霉菌和酵母计数

霉菌和酵母计数1、原理、定义、目的：霉菌和酵母数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后， 所得1g或1ml检样中所的霉菌和酵母菌落数（粮食样品是指1g粮 食表面的霉菌总数）。霉菌和酵母数主要作为判定食品被污染程度的 标志，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。本方法适用于 所有食品。2. 仪器设备与器具：参照大肠杆菌群的检测标准。3. 试剂：3.1霉菌和酵母菌培养基的配置：3.1.1称取30g虎虹琼脂培养基加入蒸馏水1000ml，摇动灭菌。3.1.2以棉塞或硅胶塞，牛皮纸包封好瓶口，3.1.3置于高压杀菌釜内，以116C30分钟灭菌。3.1.4取出培养基自然冷却至不烫手后（约45C ）备用。3.2稀释液：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，高压灭菌121C、15分钟。4. 测定方法：4.1.检样稀释及培养：4.1.1以无菌操作将检样25g （ml）放于含有225 ml灭菌生理盐 水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预放置适当数量的玻璃珠）或灭菌 乳体内，经充分震摇或研磨成1： 10的均匀稀释液。4.1.2用1 ml灭菌吸管吸取1： 10稀释液1 ml,注入含有9ml 灭菌生理盐水的试管内，用定量加液器在试管内鼓气三至四 次使其混合均匀，作成1： 100的稀释液。4.1.3另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液， 每递增一次，换用一支1 ml灭菌吸管。4.1.4根据食品卫生标准要求或对污染情况的估计，选取三个适 宜稀释度，分别在10倍递增的同时，即以吸取该稀释度的 吸管移1 ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做二个平皿。4.1.5培养皿上分别注明样品编号，稀释度等。4.1.6稀释液移入平皿后，注入冷却到45C虎红琼脂约15 ml， 水平徐徐震摇，使培养基检液混合均匀后，同时将虎红琼脂 培养基倾入加有1 ml稀释液的灭菌平皿内做空白对照。4.1.7待虎红琼脂凝固后，翻转平板，置25至28C培养箱中培 养3天后观察，共培养观察五天。4.2计算方法：通常选择菌落数在10至150之间的平皿进行计数，同稀释 度的2个平皿的菌落硕乘以稀释倍数，即为每克（或每毫升） 检样中所含酵母霉菌数。4.3报告：每克（或每毫升）食品中所含酵母霉菌数以个g（个/ml）表示。5.备注：5.1针对已发霉变质或特殊要求的样品其稀释液的制备方法如下：用灭菌吸管吸取1： 10稀释液10 ml，注入试管中，用加液 枪反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。再取1 mil： 10稀 释液注入含有9 ml灭菌水的试管中，另换一支1 ml灭菌吸 管吸5次，此液为1： 100稀释液。5.2培养基应选择适合酵母霉菌生长的培养基。5.3检测成品饮料则只做一个梯度。6.参考资料：GB-1994食品卫生检验方法中霉菌和酵母计数