食用菌菌种生产技术

食 用 菌 菌 种 制 作 技 术 食 用 菌 生 产 技 术 课 程 组 第 一 节 菌 种 生 产 类 型 及 生 产 流 程第 二 节 一 级 菌 种 制 作 技 术 第 三 节 二 、 三 级 菌 种 制 作 技 术食 用 菌 菌 种 制 作 技 术 第 一 节 菌 种 生 产 类 型 及 生 产 流 程一 、 菌 种 概 念二 、 菌 种 生 产 类 型三 、 菌 种 生 产 流 程四 、 菌 种 生 产 场 所 及 设 备 一 、 菌 种 概 念 广 义 ： 是 指 以 保 藏 、 试 验 、 栽 培和 其 它 用 途 为 目 的 ， 具 有 繁 衍 能 力 ，遗 传 特 性 相 对 稳 定 的 孢 子 、 组 织 或 菌丝 体 及 其 营 养 性 或 非 营 养 性 的 载 体 。 菌 种 是 一 种 重 要 的 生 物 资 源 ， 椐 其 使用 的 目 的 不 同 ， 可 以 分 为 保 藏 用 菌 种 、 试 验用 菌 种 和 生 产 用 菌 种 。 从 食 用 菌 栽 培 的 角 度 而 言 ， 所 谓 的 菌 种就 是 指 生 产 用 菌 种 。 菌种 一 级 菌 种二 级 菌 种三 级 菌 种 从 孢 子 分 离 培 养 或 组 织 分 离培 养 获 得 的 纯 菌 丝 体 。由 一 级 菌 种 扩 大 繁 殖 成 的菌 丝 体 。由 二 级 菌 种 扩 大 繁 殖 成 的 菌 丝体 ， 是 直 接 用 于 栽 培 的 菌 种 。 种 菇一 级 菌 种二 级 菌 种三 级 菌 种栽 培 菌 种 为 何 要经 过 三 级 逐步 扩 大 培 养？ 三 、 菌 种 生 产 工 艺 流 程斜 面一 级 种 培养 基 制 备 高 压 灭 菌 接 种 培 养 筛 选提 纯 原 始 种 中 试 后 确定 一 级 种 保 存孢 子 或 组 织 分 离 一 级 种 转 管 、 扩 大 菌 种 瓶二 级 种 培养 基 制 备 高 压 灭 菌 接 种 培 养 二 级 菌 种罐 头 瓶菌 种 袋三 级 种 培养 基 制 备 高 压 或常 压 灭 菌 接 种 三 级 菌 种 栽 培培 养 菌 种 制 作 流 程一 级 菌 种 （ 配 制 培 养 基 灭 菌 接 种 培 养 ） 二 级 菌 种 （ 配 制 培 养 基 灭 菌 接 种 培 养 ） 三 级 菌 种 （ 配 制 培 养 基 灭 菌 接 种 培 养 ） 栽 培 配 制 培 养 基灭 菌接 种培 养 （ 一 ） 菌 种 场 设 计 基 本 要 求 1、 确 定 制 种 级 别 及 规 模 良 种 选 育 对 人 员 素 质 、 设 备 条 件 、 种 质 资 源 的 积 累 、 工作 的 连 续 性 等 都 有 很 高 的 要 求 。 在 菌 种 生 产 中 ， 由 于 前 一 级菌 种 是 后 一 级 菌 种 的 种 源 ， 前 一 级 菌 种 出 现 质 量 问 题 比 后 一级 菌 种 出 现 质 量 问 题 危 害 更 大 。 因 此 对 生 产 和 供 应 较 前 级 菌种 厂 家 的 条 件 和 责 任 的 要 求 更 高 。 目 前 ， 我 国 农 业 部 已 经 颁 布 包 含 这 方 面 内 容 的 菌 种 管 理行 政 法 规 。 今 后 ， 各 菌 种 厂 在 制 定 规 划 时 ， 应 根 据 本 身 的 技术 力 量 及 设 备 条 件 ， 确 定 适 宜 的 菌 种 生 产 级 别 和 规 模 。 