激活剂和抑制剂对1398蛋白酶活力的影响报告

不同激活剂和抑制剂对 1398蛋白酶活力的影响摘要：【目的】探究不同激活剂、抑制剂对1398 蛋白酶活力的影响。【方法】通 过分别将不同的试剂加入到各个含有 1398 蛋白酶液的试管中，然后在进行催化 效应。实验结果用与调零组进行对照，以O.D值表示。通过分析不同的0.D值来总结这些试剂对 1398蛋白酶活力的影响。【结果】在本次实验中，加入钙离子、镁离子和十二烷基硫酸钠的实验组均没有对1398 蛋白酶表现出预期的影响；加入Vc的实验组不能通过0.D值判断Vc对1398蛋白酶是否有抑制作用。【结论】 本次实验没有得到预期的实验结果。通过分析发现，钙离子、镁离子和十二烷基硫酸钠均因工作浓度过小导致对酶活力影响不明显；Vc由于是较强的还原剂，使 得,在加Folin-酚试剂后，Vc与Folin-酚试剂反应，从而，影响到了酪氨酸与Folin 的反应，进而表现出，0.D大大增高的现象。关键词：1398 酶、激活剂、抑制剂、酶活力Activting agent and inhibitor affect activity of 1398 enzymeAbstract :The paper is aimed at explorer the vitality of the 1398 enzyme which is be influenced by different activting agent and inhibitor. Add different reagents into the enzyme solution ,as a result ,there is a difference among these activting agent and inhibitor by analysis the O.D of erey group. In this experiment, there is a little diffence when compared the enzyme solution added calcium or magnesium with the norml group. In addition, when added the Vc into enzyme solution, it reflected a strange phenomenon. But the result is due to the Vc act on Folin.Keywords :1398 enzyme ,activting agent ,inhibitor ,enzyme activity 1398 蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提炼而成的固体酶制剂，能将大分子蛋 白质水解成游离的氨基酸等产物。1398酶的最适温度是3545摄氏度，最适pH 是 6.57.5。1398 蛋白酶催化酪蛋白水解，产物中有酪氨酸。蛋白酶的活力越大，则生成 的氨基酸越多。福林酚试剂与水解出来的酪氨酸作用生成蓝色物质，从蓝色深浅 程度通过比色可以判断酪氨酸的多少，从而推断酶活力的大小。能引起酶活力降低或丧失的物质被称为酶的抑制剂。能提高酶活性，加速酶 促反应的物质称为酶的激活剂。无论抑制剂还是激活剂对酶都有选择性。 材料与方法仪器与试剂试管10支，试管架1支，微量移液器1支；50ml、100ml容量瓶各一只；恒温 水浴锅；分光光度计；秒表1398 蛋白酶，2%酪蛋白溶液，0.4mol/LNa2Co3 溶液，0.4mol/LTCA溶液，0.02mol/L 磷酸缓冲液（pH=7.5），福林酚试剂，0.005mol/LCuCl2 溶液，0.005mol/LMnCI2 溶 液, 0.005mol/L十二烷基硫酸钠溶液（SDS）, Vc及其衍生物（浓度为0.005mol/L） 方法与测定1,酶液准备：称取1398蛋白酶试剂1g,加少许0.02mol/LpH7.5磷酸缓冲液，置 于研钵中研磨。然后移入100ml容量瓶中，用缓冲溶液定容至刻度。在40C恒 温水浴中保温15分钟。将此酶浸出液过滤，娶滤液1ml用上述缓冲液定容至50ml, 此溶液即为稀释5000倍的酶液。2，酶反应条件：反应温度40C，作用pH7.5,反应时间10分钟。3，操作步骤严格按表1进行表1管号0123456789酶液1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1mlTCA2ml/激活剂1ml1ml1ml1ml1mlCaCl2CaCl2MgCl2MgCl2水抑制剂1ml1ml1ml1mlSDSSDSVcVc酪蛋白1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml40度保温10分钟TCA2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml40度保温10分钟滤液1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1mlNa2Co35ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml福林酚1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml40度保温20分钟（显色）O.D值结果利用分光光度计测量在650nm处的0.D值，如表2。表2管号01234567890.D值0.0000.1400.1590.1590.1690.1340.1502.9003.0740.168讨论从实验结果分析，我们并没有得到预期的实验效果。按实验原理， 14 号添加了激活剂，酶的活性应有所增加，相同反应条件下，酶 分解底物所得酪氨酸应比对照组9号多，即14号的 0.D 值应比9号高；而加了 抑制剂的 58号的 0D 值应比对照组9号低。从我们所得到的实验结果分析图上看， 16 号与9号的 0.D 值近似相等， 7号和8号的 0D 值异常高。经实验后分析讨论， 16 实验结果不明显，是因为离子浓度过小，对酶作用不明显。而加入 Vc 的 7、8 组并不是因为对酶有激活作用而使O.D值异常增高。事实上，一定浓度的Vc对酶有抑制作用。但是，Vc是一个强 的还原剂，比酪氨酸的还原性更强，因此，当加入folin-酚试剂时，Vc直接与folin 试剂进行反应，生成物比酪氨酸与folin反应的的产物颜色更深，因此在进行分光 光度测量时，其0.D值就出现了一种“错误”的现象。由于是Vc与folin反应得 出的0.D值，因此，此组数据无效。结论 ：这次实验虽然没有得到预期结果，但是我们从中也学习到了很多。在实 验前，需掌握实验原理，多查阅文献资料，了解试剂的性质及在实验中所起的作 用，以避免出现无效的实验数据。参考文献：1 吴京平，金属离子对蛋白酶活力和热稳定性的影响，中国皮革， Vol.33 No.11 Jun,20042 曹小敏,王志勇，刘欲文，汪存信，吴同华，田耘，等转化率法分析溶菌酶在 变性剂影响下的变性过程，华中农业大学学报， Vol.29 No.1 Feb,2010