临床检验方法评价与衡量

临床检验方法学评价目前，临床实验室中所使用的检验方法，多为常规分析方法，一 般使用商品试剂，基本上可以满足临床检验的要求。由于作为常规分 析方法的商品试剂种类繁多，其检验结果的质量也不相同，因此，临 床实验室在建立新的检验方法时，应对该方法的基本性能进行评价， 以掌握方法的特征，判断其能否满足使用要求。在选择方法并对其进 行评价时，可主要考虑以下几个方面：检验结果的可溯源性检验结果的准确性，是临床医生对疾病进行诊断和治疗的重要依 据。在临床实验室中如何确保检验结果的准确， 是每个检验人员必须 关心的问题。通常，在检验过程中使用可溯源性校准品是保证检验结 果准确性的前提，而参加室间质评价活动，可以发现实验室结果准确 性的偏倚。检验方法学分类包括：决定性方法(definitive method ): 经详尽研究尚未发现 不 准确度或不确定性原因的方法；参考方法(referenee method)： 经详尽研究证实其 不准确度与不精密 度可以忽略的方法；常规方法(routine method):可满足临床或 其他目的需要的日常使用的方法。标准物质又称参考物质(refere nee material )，是一类充分均 匀，并具有一个(或多个)确定的特性值的材料或物质，用以校准仪 器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值。标准物质的定值结果一般表示为：标准值士总不确定度。“标准物质证书是介绍标准物 质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质(certified refere nee material,CRM )，其特性值由建立了溯源性的程序确定，使可溯源至准确复 现的表示该特性值的计量单位，且每个标准值都附有给定置信水平的 不确定度。一级标准物质( primary referenee material ):稳定、均 一, 采用高度准确、可靠的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为二 级标准物质定值。在我国，一级标准物质是测量准确度达到国最高水 平的有证标准物质，由国家技术监督局批准、颁布并授权生产。如： 人血清无机成分分析标准物质(GBW09135 )和血清胆固醇标准物 质(GBW 09138 )。二级标准物质( sec on dary refere nee material):用一级标准物 质校准，参考方法定值。女口：红细胞微粒标准物质 一GBW ( E ) 090001、胆红素标准物质 一GBW ( E )090002、氰化高铁血红蛋白溶液标准物质 一GBW ( E )090004和纯化血红蛋白标准物质 一GBW ( E )090011。校准物(calibrator )：用二级标准物质校准，常规方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。质控物(control material ):具有与检测过程相适应的特性， 其成份与检测样本的基质相同或相似。应使用充分均一和稳定的质 控物，其瓶间变异 必须小于监测系统预期的变异，其常规检测应有 助于确认报告围。为了保证质 控方法 对系统性能提供独立的评价， 必须将 质控物与 校准物区分开来。分析系统与可溯源性：分析系统是指检验方法所涉及的仪器、试 剂、参数和校准品，其检验结果经一系列合理实验的验证能够满足厂 家声明的要求，其量值能够溯源到高级标准物质。在实际工作中，实 验室使用分析系统进行检验，其检验结果具有可溯源性。改变分析系 统中的任一因素，其检验结果的可溯源性将被打断。 如果必须改变分 析系统中的某种因素，实验室在应用该方法前，则应对改变后的系统 作出 适当的性能评价，以确定方法准确性的偏倚和检验结果的可溯 源性。精密度评价1、精密度的容：精密度通常用 不 精密度表示，精密度评价的目的 是评价检测设备的总不精密度，是设备在一定时间的变异性。许多变 异源可在不同程度上影响设备的精密度，通常在进行精密度评价时要 充分考虑所有影响总不精密度的来源，但不必去评价每个来源的相对 大小。用于描述与时间相关的 不 精密度的容包括：批、批间、日 和日间 不 精密度。其中，批 不 精密度和总不精密度的容最为重2、一般实验要求：为减少对结果的影响因素，全部实验过程中应使 用单一批号的试剂和校准物。实验样本可采用稳定化、蛋白基质、可 模拟临床样本特性的产品，必要时，可采用稳定化的混合冷冻血清。选择样本浓度时应考虑医学决定水平，推荐使用2个或以上浓度的样本。3、实验程序：精密度评价实验应在操作者完全熟悉实验过程和评价 方案以后（通常需要5天时间）进行。每天分2批测定样本，各批 实验间至少间隔2小时。每批测定2个浓度样本，每个样本重复测 定2次。按表1记录实验结果。4、结果计算（略）测定线性围评价线性是分析方法的一个特征，不同于准确度和精密度。