山东省艾滋病检测实验室操作规范(白)

1艾滋病检测实验室操作规范艾滋病检测实验室操作规范 济宁市疾病预防控制中心白传记2目录一一.管理依据管理依据二二.制定相应规章制度、安全守则、制定相应规章制度、安全守则、SOPSOP三三.实验室检测要求（检测样本的管理、检测实验室检测要求（检测样本的管理、检测方法、试剂、结果的判读、报告、质量控制方法、试剂、结果的判读、报告、质量控制3一、管理依据法规：法规：病原微生物实验室生物安全管理条例 全国艾滋病检测工作管理办法 标准：标准：实验室生物安全通用要求规范：规范：生物安全实验室建筑技术规范 全国艾滋病检测技术规范导则：导则：实验室生物安全手册（WHO）医学实验室生物安全要求（ISO15190）4实验室分级1 1、艾滋病参比实验室、艾滋病参比实验室 2 2、艾滋病检测确证实验室、艾滋病检测确证实验室 （1 1）艾滋病确证中心实验室）艾滋病确证中心实验室 （2 2）艾滋病确证实验室）艾滋病确证实验室 3 3、艾滋病检测筛查实验室、艾滋病检测筛查实验室 （1 1）艾滋病筛查中心实验室）艾滋病筛查中心实验室 （2 2）艾滋病筛查实验室）艾滋病筛查实验室 （3 3）艾滋病检测点）艾滋病检测点 见见全国艾滋病检测工作管理办法全国艾滋病检测工作管理办法5艾滋病筛查实验室职能1、开展艾滋病病毒抗体的筛查实验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。2、负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查中心实验室。3、定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查中心实验室。4、对自愿咨询检测工作提供技术支持。6艾滋病病人的确诊需要三级实验室完成因为艾滋病是一种不能彻底治愈的传染病，它的感染常与多性伴和吸毒等行为紧密相关。感染者不仅要面对HIV感染带来的身心痛苦，可能还要面对歧视，或是道德上的评判，对日常工作和生活造成严重影响。因此，对一个人做出艾滋病的诊断要十分慎重。实验室检测结果是做出感染HIV诊断的惟一依据，所以，艾滋病的检测与其他大多数传染病的检测不同。其检测方法和结果报告要严格按照国家规定的程序进行，以维护受检者的合法权利。7目前我省实验室数 截止到截止到2007年年8月底我省共有艾滋病检月底我省共有艾滋病检测实验室测实验室497个个 （1）艾滋病确证中心实验室）艾滋病确证中心实验室 1个个 （2）艾滋病确证实验室）艾滋病确证实验室 2个个 （3）艾滋病筛查中心实验室）艾滋病筛查中心实验室 18个个 （4）艾滋病筛查实验室）艾滋病筛查实验室 477个个 8497个艾滋病检测实验室在各市分布个艾滋病检测实验室在各市分布9497个艾滋病检测实验室系统分布个艾滋病检测实验室系统分布10人员、建筑、设备要求（一）艾滋病筛查中心实验室及艾滋病筛查实验室。1、人员条件 至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。2、建筑条件 实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。3、仪器设备条件 至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器（仪）、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。见见全国艾滋病检测工作管理办法全国艾滋病检测工作管理办法附件附件11二二.规章制度、安全守则、规章制度、安全守则、SOPSOP实验室管理制度实验室管理制度实验室生物安全守则实验室生物安全守则标准操作程序（标准操作程序（SOP）样品接受，登记和处理样品接受，登记和处理 检测方法和步骤检测方法和步骤仪器使用维护和校准仪器使用维护和校准 实验中的质量控制实验中的质量控制结果解释与报告结果解释与报告 保密程序保密程序检测数据的记录与保存检测数据的记录与保存 追踪和处理追踪和处理实验室的清理和消毒实验室的清理和消毒 实验室安全防护实验室安全防护实验室应急突发事故处理制度实验室应急突发事故处理制度121314编写要求 1.SOP 1.SOP 是书面质量体系中的一个很重要的部分。是书面质量体系中的一个很重要的部分。SOPSOP是是指导完成检测工作的一整套书面操作指南，因而每个实指导完成检测工作的一整套书面操作指南，因而每个实验室应就本实验室所有重要工作制定相应的验室应就本实验室所有重要工作制定相应的SOPSOP。2.2.