化学毒物的一般毒性作用

有毒化学物与机体相交作用，导致机体的有毒化学物与机体相交作用，导致机体的结构和功能产生不良改变结构和功能产生不良改变机体本身的属性机体本身的属性化学物暴露的程度与途径化学物暴露的程度与途径 毒物进入机体的途径毒物进入机体的途径 毒物与靶分子交互作用毒物与靶分子交互作用 毒作用表现毒作用表现 机体对损害作用的反应机体对损害作用的反应 有毒化学物质数量宠多有毒化学物质数量宠多 损害的生物化学过程复杂损害的生物化学过程复杂 中毒的表现多种多样中毒的表现多种多样 可能导致毒性的机制各不相同可能导致毒性的机制各不相同 与靶器官直接作用与靶器官直接作用 破坏微环境产生有害影响破坏微环境产生有害影响 毒效应强度毒效应强度 取决于终毒物在其作用位点的浓度和持续取决于终毒物在其作用位点的浓度和持续时间。时间。终毒物终毒物 指与内源靶分子（如受体、酶、指与内源靶分子（如受体、酶、DNA、微、微丝蛋白、脂质）反应或严重地改变生物学丝蛋白、脂质）反应或严重地改变生物学（微）环境、启动结构与（或）功能改变（微）环境、启动结构与（或）功能改变而表现出毒性的物质。而表现出毒性的物质。暴露的母体：强酸强碱、重金属、暴露的母体：强酸强碱、重金属、CO等等CH3CH3N-NOCH3+（亲电子基团）（亲电子基团）直接毒性作用直接毒性作用 代谢活化（代谢活化（metabolic activation）增毒（增毒（toxication）对硫磷对硫磷对氧磷（高活性胆碱酯酶抑制剂）对氧磷（高活性胆碱酯酶抑制剂）产生 清除氧化应激（氧化应激（oxidative stress），进而造成机体损伤），进而造成机体损伤 脂质过氧化损伤脂质过氧化损伤 细胞器和细胞膜结构破坏细胞器和细胞膜结构破坏 引起细胞毒性引起细胞毒性 对对DNA的影响（氧化和加合）的影响（氧化和加合）LDL的氧化修饰的氧化修饰 蛋白质氧化损伤蛋白质氧化损伤 引起蛋白质凝集、交联、降解、断裂，出引起蛋白质凝集、交联、降解、断裂，出现生理功能受损现生理功能受损组织细胞毒性与坏死组织细胞毒性与坏死免疫反应免疫反应致癌作用（非突变机理）致癌作用（非突变机理）核酸的氧化损伤核酸的氧化损伤 DNA断裂，缺失突变断裂，缺失突变 启动修复系统，如修复功能受损，引起突变启动修复系统，如修复功能受损，引起突变 活化癌基因活化癌基因细胞毒性细胞毒性改变蛋白质改变蛋白质DNA相互作用相互作用致突变作用致突变作用形成活化的癌基因形成活化的癌基因 亦较少见亦较少见 硝酸盐硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐高铁血红蛋白高铁血红蛋白 Cr6+Cr5+VitC 黄素酶黄素酶化学毒物产生毒性的可能途径化学毒物化学毒物吸收、分布、代谢、排汇吸收、分布、代谢、排汇与靶分子相互作用与靶分子相互作用细胞功能失调、损伤细胞功能失调、损伤细胞修复功能失调细胞修复功能失调毒毒性性（1）（2）（3）最直接途径最直接途径毒物在机体的重要部位出现，毒物在机体的重要部位出现，不与靶分子作用不与靶分子作用较为复杂途径较为复杂途径毒物毒物机体机体靶部位靶部位靶分靶分子子毒作用毒作用最为复杂的途径最为复杂的途径毒物毒物机体机体靶部位靶部位靶靶分子分子细胞功能结构细胞功能结构/功能紊乱功能紊乱启动分子、启动分子、细胞或组织水平的修复机制细胞或组织水平的修复机制毒性作用发生毒性作用发生 化学毒物与细胞大分子的共价结合化学毒物与细胞大分子的共价结合 与蛋白质共价结合：组织细胞毒性与坏死与蛋白质共价结合：组织细胞毒性与坏死 免疫反应免疫反应 致癌作用（非突变机理）致癌作用（非突变机理）与核酸分子共价结合：细胞毒性与核酸分子共价结合：细胞毒性 改变蛋白质改变蛋白质DNA相互作用相互作用 致突变作用致突变作用 形成活化的癌基因。形成活化的癌基因。外源性化学物外源性化学物的毒性作用的毒性作用一般毒性作用一般毒性作用致突变作用致突变作用致癌作用致癌作用发育毒性与致畸作用发育毒性与致畸作用急性毒性作用急性毒性作用蓄积毒性作用蓄积毒性作用亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用基因突变基因突变染色体突变染色体突变非整倍体和多倍体非整倍体和多倍体靶器官靶器官 