宫内膜病变乳腺癌，宫内膜病变PRPR，ERER，CerbB2CerbB2某些肿瘤相关标记某些肿瘤相关标记淋巴瘤淋巴瘤B B淋巴瘤淋巴瘤T T淋巴瘤淋巴瘤霍奇金淋巴瘤霍奇金淋巴瘤NK/TNK/T淋巴瘤淋巴瘤白细胞共同抗原（白细胞共同抗原（LCALCA）CD20 CD79CD20 CD79CD3 CD45ROCD3 CD45RO（UCHL1UCHL1）CD30 CD15CD30 CD15CD56CD56淋巴造血组织标记淋巴造血组织标记四、免疫组化检测成功的关键因素四、免疫组化检测成功的关键因素1 1、标本固定、标本固定标本的及时、充分固定是免疫组化检测成标本的及时、充分固定是免疫组化检测成功的前提功的前提固定液：固定液：10%10%福尔马林福尔马林固定时间：固定时间：24-4824-48小时为佳小时为佳2 2、抗体效价、抗体效价3 3、实验操作技术、实验操作技术临床医生要了解、关心、支持病理科工作，临床医生要了解、关心、支持病理科工作，使病理科更好为临床服务。使病理科更好为临床服务。