蛋白质透析[复习知识]

蛋白质透析在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条件和要求选用。（一）蛋白质透析一. 目的学习透析的基本原理和操作。二. 原理蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。三. 仪器、试剂、材料1. 仪器烧杯；玻棒；离心机；离心管；冰箱；电炉。2. 试剂1氯化钡溶液；硫酸铵粉末；1mol/L EDTA；2%NaHCO3。3. 材料透析管（宽约2.5cm，长1215cm）或玻璃纸;皮筋；鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤。四. 操作方法1. 透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中，煮沸10分钟，再在2 NaHCO3溶液中煮沸10分钟，然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可。2. 取5ml蛋白质溶液于离心管中，加4g硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。然后在4下静置20分钟，出现絮状沉淀。3. 离心：将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。4. 装透析管：离心后倒掉上清夜，加5ml蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中，扎紧上口。5. 将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。6. 每隔适当时间（510分钟），用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。五. 结果处理记录并解释实验现象。六. 注意事项1. 硫酸铵盐一定要充分溶解，才能使蛋白质沉淀下来。七. 思考题在透析袋处理过程中， EDTA和NaHCO3起何作用？EDTA，二价金属离子螯合剂，除去钙镁等二价离子，防止他们跟目的样品螯合，影响活性NaHCO3，中和乙酸，延长透析袋寿命。2练题