线性围（Linear Range ）是指系统最终的输出值（浓度或活性）与被分析 物的浓度或活性成比例的围。线性围的测量即测定浓度曲线接近直线 的程度，它反映整个系统的输出特性 。线性检验系统反应，包括校 准、线性化技术、系数和仪器反应。一般要求： 执行分析过程的实验人员必须掌握仪器操作和维护 程序、样本准备方法和校准。对较简单的设备需要5天或更少的时间，对较复杂的多通道设备需要 5天或更长的时间。在完成仪器熟 悉过程后开始实验并收集数据。实验样本： 线性实验应使用与病人样本相似的样本或注明样本的基质类型，最少使用4个浓度水平，推荐5个水平。高值样本应 高于线性上限30%，低值样本应低 于线性低限。线性实验可使用 的样本包括：混合病人血清（理想的样本基质）、加入待测物的混合人血清（加入品在没有干扰物存在时不需高纯度）、对特殊材料透析过的混合人血清（用于降低分析物浓度，如：透析、热处 理、层析）、对盐水透析过的 混合血清（在线性实验中使用此类 样本可掩盖不同的基质效应）。商品 质控物或 校准物（此类样本 由于不是正常的生理形式，可掩盖实际的线性结果）、水溶液（一般无基质效应），等。实验程序： 全部实验和数据米集应在同一工作日完成。分析序 列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。每个浓度 样本重复测定4次。记录测定结果。结果分析：观察结果有无明显的数据错误，若有明显异常时，应判断是否为离群点。对于特定浓度Yi值的离群点进行检验时，需 将其4个重复值从大到小排列（Yi -1到Yi -4 ）。计算极差D = Y i-1 - Y i-4。若 Y i-1 可能是离群点，计算：D 1 = （ Y i-1 i-2 ） / D。若Y i-4可能是离群点，计算：D 4 = （ Y i-3 i-4 ） / D。 计算结果（D 1或D 4 ）如果大于 0.765 （0.05）或0.889 （0.01）, 则该点判为离群点。全部数据中的 离群点如果有2点或以上，则应 保留全部数据或重新进行实验。以分析物浓度为X轴，反应值或仪器输出值为 Y轴，绘制X-Y线性图。目测线性和进行统计学分析，判断是否符合要求。对于线性结果的分析，应当注意统计学标准和临床可接受限不 同；应慎用方法学线性围从 0开始；有临床意义的浓度应在线性评 价中，如 最低线性浓度、医学决定水平及最高线性浓度。方法学比较临床实验室中使用的检验方法，随着科学技术的发展不断更新， 在引进新方法前或用一种方法替代另一种方法时为保证临床实验室 检验结果的连续性，通常要进行偏差分析，以比较不同的分析方法在 测定同一分析项目时结果的差异。1、样本要求：用于方法学对比实验的样本，应 来源于健康人或患 者，无明显干扰因素，并应尽量避免使用贮存样本。全部 样本 在 医 学决定水平围均匀分布，样本至少 40例，增加可提高可信性。2、对比方法： 可采用厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方 法。对比方法应具有好的精密度，没有已知的干扰物，与评价方法单 位相同，相对国家标准或参考方法的偏差为已知。3、实验程序：a）操作者应有足够的时间熟悉仪器操作 ，保养程序及 评价方案。 在全部实验过程中，都必须建立适当的质量控制程序。b) 进行方法学对比实验，每天应测定 8份样本，每份样本都用评价 方法和对比方法进行双份测定，至少连续测定5天，共40份样本。 测定时先对样本排序，再按顺序 1至8测定第一次，顺序8至1 测定第二次。按表3收集实验数据c) 结果绘图：实验结果可绘制4图，第一图是Y i对X i的均值散 点图，第二图为 Y j对X i散点图，第三为(Y i -X i )对X i偏 差图，第四为(Y ij -X ij )对X i的偏差图。常用的与方法 学评价 有关的文件如下：EP5-A :临床化学设备操作精密度评价核准指南(Evaluation ofPrecisi on Performa nee of Cli nical Chemistry Devices; ApprovedGuideline)用于 临床化学设备操作精密度评价的实验设计及如何与 生产厂声明的精密度进行比较。EP6-P2 :定量分析方法的线性评价：统计方法，提议指南第二版(Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods: A Statistical Approach; Proposed Guideli ne Second Editi on)： 指南可用 于在法评价过程中检验方法线性、作为常规质量保证的一部分进行线 性检查及验证厂家声明的线性围。EP7-P : 临床化学实验干扰提议指南(In terfere nee Testi ng inClinical Chemistry; Proposed Guideline )提供背景信息和 监定 程序， 用于干扰物对检验结果影响的定性。