每一个检测项目都应该制定一份每一个检测项目都应该制定一份SOPSOP，其中包含有详，其中包含有详细的操作程序，例如实验室实验条件细的操作程序，例如实验室实验条件(温度等温度等)、仪器的、仪器的使用和维护、试剂、质控品、校准品的使用等使用和维护、试剂、质控品、校准品的使用等(设备和设备和试剂盒说明书作为附录试剂盒说明书作为附录)，以避免或减少因不同的操作，以避免或减少因不同的操作者所引起的误差。者所引起的误差。3.SOP3.SOP由各岗位工作人员起草，实验室负责人审定。实由各岗位工作人员起草，实验室负责人审定。实验人员在操作时应该严格按照验人员在操作时应该严格按照SOPSOP进行，实验室主管人进行，实验室主管人员应该督查实验人员执行员应该督查实验人员执行SOPSOP。必要时，。必要时，SOPSOP中的内容，中的内容，如说明书或相关内容，应该在实验室主管人员的领导下如说明书或相关内容，应该在实验室主管人员的领导下进行修订进行修订.4.4.每年至少修订一次。修订后的每年至少修订一次。修订后的SOPSOP按审批程序批准后按审批程序批准后使用。使用。15实验室应有的纪录实验室应有的纪录1.1.工作人员培训纪录工作人员培训纪录2.2.健康监护档案健康监护档案3.3.实验室出入登记（外来人员）实验室出入登记（外来人员）4.4.仪器使用、维护、校准纪录仪器使用、维护、校准纪录5.5.实验室温度、湿度纪录实验室温度、湿度纪录6.6.各种试验的原始纪录各种试验的原始纪录7.7.样本接收、保存纪录样本接收、保存纪录8.8.试剂使用纪录试剂使用纪录9.9.废弃物处理纪录废弃物处理纪录10.10.质量控制纪录质量控制纪录16档案管理 原始记录包括实验原始记录表、打印数据、膜反应条带或其照片、检测记录表、标本登记记录、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等重要记录都应该妥善存档保存15年以上。推荐同时使用计算机保存各种文件和记录。内含病人姓名的所有工作记录一定要保密保密。参见规范第8页17三、实验室检测要求三、实验室检测要求1.1.检测样本的管理检测样本的管理2.2.检测方法检测方法3.3.试剂选择和使用试剂选择和使用4.4.试验结果的判定、结果报告试验结果的判定、结果报告5.5.质量控制质量控制181、检测样本的管理检测样本的管理l 制定标准操作程序（制定标准操作程序（SOP），并严），并严格按照要求去做格按照要求去做样品采集样品采集、运输和保存、运输和保存样品的采集样品的采集19采集病原微生物样本应当具备下列条件(一)具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备；(二)具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；(三)具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施；(四)具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。采集高致病性病原微生物样本的工作人员在采集过程中应当防止病原微生物扩散和感染，并对样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。病原微生物实验室生物安全管理条例20采血针211.血清、血浆血清、血浆2.标本采集时应尽量避免溶血、长菌标本采集时应尽量避免溶血、长菌3.抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造 成假阳性成假阳性4.冰箱中保存时间过长易导致血清冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合聚合5.避免交叉污染避免交叉污染标本的采集和保存标本的采集和保存22针头处理针头收集器正确的取针头方式23错误的取针头方式24采集样本的注意事项采集样本的注意事项保障工作人员、病人和环境的安全保障工作人员、病人和环境的安全保证样品的质量（避免溶血、及时分离血清、保证样品的质量（避免溶血、及时分离血清、合理的存放）合理的存放）样本的正确标示（编号与登记表一致）样本的正确标示（编号与登记表一致）职业暴露的预防职业暴露的预防25样本的保存分离血清分离血清即时检测的样品（即时检测的样品（1-21-2天内），可存放于天内），可存放于2-2-88冰箱，最长时间一周。冰箱，最长时间一周。如需长期保存，应将分离的血清或血浆存放如需长期保存，应将分离的血清或血浆存放于于-20-20冰箱内。冰箱内。选择合适的冻存管。选择合适的冻存管。