烟草还原糖测定

烟草还原糖测定1、工作曲线准备:分别移取葡萄糖标准溶液（lmg/ml）、蒸馏水、DNS试剂于25ml比色管，按照下表。葡萄糖量ml00.20.40.60.81.01.2水ml21.81.61.41.210.8DNS试剂量ml1.51.51.51.51.51.51.5吸光度值空白，参比摇匀混合，小滤纸片隔住，加盖比色管塞后，用橡皮筋捆住一起放置100沸水浴中水浴加热6min；2、样品显色：移取烟叶的甲醇提取液0.5ml于25ml比色管中， 加入1.5ml蒸馏水，再加入DNS试剂1.5ml，摇匀混合，小滤纸片 隔住，加盖比色管塞后，用橡皮筋捆住一起放置100r沸水浴中水 浴加热6min；3、吸光度测定：将水浴加热后的比色管取出流水冷却后，加蒸馏 水定容至刻度，测定540nm下的吸光度。绘制工作曲线，测定待 测液吸光度，代入工作曲线方程，计算出0.5ml甲醇提取液中葡萄 糖的当量值m。4、还原糖浓度计算公式：还原糖含重=】：，25为提取烟jifXIOOO叶所有甲醇体积（ml）； M为烟叶质量（g）。烟叶总糖测定工作曲线绘制跟还原糖测定过程一样，水溶性总糖测定的原理为，水 溶性总糖在0.8-1M盐酸中水浴加热水解为单糖，再测定其还原糖含 量。1、总糖的水解：移取0.5ml甲醇提取液于25ml比色管中，加入 0.3ml盐酸（6M），再加入0.8ml蒸馏水，摇匀混合，小滤纸片隔 住，加盖比色管塞后，用橡皮筋捆住一起放置100r沸水浴中水浴 加热30min；冷却后加入0.9mlNaOH溶液（2M）中和至pH中性。2、测定水解后样品的还原糖浓度，方法同上（加入1.5mlDNS试 剂，摇匀混合，小滤纸片隔住，加盖比色管塞后，用橡皮筋捆住 一起放置100r沸水浴中水浴加热6min，冷却后定容至刻度，测 定吸光度值）；3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂将 6.3g DNS 和 262mL 2 mol-L-1 NaOH 溶液，加到 500mL 含有 185g 酒石酸 钾钠的热水溶液中，再加5g结品酚5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水 定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。