EP9-A :用病人样本进行方法 学比较 和偏倚评估，核准批南( Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline )。主要用于检验两种临床方法或设备间的偏倚， 和使用病人样本进行方法比较的实验设计及数据分析。EP10-A :定量临床实验室方法的初步评价，核准指南(PreliminaryEvaluati on of Quan titative Cli nical Laboratory Methods; ApprovedGuideline ):提供了用于分析方法和设备操作的初步评价的实验设计和数据分析。EP11-P :用于体外诊断检验说明的统一描述，提议指南(UniformDescription of Claims For In Vitro Diagnostic Tests; ProposedGuideline)EP12-P :用于定性实验评价的用户协议，提议指南(User Protocolfor Evaluatio n of Qualitative Test Performa nee; Proposed Guideli ne)EP13-R :头验至统计一标准差，报告(Laboratory Statistics Stan dard Deviati on; A Report)EP14-A :基质效应的评价，核准指南(Evaluation of Matrix Effects;Approved Guideline )EP15-A:精密度和准确度性能的应用，核准指南(UserDem on stratio n of Performa nee for Precisi on and Accuracy; Approved Guideline )EP18-P:检验单位使用的质量管理，提议指南(Quality Management for Unit-Use Testing; Proposed Guideline)EP21-P (NEW):临床实验方法 总分析 误差的评估，提议指南(Estimation of Total Analytical Error for Clinical Laboratory Methods;Proposed Guideli ne)参考文献1中华人民国计量技术规，JJG1006 942 EP 5 A :Evaluati on of Precisio n Performa nce of Cli nical ChemistryDevices; Approved Guideline , NCCLS3 EP-62 :Evaluation of the Linearity of Quantitative AnalyticalMethods: A Statistical Approach; Proposed Guideli ne Second Editi on, NCCLS4 EP7 P Interference Testing in Clinical Chemistry; ProposedGuideline , NCCLS5 EP 9 A : Method Comparison and Bias Estimation Using PatientSamples; Approved Guideli ne , NCCLS6 EP 10 A :Method Comparison and Bias Estimation Using PatientSamples; Approved Guideli ne , NCCLS7 EP11-P :Uniform Description of Claims For In Vitro DiagnosticTests; Proposed Guideli ne, NCCLS8 EP12-P :User Protocol for Evaluatio n of Qualitative TestPerforma nee; Proposed Guideli ne9 EP13-R :Laboratory Statistics Stan dard Deviati on; A Report ,NCCLS10 EP14-A :Evaluation of Matrix Effects; Approved Guideline ,NCCLS11 EP15-A :User Dem on stratio n of Performa nee for Precisio n andAccuracy; Approved Guideline , NCCLS12 EP18-P : Quality Ma nageme nt for Un it-Use Test ing; ProposedGuideline , NCCLS 13 EP21-P ( New ) : Estimation of Total Analytical Error for ClinicalLaboratory Methods; Proposed Guideli ne, NCCLS .