2、 制 种 场 地 的 选 择 水 、 电 、 路 三 通 ， 远 离 禽 舍 、 畜 栏 、 厕 所 等 污染 源 。3、 菌 种 场 设 置 要 求 菌 种 场 应 设 原 辅 料 仓 库 ， 原 料 处 理 场 地 ， 洗 涤室 ， 配 料 室 ， 灭 菌 室 ， 冷 却 室 ， 接 种 室 ， 培 养 室 ,质 检 室 和 菌 种 储 藏 室 。 应 根 据 微 生 物 易 于 在 空 气 中 传 播 及 其传 播 的 特 点 规 划 厂 房 ， 布 设 流 水 线 ， 以 使制 种 的 工 艺 流 程 既 便 于 流 水 作 业 ， 节 约 劳力 和 投 资 ， 又 有 利 于 对 微 生 物 传 播 的 控 制 ，提 高 菌 种 生 产 的 成 品 率 。 下 面 分 别 介 绍 简易 菌 种 厂 和 规 范 化 菌 种 厂 的 平 面 布 局 。 配 制 培 养 基 设 备 ： 切 片 机 、 粉 碎 机 、 过 筛 机 、 拌 料 机 、 装 瓶 或 装 袋 机 灭 菌 设 备 ： 高 压 灭 菌 锅 （ 手 提 式 、 立 式 、 卧 式 ） 、 常 压 灭 菌 灶接 种 设 备 ： 净 化 工 作 台 、 接 种 箱 、 接 种 室培 养 设 备 ： 培 养 箱 （ 电 热 恒 温 、 恒 温 恒 湿 ） 、 培 养 室 、 培 养 架 、 空 调菌 种 保 藏 设 备 ： 电 冰 箱 、 贮 藏 室 （ 二 、 三 级 菌 种 ）1、 制 种 设 备 2、 基 本 器 具 玻 璃 器 皿 衡 量 器 具 基 础 设 备3、 基 本 药 品 配 置 必 要 的 生 产 设 备 。 生 产 能 力 与 生 产 设 备 配 套 选 用 质 量 合 格 、 价 格 适 宜 的 玻 璃 器 皿 、 塑料 袋 、 消 毒 药 品 等 低 值 易 耗 品 。 二 、 一 级 菌 种 培 养 基 的 配 制1、 培 养 基 的 概 念 及 分 类 根 据 食 用 菌 对 营 养 、 水 分 、 酸 碱 度 的 要 求 ， 人 为 配 制 成 的 供 食 用 菌 生 长 发 育 的 基 质 。类型 天 然 ： 天 然 有 机 物合 成 ： 已 知 成 分 的 化 学 药 品半 合 成 ： ？原 料来 源状 态 液 体 ： 营 养 液固 体 固 体 ： 天 然 固 体 原 料固 化 ： 加 1.5%2%琼 脂表 面形 状 斜 面 培 养 基平 板 培 养 基概念 2、 一 级 菌 种 培 养 基 常 用 配 方 PDA培 养 基 PSA培 养 基马 铃 薯 （ 去 皮 ） 200g 马 铃 薯 （ 去 皮 ） 200g葡 萄 糖 20g 蔗 糖 20g琼 脂 18 23g 琼 脂 18 23g水 1000ml 水 1000ml PDA培 养 基 和 PSA培 养 基 是 一 级 菌 种 最 常 用 的 培 养 基 ，适 用 于 大 部 分 食 用 菌 菌 种 的 分 离 、 培 养 和 保 藏 ， 既 是 一 种广 泛 培 养 基 ， 也 是 一 种 基 础 培 养 基 。 注 ： 一 级 菌 种 培 养 基 配 方 众 多 ， 可 参 考 课 本 或 其 他 书 籍 。 