26样品的运送样品的运送中华人民共和国卫生部令中华人民共和国卫生部令第第45号号可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定已于2005年11月24日经卫生部部务会议讨论通过，现予以发布，自2006年2月1日起施行。部长部长 高强高强二五年十二月二十八日27样品包装样品包装 采用提出的三级包装系统。采用提出的三级包装系统。第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可装多个第一层容器。将试管装入专护第一层容器，可装多个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。外面要贴标签（数量，收、发件人）。于消毒。外面要贴标签（数量，收、发件人）。28第一层容器第二层容器第三层容器29安全运送：安全运送：无损坏，不倾倒，无泄漏。无损坏，不倾倒，无泄漏。及时运送：按时送到，不失时效及时运送：按时送到，不失时效必要条件：保证适宜温度，不受污染，必要条件：保证适宜温度，不受污染，无失误：无地址人名不清，造成错送或延误。无失误：无地址人名不清，造成错送或延误。感染性样本的运输要求感染性样本的运输要求30感染性样本的运输要求感染性样本的运输要求严格按照严格按照可感染人类的高致病性病原微生可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定物菌（毒）种或样本运输管理规定 和和全全国艾滋病检测技术规范国艾滋病检测技术规范的要求运送。的要求运送。阳性样本阳性样本填写填写HIVHIV抗体复检化验单抗体复检化验单，用微，用微机打印。送检单项目必须填写完全、规范。机打印。送检单项目必须填写完全、规范。除特殊需要外，一般不能用全血。除特殊需要外，一般不能用全血。31可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输包装标识 1.高致病性病原微生物危险标签 高致病性病原微生物高致病性病原微生物制冷剂：请勿自行打开如有破损、渗漏或遗失请立即通知当地卫生行政部门联 系 人：联系电话：2.高致病性病原微生物运输登记表 3.外包装放置方向标识 322、HIV实验室检测方法分类一一.抗体检测抗体检测 (IgG,IgM,IgA(IgG,IgM,IgA)初筛实验初筛实验 ELISA(EIA)第四代 胶体金/硒 层析、渗滤 明胶颗粒凝集 凝集法 确认实验确认实验 蛋白印迹(Western Blot,WB)免疫荧光(IFA)二二.抗原检测抗原检测 (P24)(P24)三三.核酸检测核酸检测 (RNA,DNA)(RNA,DNA)四四.病毒分离病毒分离33抗体检测抗体检测抗体检测抗体检测诊断的诊断的金标准金标准：HIV特异性抗体特异性抗体检测检测EIA（高敏感性）（高敏感性）+WB（高特异性）诊断的准（高特异性）诊断的准确率大于确率大于99%，假阳性率约为，假阳性率约为0.0006%，造成，造成错误诊断的机会几乎是错误诊断的机会几乎是0。抗体检测唯一的问题是窗口期可以出现假阴性抗体检测唯一的问题是窗口期可以出现假阴性34实验前试剂准备实验前试剂准备1.观察外包装，内主份有无漏液，注意效期等。2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。3.操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性剂的溶解。4.核对样本编号5.检查孵育温度6.检查洗板机管道的畅通及程序7.一次性手套、隔离衣、口罩等8.消毒物品9.污物桶、缸10.做好试验原始记录35厂家厂家方法方法包被抗原包被抗原CUTOFF值值阳性对照阳性对照阴性对照阴性对照条件条件北京万泰北京万泰酶免酶免未注明未注明阴性均值阴性均值NC+0.12，型型各各1孔孔0.83孔孔0.1北京金豪北京金豪酶免酶免gp41;gp36;ENV180.10+N(均值）均值）2孔孔2孔小于孔小于0.02按按0.02计算计算P小于小于0.5，N大于大于0.1实验无效实验无效安图绿科安图绿科酶免酶免未注明未注明0.10+N(均值）均值）2孔孔3孔孔P大于大于0.7，N小于小于0.1，P-N大于大于0.6实实验无效验无效英科新创英科新创酶免酶免未注明未注明0.10+N(均值小于均值小于0.05按按0.05算）算）2孔孔2孔孔P大于大于N0.6以上，以上，N小于小于0.1，实验有效，实验有效珠海丽珠珠海丽珠酶免酶免未注明未注明0.15+N(均值）均值）2孔孔0.83孔孔0.12，0.08按按0.08算算阳性对照孔间差大于阳性对照孔间差大于30%，实验无效，实验无效英科新创英科新创胶体金胶体金gp120;gp41;gp3630分钟内判定结果分钟内判定结果上海科华上海科华胶体金胶体金gp160;gp41;gp36无无30分钟内判定结果分钟内判定结果美国雅培美国雅培层析法层析法未注明未注明最少最少15分钟最多分钟最多60分钟判定结果分钟判定结果36加样过程应注意的问题加样过程应注意的问题 1.