Chapter7定量及系统适应性1课件

Chapter7定量及系统适应性12009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 2目目录准度与精度外标法定量内标法定量标准加入法定量括号式程序系统适应性2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 3用用HPLC定量定量重现性好的定量重现性好的色谱方法重现性好的样品制备2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 4误差E=O-TO观测到的值T真值液相色液相色谱定量的准确度定量的准确度2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 5色谱方法是相对定量方法,如不考虑损失及杂质干扰等因素,其结果同“标样”的准确程度密切相关相关系数 其中X及Y分别代表不同方法的实验值及平均值测定定结果的准度果的准度2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 6液相色液相色谱定量的精密度定量的精密度测量的精密度2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 7精密度的衡量精密度的衡量测量精密度的计算2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 8分析分析测试结果果2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 9基基线修正修正2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 10线性性检测器响器响应2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 11配置一系列已知浓度的标准样储备标样外外标法校正曲法校正曲线标样的配制的配制2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 12标准曲准曲线外外标法校正曲法校正曲线外外标法校正曲法校正曲线2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 13计算公式特点无需各组份都被检出、洗脱需要标样标样及样品测定的条件要一致进样体积要准确结果的果的计算算2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 14配制一系列浓度的标样，其中加有内标样储备标样储备内标样工作溶液内内标法校正曲法校正曲线溶液的配制溶液的配制2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 1505010015020025001020304050样品品浓度度标样峰面峰面积内内标样峰面峰面积标准曲准曲线内内标法校正曲法校正曲线2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 16结果果计算算计算公式特点无需各组份都被检出、洗脱需要标样，需要内标物结果与进样体积无关2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 17对内标物的要求化学结构与待测组分相似(同系物、异构体)在样品中不存在不与样品中组份发生任何化学反应保留值与待测组分接近浓度（响应值）与待测组分相当其色谱峰与其它色谱峰分离好内内标物的物的选择2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 18标准加入法准加入法+内内标法定量法定量2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 19括号式程序括号式程序全部平均全部平均平均平均2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 20更多的括号式程序更多的括号式程序不平均不平均不平均不平均不平均不平均平均平均2平均平均1平均平均1平均平均22009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 21校正曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有效，高或低于这些点都可能引起计算错误定定义可接受的范可接受的范围限度限度2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 22吸收吸收值与与浓度度浓度理想的实际的背景吸收吸收值210102009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 23系系统适适应性性测试2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 24什么是系什么是系统适适应性性测试HPLC 数据的精度与准度来自于一个性能良好的色谱系统。系统适应性试验意味着检查整个系统是在可接受的限度内工作的。2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 25系系统适适应性性试验的基的基础仪器、电子的、分析上的操作，以及样品组成了一个完整的系统，可以作为一个整体进行评估。系统适应性试验即是建立在这一概念上的。2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 26系系统适适应性指南（性指南（USP，EP以及以及JP）United States Pharmacopeia/National Formulary美国美国药典典/国家处方集（简称USP/NF）。最新版为USP31-NF26。European Pharmacopoeia(Ph.Eur.)，现已经出版到EP6.5。日本日本药局方局方（The Japanese Pharmacopoeia）由日本日本药局方局方编集委员会编篡，由厚生省颁布执行。日本日本药典典最新版是2001年出版的第十四改正版。2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 27系系统适适应性参数性参数容量因子，k=（tr-t0）/t0重现性相对保留，=k2/k1分离度，Rs=(tr2-tr1)/(1/2)(w2+W1)拖尾因子，T=Wx/2f理论塔板数，N=16(tr/w)22009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 28系系统适适应性参数与建性参数与建议值参数参数推荐推荐值容量因子（k）目标峰应当与其他峰以及死体积很好地分开。通常k2.0重复性理想的RSD1.0（n5）相对保留如果保留时间是稳定的则不是必须的分离度（Rs）目标峰与相邻的干扰物质洗脱峰（杂质、辅料、降解产物或内标物）之间的Rs应该2或者=2.拖尾因子（T）T2理论塔板数（N）通常理论塔板数应当20002009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 29何何时进行系行系统适适应性性试验当需要确保结果的重现性以及色谱系统的性能指标时，进行系统适应性试验在分析未知物之前或之后在色谱条件改变之后协助验证系统（整体验证）系统的故障排除2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 30系系统适适应性性分离为了确保系统在指标内，记录分离标准的趋势，例如分离度，拖尾因子，理论塔板数重现性标样分析的总结，确保系统在特定的重现性指标内工作2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 31系系统适适应性性系统适应性样品主要物质以及副产物的混合物，用于测定系统适应性。标准物质已知浓度的样品控制样已知浓度的样品，被当做未知物进行测定，用于计算测定结果与实际值之间的偏差2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 32系系统适适应性性系统适应性样品应该至少在一系列的样品测定前后运行控制样应该贯穿整个样品序列，按照一定的间隔运行2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 33自自动系系统适适应性性如果使用一个含有以下内容的报告方法报告结果：RSD 棒图需要监测的参数的综合统计表使用RSD棒状图和综合统计表监测系统性能后，可以使您对系统精度和准度的可接受程度，以及系统是适用于运行未知样的这些内容非常有信心2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 34限制限制设置时需小心不要比仪器的指标设置得更窄误差下限（Lower error limit,LCL）误差上限（Upper error limit,UCL）目标值警告下限（Lower warning limit）警告上限（Upper warning limit）综合图中的限制可以标记出不能接受的值2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 35系系统适适应性性报告告12009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 36系系统适适应性性报告告22009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 37利用系利用系统适用性适用性检查系系统重复性重复性2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 38重重现性性全局RSD棒状图2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 39使用系使用系统适适应性性对色色谱系系统进行故障排除行故障排除系统适应性软件允许通过查看峰的信息对系统进行故障排除：保留时间分离度（Rs），美国药典分离度容量因子（k）分离因子（选择性，）柱效（理论塔板数，N）拖尾或对称因子基线噪音与漂移2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 40使用系使用系统适适应性性对色色谱系系统进行故障排除行故障排除溶剂瓶泵进样器检测器保留时间拖尾RSD%面积理论塔板数噪音与漂移线性分离度2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 41系系统故障排除故障排除质量控制图2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 42总结定量是基于色谱峰响应与待测物浓度存在一定关系的基础上的不同的定量方式包括外标法内标法标准加入法括号式程序系统适应性是为了确保色谱系统适用于分析。2009 Waters Corporation|COMPANY CONFIDENTIAL 43练习使用内标的目的是什么？内标物是加到：所有标准溶液中的所有样品溶液（未知物）中的所有的标准与样品溶液中谢谢