毒性毒性血液毒理学血液毒理学免疫毒理学免疫毒理学生殖毒理学生殖毒理学神经系统和行为毒理学神经系统和行为毒理学呼吸毒理学呼吸毒理学肝脏毒理学肝脏毒理学肾脏毒理学肾脏毒理学心血管毒理学心血管毒理学皮肤毒理学皮肤毒理学按接触毒物时间的长短，将产生的一般毒性作按接触毒物时间的长短，将产生的一般毒性作用分为：急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性用分为：急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性相应地所观察和评价毒效应的试验即为急性毒相应地所观察和评价毒效应的试验即为急性毒性试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验性试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验对外来化学物（新食品、药品、农药、化妆品对外来化学物（新食品、药品、农药、化妆品等）一般毒性的观察是毒理学的经常生工作，等）一般毒性的观察是毒理学的经常生工作，对防治外源性化学物所致急慢性中毒、毒理学对防治外源性化学物所致急慢性中毒、毒理学安全性评价和危险度评定、卫生标准制定、管安全性评价和危险度评定、卫生标准制定、管理毒理学的决策有重要意义。理毒理学的决策有重要意义。&1 急性毒性作用急性毒性作用&2 蓄积毒性蓄积毒性&3 亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用&4 局部毒性作用局部毒性作用Acute toxicity指机体（实验动物或人）一次或指机体（实验动物或人）一次或24h内多次内多次接触外源化学物后在短期内接触外源化学物后在短期内(最长到最长到1414天天)所产生的毒性效应。所产生的毒性效应。包括一般行为、外观改变、大体形态变化包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。以及死亡效应。急性接触次数：急性接触次数：一次或一次或24h多次多次“一次一次”：经口和经注射途径染毒是指瞬间给：经口和经注射途径染毒是指瞬间给予实验动物染毒，经呼吸道与皮肤染毒时，则予实验动物染毒，经呼吸道与皮肤染毒时，则指在一段规定的时间内使持续接触毒物的过程指在一段规定的时间内使持续接触毒物的过程“多次多次”：当一次最大染毒剂量不能达到以充：当一次最大染毒剂量不能达到以充分了解该毒物急性毒性作用的目的，从而在分了解该毒物急性毒性作用的目的，从而在24h内分内分次染毒。次染毒。中毒效应出现时间中毒效应出现时间瞬间死亡：瞬间死亡：氰化钾、煤气等氰化钾、煤气等迟发毒效应和死亡：有机磷农药迟发毒效应和死亡：有机磷农药快速和剧烈的毒效应后恢复快速和剧烈的毒效应后恢复轻微症状轻微症状恢复恢复严重中毒严重中毒死亡（毒菇）死亡（毒菇）714d中毒效应的强度：一般行为、外观、大体中毒效应的强度：一般行为、外观、大体形态、中毒症状一般较严重、死亡形态、中毒症状一般较严重、死亡求出致死剂量以及求出致死剂量以及LD50，通过，通过LD50进行毒进行毒性分级性分级评价外源性化学物的毒效应特征、靶器官、评价外源性化学物的毒效应特征、靶器官、剂量剂量-反应（效应）关系和对人体产生损害反应（效应）关系和对人体产生损害的危险性。的危险性。为其它毒理试验研究提供接触剂量和观察为其它毒理试验研究提供接触剂量和观察指标选择的依据指标选择的依据为毒理学机制研究提供线索为毒理学机制研究提供线索实验动物的选择和要求实验动物的选择和要求毒性反应与人近似毒性反应与人近似易于饲养、操作方便易于饲养、操作方便繁殖和生育能力强，能保障供给繁殖和生育能力强，能保障供给价格低易于获得价格低易于获得实验动物的物种和品系实验动物的物种和品系最好用两种种属的最好用两种种属的哺乳类动物哺乳类动物 啮齿类啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔 非啮齿类：非啮齿类：狗或猴狗或猴。大、小鼠符合选择的原则，最常用大、小鼠符合选择的原则，最常用 SD、Wistar大鼠；昆明种和大鼠；昆明种和NIH种小鼠种小鼠急性经口和毒性吸入试验选择大、小鼠，但经急性经口和毒性吸入试验选择大、小鼠，但经皮试验选择豚鼠、大鼠和家兔皮试验选择豚鼠、大鼠和家兔实验动物的年龄和体重实验动物的年龄和体重急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例如：大鼠孕的动物。例如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批试验动物体重变异范围不应超过同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的该批动物平均体重的2020。