血清或血浆标本分离不好即进行加样。血清或血浆标本分离不好即进行加样。2.漏加样品或加样量不足。漏加样品或加样量不足。3.加液器的校正。加液器的校正。4.手工操作中，加样板过多造成加样后手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长。放入孵箱前等待时间过长。37温育过程中出现的问题及解决办法温育过程中出现的问题及解决办法1.温箱温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，温箱温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；吸附于孔壁，难于清洗彻底；2.温育时间人为延长，导致非特异性结合，难以清洗温育时间人为延长，导致非特异性结合，难以清洗彻底。彻底。3.温育时温度不符合说明书的规定范围。温育时温度不符合说明书的规定范围。1.按规定加盖封板膜。按规定加盖封板膜。2.按说明步骤严格控制温育时间。按说明步骤严格控制温育时间。3.严格控制温育仪器（水浴箱、孵箱、全自动严格控制温育仪器（水浴箱、孵箱、全自动酶免）的温度，建议在仪器内放置测量工具酶免）的温度，建议在仪器内放置测量工具（全自动酶免除外）。（全自动酶免除外）。38洗板过程中易出现的几点情况洗板过程中易出现的几点情况1.采用手工洗板采用手工洗板,孔与孔之间液体容易交叉，切孔与孔之间液体容易交叉，切不可随意洗板。不可随意洗板。2.采用洗板机洗板时，洗液注入孔中量不足，采用洗板机洗板时，洗液注入孔中量不足，导致洗板不彻底，造成本底高。导致洗板不彻底，造成本底高。3.由于血液中纤维蛋白原由于血液中纤维蛋白原，造成洗板针堵塞，造成洗板针堵塞，抽吸不完全，造成洗板不畅，导致洗板效果抽吸不完全，造成洗板不畅，导致洗板效果差，直接影响本底。差，直接影响本底。4.反应板过多，不能保证及时洗板，造成洗板反应板过多，不能保证及时洗板，造成洗板等待时间过长，影响结果。等待时间过长，影响结果。5.洗板前先将孔内液体甩出包被板。洗板前先将孔内液体甩出包被板。39显色过程中易出现的问题显色过程中易出现的问题1.显色剂配制后放置时间过长或使用已经变色显色剂配制后放置时间过长或使用已经变色失效的显色剂；失效的显色剂；2.用排枪加用排枪加A、B混合液时，加样槽不够干净，混合液时，加样槽不够干净，造成花板造成花板 。3.不同厂家试剂的显色液混用。不同厂家试剂的显色液混用。40终止和读数时的注意事项终止和读数时的注意事项1 1加完终止后加完终止后3030分钟内读取数据。分钟内读取数据。2 2读板时板底如果不清洁，就会导致所读的读板时板底如果不清洁，就会导致所读的数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标板数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标板的底部是清洁的。的底部是清洁的。41初筛试剂的选择初筛试剂的选择1 1、初筛检测的宗旨是避免漏检。、初筛检测的宗旨是避免漏检。2 2、筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。在有效期内的试剂。目前常用的筛查试剂有目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用采供血机构进行血液筛查应采用HIV-1/2HIV-1/2混合混合型酶联免疫试剂。自采自供血的单位必须进型酶联免疫试剂。自采自供血的单位必须进行行HIVHIV抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。定的场所用快速试剂进行血液筛查。