质粒转化、细胞转染步骤

转化：将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内使之获 得新的遗传特性。转染(tra nsfectio n):将含有目的ge ne的载体转到真核cell内转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程。有时也指在 真核cell之间通过逆转录病毒转移和获得cellDNA的过程。1.质粒转染(transfection)6-well-plate 每 well 60-70% 时 tra nsfection接种时 2.5X105 个/ml/well质粒DNA转染液 优化培养基opti-MEM步骤：2.5ug质粒DNA + 200ul opti-MEM + 6ul转染液 混匀室温静 置15mi n待转染cell换优化培养基opti-MEM 1.3ml，切记要轻轻加培 养基，勿冲起cell把tra nsfection complex(200ul)轻轻均匀滴入cell培养基中， 十字形摇晃plate,混匀37C, CO培养箱培养转化：外源DNA（质粒作为载体）导入受体细胞（大肠杆菌感受态cell）步骤：50ul感受态cell （管）加入12ul质粒DNA T轻柔混合I冰浴30mi nI42C 热激 90sI迅速冰浴2minI向管中加入培养基，混匀后37C震荡培养（225rpm） 1h,使细菌恢复正常生长状态I涂板正培1h后，倒培过夜