粉 状条 状 属 天 然 植 物 多 糖 融 点 96 以 上凝 点 40 以 下冷 水 中 不 溶透 明 度 好 、 粘 着 力 强不 被 微 生 物 分 解 利 用特 性 煮 沸 20min， 取 定 量 滤 液制 马 铃薯 滤 液 滤 液 沸 时 加 入 ， 融 后 加 余 料融 化 琼 脂调 节 pH值 勿 污 管 口 ， 控 制 装 量分 装 试 管 准 备 灭 菌包 扎 成 捆 1%NaOH或 HCl 3.一 级 菌 种 培 养 基 的 配 制 过 程 （ 二 ） 灭 菌 与 消 毒 的 方 法1、 常 用 的 灭 菌 方 法火 焰 灭 菌 用 于 金 属 器 具 ， 火 焰 灼 烧 至 红 （ 在 火 焰 2/3处 烧 ）干 燥 箱 灭 菌 用 于 玻 璃 器 皿 （ 培 养 皿 、 试 管 、 三 角 瓶 、 吸 管 ） 等 。 洗 净 晾 干 包 装 放 入 干 燥 箱 升 温 160170 ， 保 持 1 2h 关 闭 电 源 ， 自 然 降 温 60 以 下 打 开 干 燥 箱 取 出 灭 菌 物 品 ， 尽 快 使 用 。干 热 灭 菌 湿 热 灭 菌 常 压 灭 菌 间 歇 灭 菌 第 一 次 蒸 ， 100 保 持 1 h 28-37 下 培 养 24 h 第 二 次 蒸 ， 100 ， 保 持 1 h 培 养 24 h 第 三 次 蒸 ， 100 ， 保 持 1 h。 不 常 用 的 原 因 ： 灭 菌 一 锅 需 要 3 4天 时 间 ， 且 冬 天 需 要保 温 。持 续 灭 菌 蒸 ， 100 保 持 12 14 h（ 方 法 ： 攻 头 ， 控 中 间 ， 保 尾 ） 。普 遍 采 用 ， 特 别 用 于 大 规 模 塑 料 袋 制 种 和 塑 料 栽 培 筒 的 灭 菌 。注 意 ： 常 压 灭 菌 锅 要 设 计 合 理 ， 主 要 是 灭 菌 彻 底 与 否 、 燃 料 费 用 、 周 转 速 度 、 劳 动 强 度、 污 染 率 的 高 低 ， 直 接 影 响 经 济 效 益 。高 压 灭 菌 手 提 式 高 压 灭 菌 锅 ： 用 于 一 级 菌 种 培 养 基 灭 菌 。卧 式 或 立 式 高 压 灭 菌 锅 ： 用 于 二 、 三 级 菌 种 培 养 基 灭 菌 。 2、 常 用 的 消 毒 方 法空 间 消 毒 药 液 喷 雾药 剂 薰 蒸紫 外 线 照 射 0.25%的 新 洁 尔 灭 ， 5%的 石 碳 酸 ， 0.25%的 多 菌 灵 等 。用 量 不 小 于 30ml/m3； 雾 粒 越 细 越 好 ； 适 时 更 换 药 液 （ 防 止 抗 药 性 ） 。10 20ml的 甲 醛 +5 8g的 高 锰 酸 钾 / m 3； 气 雾 消 毒 盒 ， 2 6g/ m3；照 30min后 ， 再 过 30min开 照 明 灯器 具 消 毒 药 液 浸 泡煮 沸 消 毒 75%的 酒 精 ； 药 物 揩 擦煮 沸 20min以 上 培 养 料 消 毒 熟 石 灰 拌 料 ； 杀 菌 剂 拌 料 （ 0.1%0.2%的 多 菌 灵 ） ； 巴 氏 消 毒 （ 发 酵 ）分 离 材 料 消 毒 75%的 酒 精 棉 球 擦 拭 ； 0.1%升 汞 浸 泡 0.51min无 菌 水 冲 洗 3次 无 菌 纸 吸 干 （三）一级菌种培养基的灭菌 1 灭 菌 设 备 手 提 式 高 压 灭 菌 锅 2 灭 菌 要 求 1.1kg/cm2， 121 保 持 2030min 手 提 式 高 压 灭 菌 锅 3 操 作 过 程 加 水 装 锅 盖 盖 加 热 当 压 力 升 为0.5kg/cm2时 排 放 冷 空 气 正 式 升 压 保 压（ 1.1kg/cm2， 121 ， 保 持 20-30min） 停止 加 热 自 然 降 压 至 零 排 放 余 汽 开 盖 取 出 灭 菌 物 品 趁 热 摆 斜 面 检 验 灭 菌 效 果（ 32 空 白 培 养 48h） 。 