422007年山东HIV抗体诊断试剂临床质量评估（ELISA）结果 试剂试剂真阴真阴性性真阳真阳性性假阴假阴性性假阳假阳性性敏感敏感性性%特异特异性性%功效功效率率%丽珠丽珠66310310095.65 97.00 BioMerieux Ag+Ab66310310095.65 97.00 万泰万泰66310310095.65 97.00 新创新创66310310095.65 97.00 金豪金豪65310410094.20 96.00 绿科绿科65310410094.20 96.00 高达高达65310410094.20 96.00 432007年山东HIV抗体诊断试剂临床质量评估（快速）结果试剂试剂真阴真阴性性真阳真阳性性假阴假阴性性假阳假阳性性敏感敏感性性%特异特异性性%功效功效率率%Determine68310110098.55 99.00 中新科炬中新科炬68310110098.55 99.00 中山生物中山生物68310110098.55 99.00 科华科华68310110098.55 99.00 Bioline68310110098.55 99.00 新创新创67310210097.10 98.00 PA65310410094.20 96.00 44稀释度稀释度252627282929210211212ELISA(O.D.)OverOverOverOver2.8962.5612.4972.3852.372PA+稀释度稀释度213214215216217218219220221ELISA(O.D.)1.9941.5481.2781.1650.9320.9430.7900.6880.474PA+稀释度稀释度222223224225226227228229230ELISA(O.D.)0.3680.3450.2680.2420.2470.2350.1520.1170.105PA+所用所用ELISA试剂为生物梅里埃试剂为生物梅里埃HIV 试剂盒试剂盒,其其Cut off值为值为0.15045编号编号1 12 23 34 45 56 67 78 89 91010靶值靶值3.00 3.00 2.93 2.93 2.67 2.67 2.35 2.35 1.32 1.32 0.72 0.72 0.51 0.51 0.05 0.05 0.04 0.04 0.020.02ELISAELISA结果结果+-雅培结果雅培结果+-+-雅培结果雅培结果+-+-雅培结果雅培结果+-雅培结果雅培结果+-雅培结果雅培结果+-雅培结果雅培结果+-+-雅培结果雅培结果+-+-雅培结果雅培结果+-雅培结果雅培结果+-+-9 9个实验室结果均为个实验室结果均为+-所用所用ELISA试剂为丽珠试剂为丽珠HIV 试剂盒试剂盒,其其Cut off值为值为0.23046结果判定药品生产质量管理规范（GMP）新生物制品审批办法于1999年3月26日经国家药品监督管理局局务会审议通过，现予发布。本规定自1999年5月1日起施行。CUT OFF值的确定：正常人标本测定人数应在400人份以上，所得数据经统计学处理。通常是阴性对照均值+常数严格按照说明书要求判定结果47报告1.对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告。2.对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告。见见全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范附表附表1 148临床由于临床由于HIV检测导致的医疗纠纷检测导致的医疗纠纷 1，阳性结果未确认就报告给被检验者。，阳性结果未确认就报告给被检验者。但确认为阴性。但确认为阴性。2，使用不规范试剂的检测结果被告知。，使用不规范试剂的检测结果被告知。3，使用低质量试剂，造成阳性漏检，但，使用低质量试剂，造成阳性漏检，但病人手术输血后发现病人手术输血后发现HIV。4，检测，检测HIV的记录未有详细规范记录。的记录未有详细规范记录。在在“举证倒置举证倒置”中陷于不利地位。中陷于不利地位。49示例150示例2:王 女 21岁51 4、质量控制实验室内部质量控制实验室内部质量控制样品接收样品接收-处理处理-检测检测-报告报告样品保存样品保存实验外对照质控品的应用实验外对照质控品的应用质控图质控图标准操作程序标准操作程序设备设备/环境质控环境质控数据质控数据质控52内、外部对照质控血清内、外部对照质控血清1、内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供的一套阴性和阳性对照（弱阳性对照）供的一套阴性和阳性对照（弱阳性对照）2、是为了监控实验的重复性和试剂盒的稳定性、是为了监控实验的重复性和试剂盒的稳定性而由实验室自己制备的对照。而由实验室自己制备的对照。3、理想的外部对照应该包括阳性对照、弱阳性理想的外部对照应该包括阳性对照、弱阳性对照、临界值对照和阴性对照。在每次实验时对照、临界值对照和阴性对照。在每次实验时应设置一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对应设置一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照的值以设定在该试剂盒照。