性别性别急性毒性试验的主要内容是求急性毒性试验的主要内容是求LDLD5050，除特殊要求，除特殊要求外，一般急性毒性试验对动物性别要求为外，一般急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各雌雄各半半。如果在预试验时发现化学毒物。如果在预试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验是。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的LDLD5050测测试。试。动物数量与随机分组动物数量与随机分组大、小鼠等小动物大、小鼠等小动物 每组每组10只只狗等大动物狗等大动物 每组每组6只只分组原则分组原则随机化原则随机化原则预检预检适应环境，减少环境和生理的变化对实验结果适应环境，减少环境和生理的变化对实验结果的影响的影响筛选健康动物，发现异常者应放弃筛选健康动物，发现异常者应放弃雌雄分笼饲养，防止交配和受孕雌雄分笼饲养，防止交配和受孕 试验动物的饲养环境试验动物的饲养环境恒定的温度：恒定的温度：223湿度：湿度：3070%照度：昼夜各半照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格禁食禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜禁食；或染毒前禁食隔夜禁食；或染毒前禁食4h大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。，但在禁食时要保障饮水。受试前了解受试物的理化性质和毒性资料受试前了解受试物的理化性质和毒性资料受试物配制受试物配制水溶液水溶液经口用蒸馏水或去离子水，注射用生经口用蒸馏水或去离子水，注射用生理盐水；理盐水；混悬液混悬液0.5%羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钠、10%阿拉伯乳阿拉伯乳糖、植物油，临用前配制。糖、植物油，临用前配制。给予动物的染毒量给予动物的染毒量不应超出最大给药量容积，减少非特异性因素对不应超出最大给药量容积，减少非特异性因素对毒性的影响毒性的影响经口：经口：20ml/kg.bw 经皮：经皮：2ml/kg静脉：静脉：1ml/kg（5min以上）以上）肌肉注射：肌肉注射：0.5ml/kg（一个部位）（一个部位）吸入：吸入：2mg/L模拟人在生活和生产环境中实际接触该受试物的模拟人在生活和生产环境中实际接触该受试物的途径和方法途径和方法有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较受试物的性质和途径受试物的性质和途径评价程序的要求评价程序的要求常见：经口、经呼吸道、经皮及经注射途径。常见：经口、经呼吸道、经皮及经注射途径。经口染毒经口染毒灌胃灌胃、喂饲、吞咽胶囊等、喂饲、吞咽胶囊等不同浓度不同浓度，相同体积，相同体积准确准确工作量大工作量大误入气管和伤及食管误入气管和伤及食管经呼吸道染毒经呼吸道染毒以气体、蒸气、粉尘、雾等形式存在于车以气体、蒸气、粉尘、雾等形式存在于车间空气中的工业毒物以及以吸入为给药途间空气中的工业毒物以及以吸入为给药途径的药物的染毒方式。径的药物的染毒方式。气管内注入和吸入气管内注入和吸入静式吸入静式吸入动式吸入动式吸入经皮吸收经皮吸收脱毛脱毛局部涂敷受试物局部涂敷受试物玻璃纸覆盖固定玻璃纸覆盖固定一定时间接触染毒一定时间接触染毒观察观察浸尾法：将动物固定，鼠尾浸入受试物中浸尾法：将动物固定，鼠尾浸入受试物中持续一段时间，观察。持续一段时间，观察。经注射途径染毒经注射途径染毒对注射用药品的急性毒性试验、毒性机制对注射用药品的急性毒性试验、毒性机制研究时了解毒物代谢动力研究时了解毒物代谢动力静脉、腹腔、肌内、皮下等静脉、腹腔、肌内、皮下等化学结构及理化特性化学结构及理化特性查阅文献查阅文献用少量动物，以较大的剂量间隔（几何级用少量动物，以较大的剂量间隔（几何级数）染毒，找出数）染毒，找出1090%（0100%）的致）的致死剂量范围，然后可设计正式试验的剂量死剂量范围，然后可设计正式试验的剂量和分组。和分组。i=(lgLD90-lgLD10)/(n-1)i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)根据其它化学物根据其它化学物LD50i 为组矩为组矩n 剂量组数剂量组数i=(lgLD90-lgLD10)/(n-1)i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)求得求得i值后，以低剂量组的对数剂量加上一值后，以低剂量组的对数剂量加上一个个i值，即是高一个剂量组的对数剂量。