无 菌 操 作 要 点接 种 环 境 消 毒 灭 菌酒 精 棉 球 消 毒 双 手操 作 器 具 消 毒 灭 菌开 启 的 管 口 、 瓶 口 靠 近 灯 焰拔 出 的 棉 塞 勿 触 及 任 何 地 方动 作 快 、 准 、 稳要 点 必备 （ 三 ） 菌 种 分 离 的 设 备 1 接 种 箱 ： 操 作 规 程 2 净 化 工 作 台 ： 操 作 规 程 3 接 种 室 ： 操 作 规 程 接 种 工 具净 化 工 作 台 （ 四 ） 菌 种 分 离 的 方 法 （ 常 用 三 种 ）组织分离法 将 食 用 菌 的 部 分 组 织 移 接到 斜 面 培 养 基 上 获 得 纯 培养 的 方 法简 单 易 行保 持 原 菌 种 性 状适 用 于 大 型 肉 质 子 实 体重 复 多 易 退 化种 菇 选 择 种 菇 消 毒 切 取 组 织 块 移 接 组 织块 至 斜 面 中 央 培 养特 点概 念操 作 过 程（ 以 伞 菌 为 例 ） 孢子分离法 概 念特 点操 作过 程 利 用 子 实 体 产 生 的 成 熟有 性 孢 子 分 离 培 养 获 得纯 菌 种 的 方 法属 于 有 性 繁 殖 ， 后 代 易 发 生 变异 ， 可 用 此 法 培 育 新 品 种分 离 过 程 较 复 杂 ， 适 用 于 胶 质菌 类 和 小 型 伞 菌孢 子 的 采 集 孢 子 的 分 离孢 子 的 萌 发 孢子分离法 多 个 孢 子 萌 发 后 自 由 交配 获 得 纯 菌 种 的 方 法多 孢 分 离单 孢 分 离单 个 孢 子 萌 发 获 得 纯菌 种 的 方 法 整 菇 插 种 法钩 悬 法孢 子 印 法平 板 稀 释 法连 续 稀 释 法毛 细 血 管 法 基内菌丝分离法 概 念特 点适 用范 围 从 生 长 子 实 体 的 培 养 基 中 分 离菌 丝 获 得 纯 培 养 的 方 法易 感 染 杂 菌子 实 体 已 腐 烂 ， 但 又 必 须 保 留该 种 菌 种子 实 体 小 而 薄 ， 用 组 织 分 离 法和 孢 子 分 离 法 较 困 难混 合 菌 丝 培 养 类 型 ， 如 银 耳 ，多 采 用 此 法 操 作 示 范选 种 菇 外 观 典 型 、 大 小 适 中 、 无 病 虫 害 、八 成 熟 、 第 12茬 的 子 实 体取 组织 块 取 组 织 块 ： 纵 剖 （ 撕 ） 菇 体 ， 在 柄盖 交 界 处 取 绿 豆 粒 大 的 组 织种 菇消 毒 用 75%的 酒 精 棉 球 擦 拭 子 实 体接 组织 块培 养 移 接 至 斜 面 中 部25 培 养 箱 纯化 概念措施 是 指 对 分 离 获 得 的 菌 种 进行 再 提 纯 ， 成 为 生 产 所 需要 的 菌 种 的 方 法菌 丝 的 再 提 纯污 染 物 的 排 除 正 常 的 菌 种 在 固 体 培 养 基 上 ， 菌 丝逐 渐 向 四 周 呈 辐 射 状 生 长 ， 边 缘 整 齐 一致 ， 菌 丝 浓 密 健 壮 ！ 