这个弱阳性对照的值以设定在该试剂盒Cut-offCut-off值的值的2 23 3倍为宜。倍为宜。53外部对照质控血清的来源和选择1 1）通过向有关机构购买获得）通过向有关机构购买获得2 2）通过实验室制备获得）通过实验室制备获得 (比较经济的方法比较经济的方法 )54制备外部对照的方法制备外部对照的方法1.阳性血清阳性血清2.阴性血清（稀释血清）阴性血清（稀释血清）3.临界值对照的临界值对照的OD/CO+23倍倍4.重复重复20次结果绘制质控图次结果绘制质控图5.外部对照外部对照3000rpm15min去除沉淀，用去除沉淀，用0.2 m 生物生物滤膜过滤除菌后，滤膜过滤除菌后，56加热加热30min灭活处理，分装，灭活处理，分装，-20保存备用。保存备用。55外部对照质控血清的保存1 1）外部对照血清或血浆的一次制备量应该足够本实验室一年）外部对照血清或血浆的一次制备量应该足够本实验室一年使用使用2 2）外部对照血清应该均一、无菌）外部对照血清应该均一、无菌3 3）外部对照血清标定后应该等量分装，每个分装的量应足够）外部对照血清标定后应该等量分装，每个分装的量应足够一周使用一周使用4 4）外部对照应该分类作好标记）外部对照应该分类作好标记5 5）外部对照血清应该存放在）外部对照血清应该存放在70 70，如无条件则存放在非自，如无条件则存放在非自动除霜的动除霜的20 20 冰箱冰箱6 6）外部对照血清一旦融解以后应该存放在）外部对照血清一旦融解以后应该存放在 2 28 8，一周后，一周后必须弃去，不能重新冻存。必须弃去，不能重新冻存。5620次外部对照的次外部对照的OD值值57建立质控图参数建立质控图参数 算术平均值算术平均值(x x)代表一组代表一组ODOD值数的平均值。值数的平均值。标准差标准差(s s););是描述样品与均数之间离散程是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清度的一个指标，是与对照质控血清S/CO值均值均值有关的预期范围。值有关的预期范围。变异系数变异系数(cvcv););是反映各次是反映各次S/CO值相对于值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度的重复性或精密度.变异系数变异系数(cv)小于小于20，表，表示外部对照处于稳定状态。示外部对照处于稳定状态。5859质控图的判定和分析告警（12S）：当质控物的测定值超出 +2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。失控（13S）：当质控物的测定值超出 +3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差或外部对照滴度下降造成。60位移位移如果几个连续质控如果几个连续质控对照值对照值 (3-5(3-5次次)都都落在均值落在均值(中心线中心线)的的一边则称之为位移，一边则称之为位移，通常表示存在大的变通常表示存在大的变化化 (失控失控 )。引起位移的原因有引起位移的原因有使用新批号的试剂盒、使用新批号的试剂盒、使用新试剂、实验员使用新试剂、实验员的更换、孵育温度的的更换、孵育温度的改变、仪器改变、仪器 (移液移液器器 )故障等。故障等。61趋势趋势l当几个连续质控对照值(5-7个)几乎按一个方向分布时称之为趋势(失控)，通常由参数的缓慢改变引起，如试剂失效和移液器逐渐不准确等。l发生趋势的最常见的原因是试剂(如酶标记物)或对照的失效。62定期分析和总结1、每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。2、要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO比值绘制质控图。3、采用自制的质控物，是一种经济的方法，关键是要确保质控物的性质稳定;4、使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。635、建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。6、发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。64张贴在实验室门上的生物危害警告标志实验室生物安全手册（第三版）WHO200465实验室标示实验室标示66实验室标示67洗眼器68紧急喷紧急喷林和洗林和洗眼装置眼装置69防护面罩、防护镜70一次性防护用品71生物安全手册和作业指导书72近期工作 对到期的艾滋病筛查实验室进行考核对到期的艾滋病筛查实验室进行考核 73