细菌计数的方法

细菌计数-基本资料细菌计数 counting of bacteria指测计酵母、细菌等的细胞数。有总菌计数和活菌计数两种计数法。后者是测计试样中的活 细菌数。二者都是先把试样稀释成适于测计的浓度，再用种种方法进行细胞数的测计。一般 认为用细胞计数器测计更为精确。有的方法是把细胞用血球容量计进行离心沉淀，从其刻度 的容积进行换算；还有一种方法是比浊法。在测计固氮细菌时，可用凯氏定氮法测定有机氮 (或是蛋白态氮)，然后换算成细菌数。进行活菌计数时，先把样品稀释，然后将一定量稀 释样品混入依菌性质制成的溶融状态的琼脂培养基中进行平面培养，再根据菌落数进行统 计。对已鉴别过的菌种或具有某种特定性质的细菌来说，活菌计数比较简单，但对土壤微生 物区系量的分析就比较复杂了。细菌计数-各种计数1、计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.lmm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个 细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬 液中不含任何碎片。3、活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌 落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前 国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：一般选取菌落数在30300之间的平板 进行计数，过多或过少均不准确；为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入 O. 001%2, 3, 5 一氯化三苯基四氮唑(TTC)；本法限用于形成菌落的微生物。广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内 与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表 示样品菌液浓度。此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。5、测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。6、测定细胞总氮量或总碳量氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法 适于细胞浓度较高的样品。7、颜色改变单位法(colour change unit,简称CCU)这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原 体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原 体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它 是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体 为例，简单介绍其操作：( 1)取 12 只无菌试管，每一管装 1.8ml 解脲脲原体培养基。(2) 在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推， 10 倍梯度稀释，一直到最末一管(3) 于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体 的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比 较特殊的微生物，用CCU法比较合适。