柱色谱法分离

柱色谱的原理跟薄层色谱、纸色谱、气相色谱及高效液相色谱等一样，即是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将组分分开。流动的混合物称为流动相，固定的物质称为固定相。柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类。吸附柱色谱常用氧化铝和硅胶作固定相。在分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当待分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成了不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时 常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等，一般要经过纯化和活性处理。颗粒大小均匀，粒小，表面积大吸附能力就高，但过小，溶剂流速太慢。氧化铝有：酸性PH为4，中性PH=7.5，碱性PH=10，3种，大多数吸附剂都能强烈吸水，使活性降低，通常用加热方法使吸附剂活化。活性等级可用勃劳克曼标准测定法，分五级。I级活性最高，V级吸附力最弱。已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或者将柱吸干，挤出后按色带分割开，在用溶剂将各色带中的溶质萃取出来。对于柱上不显色的化合物分离时，可用紫外光照射后所呈现的荧光来检查，或在用溶剂洗脱时，分别收集洗脱液逐个加以鉴定。色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离。然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。所用溶剂必须纯粹、干燥。吸附剂用量为被分离样品量的3040倍，需要时可增至100倍。柱高与直径之比是75：1。（利用相似相溶原理）1、了解掌握柱色谱原理和方法溶剂石英砂氧化铝砂芯cm50cm50g5高出砂面加正己烷高石英砂轻敲柱子使紧密氧化铝色谱柱入柱内少量正己烷洗涤合并转正己烷自制产物溶于转入产物液面不低于砂面滴每秒保持流速ml5121不低于砂面保持液面继续洗脱不断加正己烷滴速度以每秒黄色带下移色谱带橙得到黄、洗脱正己烷21收集黄色产物于一已知重量烧瓶中洗脱：正己烷：二氯甲烷改用橙色带下移洗脱：正己烷：二氯甲烷改用1911知重量烧瓶中收集橙色产物于另一已保持液面、速度中收集产物于第三个烧瓶速度保持液面洗脱：甲醇：若有棕色带用二氯甲烷191、色谱柱一定要干燥，若潮湿可用吹风机吹干或用无水有机溶剂（甘油等）清洗。4、在整个洗脱过程中，为了保持色谱柱的均一性，应使柱中洗脱剂液面始终保持不低于石英砂面。否则柱中溶剂流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。