是 菌 种 投 入 生 产 前 必 须 做 的 结 实性 鉴 定 试 验概 念 进 一 步 确 定 菌 种 ， 以 避 免 菌 种 选育 不 当 而 造 成 不 可 估 量 的 损 失目 的 形 态 特 征 、 生 理 特 性 、 栽 培 性状 、 经 济 效 益 等内 容 转 管过 程 取 直 径 3-5mm的 母 种 块移 入 新 斜 面 中 部转 管目 的 扩 大 繁 殖 ， 增 加 母 种 数量 ， 以 满 足 生 产 需 要注 意 种 块 勿 太 大原 老 种 块 勿 再 接 入传 代 次 数 勿 太 多 母 种培 养 设 备注 意条 件 经 常 检 查 ， 及 时 剔 除 污 染 管控 制 菌 龄 （ 即 将 长 满 斜 面 ）外 观 检 查 ： 菌 丝 白 、 整 齐 、粗 壮 、 有 弹 性 、 萌 发 快 则 质 量好 ， 否 则 质 量 差电 热 恒 温 培 养 箱25 左 右 、 干 净 、 干 燥 、黑 暗 、 通 风 （ 一 ） 保 藏 目 的 及 原 理使 菌 种 不 死 亡 不 生 长 不 污 染 ，不 降 低 或 不 丧 失 其 优 良 性 ，以 尽 量 延 长 使 用 时 间 。保 藏 目 的保 藏 原 理 创 造 不 利 于 菌 种 生 长 的 一 切条 件 ， 使 其 代 谢 处 于 休 眠 状态 。 （ 二 ） 菌 种 保 藏 方 法 （ 常 用 ）特 点 简 便保 藏 时 间 短易 污 染 及 退 化不 适 于 草 菇 等 菌 类 1.斜 面 低 温 法斜 面 菌 种 置 46 冰 箱 中 （ 36个 月 ）2.矿 油 保 藏 法3.自 然 基 质 保 藏 法 自 学 ！ （ 三 ） 菌 种 保 藏 注 意 事 项u用 保 种 培 养 基u及 时 保 藏 （ 菌 丝 占 斜 面 2/3）u最 好 换 胶 塞u用 时 活 化u严 防 棉 塞 受 潮 复 习 思 考 题 1 什 么 是 一 级 菌 种 ？ 简 述 一 级 菌 种 制 作 的 工 艺 流 程 。 2 一 级 菌 种 培 养 基 常 用 的 配 方 是 什 么 ？ 简 述 其 制 作 过 程 3 名 词 解 释 ： 消 毒 、 灭 菌 、 提 纯 。 4 如 何 对 一 级 菌 种 培 养 基 进 行 灭 菌 ？ 如 何 检 验 其 灭 菌 效 果 ？ 5 什 么 是 菌 种 分 离 ？ 菌 种 分 离 有 哪 几 种 方 法 ？ 6 简 述 组 织 分 离 法 的 操 作 过 程 。 7 为 什 么 要 进 行 出 菇 试 验 ？ 8 什 么 叫 转 管 ？ 为 什 么 要 转 管 ？ 9 什 么 是 无 菌 操 作 ？ 怎 样 才 能 做 到 无 菌 操 作 ？ 配 制 培 养 基灭 菌二 级 菌 种培 养接 种 培 养接 种灭 菌配 制 培 养 基三 级 菌 种一 级 菌 种二 级 菌 种 （ 一 ） 配 制 原 则 1 选 择 适 宜 的 营 养 物 质 。 2 营 养 物 质 间 配 制 的 比 例 要 恰 当 。 3 选 择 经 济 实 用 、 来 源 广 泛 的 原 料 。 4 适 宜 的 pH值 和 含 水 量 。 木 屑 培 养 基阔 叶 树 木 屑 78%麸 皮 (或 米 糠 ) 20%蔗 糖 1%石 膏 粉 1%料 水 比 1:1.11.3 棉 籽 壳 培 养 基棉 籽 壳 78%麸 皮 (或 米 糠 ) 20%蔗 糖 1%石 膏 粉 1%料 水 比 1:1.11.3 称 料拌 料调 节 pH值分 装 培 养 料清 洁 （ 洗 或 擦 ） 瓶 、 袋 外 壁封 口 1.