其值，即是高一个剂量组的对数剂量。其反对数即得出相应的剂量值。反对数即得出相应的剂量值。i 为组矩为组矩n 剂量组数剂量组数化学毒物预试验中化学毒物预试验中5g/kg.bw时，未发现死时，未发现死亡，表示低毒或毒性不大，则一般不需要亡，表示低毒或毒性不大，则一般不需要求出求出LD50食品或功能食品的食品或功能食品的LD50的剂量选择的剂量选择以最大的（即无毒剂量以最大的（即无毒剂量LD50为为15g/kg.bw）一般要设立对照组。一般要设立对照组。中毒体征及发生过程：不同系统的毒物，中毒体征及发生过程：不同系统的毒物，急性毒性作用出现的体征不一样，可初步急性毒性作用出现的体征不一样，可初步确定受试物的急性毒性的靶器官。确定受试物的急性毒性的靶器官。死亡情况和时间死亡情况和时间体重：反映动物中毒后综合性整体变化，体重：反映动物中毒后综合性整体变化，是一个客观和简便的量化指标。每周是一个客观和简便的量化指标。每周12次次病理检查：大体解剖病理检查：大体解剖每天每天2次或多次观察次或多次观察总观察时间一般为总观察时间一般为14天（天（2周）周）速发型死亡：氰化物速发型死亡：氰化物迟发型死亡：羰基镍、毒菇迟发型死亡：羰基镍、毒菇毒性分级毒性分级大鼠大鼠LD50（mg/kg）6只大鼠吸入只大鼠吸入4h，死亡，死亡2-4只的浓度只的浓度（ppm）兔经皮兔经皮LD50（mg/kg）对人可能致死的剂量对人可能致死的剂量g/kg g/60kg剧毒剧毒1105151000分级分级经口经口LD50（mg/kg）经皮经皮LD50（mg/kg）4h吸入吸入LC50（mg/m2）2h剧毒剧毒52050020002000级别级别大鼠口服大鼠口服LD50（mg/kg）相当于人的致死剂量相当于人的致死剂量 mg/kg g/人人极毒极毒150005000005000蓄积毒性作用蓄积作用蓄积作用（accumulation）外源性化学物外源性化学物排出体外排出体外机体机体直接直接代谢物代谢物储存库储存库血浆蛋白血浆蛋白脂肪组织脂肪组织肝脏肝脏肾脏肾脏骨骼骨骼物物质质蓄蓄积积功功能能蓄蓄积积化学毒物的化学毒物的蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础，因此研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化学因此研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化学毒物能否引起潜在慢性毒性的依据之一，也是卫毒物能否引起潜在慢性毒性的依据之一，也是卫生标准制订过程选择安全系数的主要依据。生标准制订过程选择安全系数的主要依据。蓄积毒性试验是研究化学毒物基础毒性的重要内蓄积毒性试验是研究化学毒物基础毒性的重要内容之一，容之一，目的是通过试验求出蓄积系数目的是通过试验求出蓄积系数K K，了解化，了解化学毒物蓄积毒性的强弱，学毒物蓄积毒性的强弱，并为慢性毒性试验及其并为慢性毒性试验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。他有关毒性试验的剂量选择提供参考。将多次染毒使半数动物出现效应（死亡）的蓄积剂将多次染毒使半数动物出现效应（死亡）的蓄积剂量与一次染毒使半数动物出现相同效应（或死亡）量与一次染毒使半数动物出现相同效应（或死亡）的剂量的比值的剂量的比值 K=ED50（n）ED 50（1）K蓄积毒性分级蓄积毒性分级1高度蓄积高度蓄积1明显蓄积明显蓄积3中等蓄积中等蓄积5轻度蓄积轻度蓄积LD50（n）LD 50（1）K值越小，表示化学毒物的蓄积性越大值越小，表示化学毒物的蓄积性越大K=1：化学毒在动物体内全部蓄积或每次染：化学毒在动物体内全部蓄积或每次染毒后毒效应是叠加的。毒后毒效应是叠加的。K5：蓄积毒性极弱：蓄积毒性极弱 一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒毒,先求出先求出LDLD5050，然后选取相同条件的，然后选取相同条件的40只动物随只动物随机分为两组，机分为两组，一为染毒组，一为对照组，一为染毒组，一为对照组，雌雄各雌雄各半。试验组在半。