不 溶 性 主 、 辅 料 混 拌 均 匀2.可 溶 性 辅 料 溶 于 水 后 拌 入 主 辅 料3.注 意 检 查 含 水 量 （ 手 测 法 等 ）比 实 际 要 求 的 pH值 调 高 1左 右容 器 ： 菌 种 瓶 、 菌 种 袋要 求 ： 上 紧 下 松 ， 外 紧 内 松 ， 中 间 一 个 洞 卧 式 高 压 蒸 汽 灭 菌 锅 分 析 原 因？ 三 .二 、 三 级 菌 种 的 接 种概 念 ： 菌 种 移 至 新 培 养 基 上 的 过 程关 键 ： 无 菌 操 作接 种 接 种 环 境 消 毒 灭 菌酒 精 棉 球 消 毒 双 手操 作 器 具 消 毒 灭 菌开 启 的 管 口 、 瓶 口 靠 近 灯 焰拔 出 的 棉 塞 勿 触 及 任 何 地 方动 作 快 、 准 、 稳无 菌操 作要 点 接种方法 二 级 种三 级 种 用 接 种 耙 取 蚕 豆 大 母种 放 于 瓶 中 料 面 上用 接 种 匙 （ 镊 、 铲 ）取 枣 大 原 种 放 于 袋 中或 瓶 中 料 面 上注 意 ： 1、 严 格 挑 选 待 接 的 菌 种 质 量 ； 2、 勿 接 入 表 面 老 菌 丝 及 老 种 块 。 菌 种 的 培 养 实 际 就 是 对 菌 丝 体 的 培 养培养条件 场 所 清 洁空 气 清 新光 线 暗温 度 约 25空 气 湿 度 60%70% 培养条件 勿 堆 放 过 挤及 时 剔 除 污 染 瓶 （ 袋 ）栽 培 种 的 菌 袋 缺 氧 时 可刺 孔 增 氧控 制 菌 龄 （ 菌 丝 长 满 7-01天 后 使 用 ） 五 .二 、 三 级 菌 种 的 质 量 鉴 定菌 丝 白 （ 或 呈 该 菌 种 应 有 的 颜 色 ）均 匀 、 粗 壮 、 有 菇 香 味接 种 后 萌 发 快无 杂 色 、 无 黄 水 、 无 结 皮 、 无 原 基 、无 干 缩 脱 壁 等 现 象菌 种 出 售 必 须 贴 有 菌 种 质 量 合 格 标 签 ，标 明 菌 种 种 类 、 级 别 、 品 种 、 生 产 单 位 和接 种 日 期 。合格菌种 菌 种 制 作 过 程 中 ， 只 要 做 到选 择 正 确 的 配 方 和 优 质 原 料严 格 灭 菌优 良 的 二 、 三 级 菌 种严 格 无 菌 操 作科 学 培 育选 择 优 良 菌 种 复 习 思 考 题 1 简 述 二 、 三 级 菌 种 的 制 作 流 程 。 2 根 据 实 际 操 作 说 明 如 何 测 定 培 养 基 的 含 水 量 和 pH值 。 3. 分 装 培 养 料 时 ， 为 何 要 在 料 中 打 一 个 孔 ？ 4. 简 述 二 、 三 级 培 养 基 的 灭 菌 方 法 及 要 求 。 5. 如 何 检 验 二 、 三 级 菌 种 培 养 基 的 灭 菌 效 果 ？ 6. 简 述 一 级 菌 种 转 接 二 级 菌 种 ， 二 级 菌 种 转 接 三 级 菌 种的 过 程 。 7. 合 格 的 培 养 室 有 什 么 要 求 ？ 8 试 述 二 、 三 级 菌 种 的 培 养 方 法 ？ 9 如 何 检 查 二 、 三 级 菌 种 质 量 ？ 10 请 你 以 一 个 菌 种 厂 厂 长 或 技 术 员 的 身 份 ， 谈 谈 如 何 搞好 菌 种 生 产 。