试验组在1 12020l l50LD50LD5050的范围内选定一的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量计算累积总接触剂量LDLD5050(n)(n)，根据公式计算，根据公式计算K K值，然后进行评价。但若接触剂量已累积达到值，然后进行评价。但若接触剂量已累积达到5 5个个LDLD5050剂量，也可终止试验。剂量，也可终止试验。0.1LD50开始，开始，4天为一期递增天为一期递增1.5倍。倍。分五组，分别是阴性对照，分五组，分别是阴性对照，1/20、1/10、1/5、1/2LD50各组均无死亡各组均无死亡-蓄积不明显蓄积不明显1/2组有死亡，其它组无死亡组有死亡，其它组无死亡-弱蓄积性弱蓄积性1/20组无死亡，其它各组有死亡且有剂量反应组无死亡，其它各组有死亡且有剂量反应关系关系-中等蓄积性中等蓄积性1/20组有死亡组有死亡-强蓄积性强蓄积性 生物半减期生物半减期(biological half-life(biological half-life，t t1/21/2)法是用毒物动力学原理描述化学毒物在机法是用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。体内的蓄积作用。化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位时间内吸收该物质的速度以及清除速度位时间内吸收该物质的速度以及清除速度有关。即使化学毒物以相等的时间间距恒有关。即使化学毒物以相等的时间间距恒速地吸收入血液，该物质在一定剂量范围速地吸收入血液，该物质在一定剂量范围内在机体的蓄积量也不呈直线无限地增加，内在机体的蓄积量也不呈直线无限地增加，而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是因为化学物质吸收进入机体的同时体内也因为化学物质吸收进入机体的同时体内也发生着代谢转化及清除的过程。当化学毒发生着代谢转化及清除的过程。当化学毒物的吸收过程与代谢转化物的吸收过程与代谢转化清除的过程达到清除的过程达到平衡时，其蓄积量基本上不再增加。平衡时，其蓄积量基本上不再增加。T 一种化学物以一种化学物以T 相等的时间间矩染毒，其相等的时间间矩染毒，其在体内经过在体内经过6个个T 的接触就可以基本上达的接触就可以基本上达到蓄积的上限。到蓄积的上限。T 短，达到蓄积极限所需要的时间短短，达到蓄积极限所需要的时间短 T 长，达到蓄积极限所需要的时间长长，达到蓄积极限所需要的时间长亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或实验动物连续接触较长时间、较大剂量或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。的外源化合物所引起的毒性效应。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或是指人或实验动物长期（甚至终生）反复接触实验动物长期（甚至终生）反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。研究受试物亚慢性毒性剂量研究受试物亚慢性毒性剂量-反应关系，确反应关系，确定未观察到有害作用的剂量和其观察到有定未观察到有害作用的剂量和其观察到有害作用的最低剂量，提出安全限量参考值。害作用的最低剂量，提出安全限量参考值。观察受试物亚慢性毒性效应谱、毒作用特观察受试物亚慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器官点和毒作用靶器官观察受试物亚慢性毒性作用的可逆性观察受试物亚慢性毒性作用的可逆性为慢性毒理试验的剂量设计和观察指标选为慢性毒理试验的剂量设计和观察指标选择提供依据择提供依据为在其它试验中发现的或未发现的毒作用为在其它试验中发现的或未发现的毒作用提供新的信息，比较不同动物物种毒效应提供新的信息，比较不同动物物种毒效应的差异，为受试物毒性机制和将研究结果的差异，为受试物毒性机制和将研究结果外推到人提供依据。外推到人提供依据。动物选择动物选择品种和品系品种和品系性别、年龄和动物数：两种性别的离乳动性别、年龄和动物数：两种性别的离乳动物（大鼠物（大鼠68w）SPF级动物级动物 （一）实验动物选择（一）实验动物选择 亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验 年龄：年龄：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g数量：数量：小动物小动物20 大动物大动物6性别：性别：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性试验慢性毒性试验年龄：年龄：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初断乳初断乳数量：数量：小动物小动物40 大动物大动物8性别：性别：雌雄各半雌雄各半染毒方式染毒方式剂量选择和分组剂量选择和分组3个剂量组和一个阴性（溶剂）对照组，高个剂量组和一个阴性（溶剂）对照组，高-引起引起明显毒性和少量动物死亡；低明显毒性和少量动物死亡；低-无中毒反应，相当无中毒反应，相当于未观察到有害作用剂量（于未观察到有害作用剂量（NOAEL），设一个中），设一个中间剂量组，最好是相当于观察到有害作用的最低间剂量组，最好是相当于观察到有害作用的最低剂量（剂量（LOAEL）人拟用剂量的人拟用剂量的10、30、100倍，组矩以倍，组矩以310倍为宜，倍为宜，不低于不低于2倍倍观察指标观察指标外观外观生长发育生长发育行为功能行为功能毒性体征毒性体征最终体重最终体重脏器湿重脏器湿重脏脏/体比体比亚慢性、慢性亚慢性、慢性毒性试验过程毒性试验过程活杀解剖活杀解剖器官器官/组织组织大体尸解大体尸解固定固定/染色染色显微镜检查显微镜检查生物体液生物体液血液学血液学血清血清-化学化学-生化学生化学尿分析尿分析生物学标志生物学标志酶酶内源性成分内源性成分胆汁胆汁尿尿脏器系数脏器系数概念：实验动物或人长期（甚至终身）反复接触概念：实验动物或人长期（甚至终身）反复接触外源化学物所产生的毒性效应，长期一般指外源化学物所产生的毒性效应，长期一般指2年年目的目的研究慢性毒性剂量研究慢性毒性剂量-反应关系。确定长期接触造成反应关系。确定长期接触造成有害作用的最低剂量（有害作用的最低剂量（LOAEL）或阈剂量和未造）或阈剂量和未造成有害作用的剂量（成有害作用的剂量（NOEAL），为制定人类接触），为制定人类接触时的安全限量标准，如最高容许浓度（时的安全限量标准，如最高容许浓度（MAC）和）和每日容许摄入量（每日容许摄入量（ADI）以及危险）以及危险度评价提供毒度评价提供毒理学依据。理学依据。观察慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作观察慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器官用靶器官观察慢性毒作用的可逆性观察慢性毒作用的可逆性为毒性机制研究和将毒性结果外推到人提为毒性机制研究和将毒性结果外推到人提供依据。供依据。实验动物：初断乳动物实验动物：初断乳动物染毒时限：工业毒物一般为染毒时限：工业毒物一般为6个月，食品和环境毒个月，食品和环境毒物为物为12年年分组和剂量：分组和剂量：4组，以亚慢性试验的组，以亚慢性试验的LOAELD确确定，定，1/51/2为高剂量组；为高剂量组；1/501/10为中剂量组；为中剂量组；1/100为低剂量。或以为低剂量。或以LD50设计：设计：1/10为高剂量组，为高剂量组，1/100为中剂量组，为中剂量组，1/1000为低剂量组。为低剂量组。观察指标：同亚慢性，组织病理学是非常重要的观察指标：同亚慢性，组织病理学是非常重要的和必不可少的，最客观最有说服力的指标。和必不可少的，最客观最有说服力的指标。对生物膜的损害：膜通透性、流动性、和膜表面对生物膜的损害：膜通透性、流动性、和膜表面电荷电荷 化学毒物对细胞钙稳态的影响：破坏正常生命活化学毒物对细胞钙稳态的影响：破坏正常生命活动所需的由第一信使刺激而产生的短暂的钙瞬变，动所需的由第一信使刺激而产生的短暂的钙瞬变，危及细胞器和功能和骨架的结构，最终激活不可危及细胞器和功能和骨架的结构，最终激活不可逆的细胞分解代谢的过程逆的细胞分解代谢的过程 机体内生物大分子的氧化损伤：化学毒物在机体机体内生物大分子的氧化损伤：化学毒物在机体内代谢（主要是氧化还原反应）产生自由基内代谢（主要是氧化还原反应）产生自由基 脂质过氧化损伤脂质过氧化损伤：细胞器和细胞膜结构破坏：细胞器和细胞膜结构破坏 引起细胞毒性引起细胞毒性 对对DNA的影响（氧化和加合）的影响（氧化和加合）LDL的氧化修饰的氧化修饰 蛋白质氧化损伤蛋白质氧化损伤：引起蛋白质凝集、交联、降解、：引起蛋白质凝集、交联、降解、断裂，出现生理功能受损断裂，出现生理功能受损 核酸的氧化损伤核酸的氧化损伤：DNA断裂，缺失突变断裂，缺失突变 启动修复系统，如修复功能受启动修复系统，如修复功能受 损，引起突变损，引起突变 活化癌基因活化癌基因