资源描述
C值：一种生物单倍体基因组DNA的总量。C值矛盾：真核生物中DNA的含量与已知功能基因所占的比例不协调的现象。核小体（由H2A、H2B、H3、H4各两个分子组成的八聚体和大约200bpDNA组成的）核小体的装配：两分子的H3和两分子的H4先形成四聚体，然后由H2A和H2B形成的异二聚体在该四 聚体的两侧分别结合而形成八聚体。长146bp的DNA按左手螺旋盘绕在八聚体上1.8周，形 成核小体的核心颗粒。核心颗粒两端的DNA各有11bp与H1结合，形成完整的核小体。SD（Shine-Dalgarno）序列:原核生物mRNA 5端起始密码子上游812个核苷酸处富含嘌呤的保守区域(5-AGGAGGU-3)，可与核糖体30S小亚基上16S rRNA 3端的富嘧啶区互补配对，促使核糖体结合到mRNA上，有利于翻译的起始。该mRNA上的序列称SD序列。核定位序列（NLS）:内部序列-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys或任何五个连续的带正电荷氨基酸残基，能导致含该序列的蛋白被运进核内，这样的序列称为NLS。(NLS可以位于核蛋白的任何部位）-10区：Pribnow box，由5个核苷酸共同组成，是RNA聚合酶的紧密结合位点。该序列中心位于转录起始点上游10bp处。(TATAA）Hogness区：真核生物基因中位于-25 -30bp处的共同序列TATA AA，也称TATA区。（作用：使转录精确起始）应答元件：能与某个（类）专一蛋白因子结合,从而控制基因特异表达的DNA上游序列。顺式作用元件（cis-acting element）: 不转变为其他形式（RNA或蛋白质）而只以DNA形式在原来位置起作用的DNA序列。起作用的过程称顺式作用。诱导(induction)：通过小分子诱导物参与, 使阻抑物失活或活化激活剂来实现对基因或操纵子表达的调控 。阻遏(repression): 通过小分子辅阻遏物参与,使激活剂失活或活化阻抑物来实现基因或操信号肽(signal peptide)：绝大多数越膜蛋白的N端都具有长度大约在13-36个残基之间的以疏水氨基酸为主的N端信号序列或称信号肽。A激酶：能把ATP分子上末端磷酸基团加到某个特定蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基上的依赖于cAMP的蛋白激酶。C激酶：依赖于Ca2的蛋白激酶，具有一个催化结构域和调节结构域，主要是实施对丝氨酸、苏氨酸的磷酸化。RFLP：是指基因型之间限制性片段长度的差异，这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变所引起的。RFLP技术包括以下基本步骤：DNA提取用限制性内切酶切DNA用凝胶电泳分开DNA片段把DNA片段转移到滤膜上利用放射线标记的探针杂交显示特定的片段和结果分析。RAPD：是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。其以基因组为模板， 以单个人工合成的随机多态核苷酸序列(通常为10个碱基对)为引物，在热稳定的DNA 聚合酶(Taq酶)作用下，进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫外透视仪上检测多态性。扩增产物的多态性反映了基因组的多态性。基因组文库：是将某种生物细胞内整个基因组DNA切成适当长度的片段，连接在载体上，转化到宿主细胞中而构建的克隆载体。cDNA文库：是指将一种生物RNA经反转录产生双链cDNA，以cDNA构建的克隆群体。1、基因的分类？从功能上：结构基因（编码酶，结构蛋白，tRNA，rRNA等非调节物）和调节基因（产物（RNA，蛋白质）具有调节其他基因表达功能的一类基因 ）从细胞分化：奢侈基因（与分化细胞的特殊形状有直接关系的基因群） 和管家基因（是维持细胞最低限度的功能所不可少的基因） 从结构上：重复基因（在染色体基因组中多次重复） 和非重复基因（一个染色体组中只存在一个或少数几个的基因）2、DNA复制的几种形式？（1）线性DNA双链的复制（先在ori处形成复制眼，从复制眼开始可以单向或双向复制，真核生物都是多复制眼起始的双向复制）（2）型复制（环形DNA大多采用型复制，如E.coli。特点：从原点ori开始，通常采用双向等速复制，不断扩大复制泡，形成环）（3）滚环型复制（rolling circle）：某些环形的病毒DNA，如x174、噬菌体都是以这种方式复制。这是一种单向复制类型（4）D环复制 （D-loop）：这种复制在环状DNA的特定位点开始。线粒体、叶绿体的DNA复制能以D-环模型进行。3、DnaA蛋白和DnaB蛋白的功能？大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9 bp保守序列相结合。在Hu蛋白和ATP的共同作用下，DnaA复制起始复合物使3x13 bp直接重复序列变形，形成开链。DnaB（解链酶）六体分别与ssDNA相结合（需DnaC帮助）进一步解开DNA双链。4、如何保证DNA复制的准确性？半保留序列、引物的使用（RNA引物）、4种dNTP的浓度一致、错配修复及时修复、3到5外切酶的校正功能、严格的碱基互补配对原则、RNA聚合酶对后随连5端的校正。5、真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控？A细胞生活周期水平调控（限制点调控）即决定细胞停留在G1期还是进入S期B染色体水平调控即决定不同染色体或同一染色体不同部位的复制子按一定顺序在S期起始复制C复制子水平调控即决定复制的起始与否6、DNA修复的特点？A、错配修复： 依据：Dam甲基化酶使位于5-GATC序列中腺苷酸的N6位甲基化原则：保存母链，修正子链B、碱基切除修复：形成AP位点，切除突变的碱基C、核苷酸切除修复：当DNA链上相应位置的核苷酸发生损伤，导致双链间无法形成氢键时,由核苷酸切除修复系统负责进行修复。D、DNA直接修复：修复嘧啶二体或甲基化DNA 7、什么是转座子？可分为哪些种类？DNA的转座，或称移位，是由可移位因子介导的遗传物质重排现象。转座子（transposon,Tn）是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位。转座子分为两大类：插入序列（IS）和复合型转座子。A 插入序列 插入序列是最简单的转座子，它不含有任何宿主基因。它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分。一个细菌细胞常带有少于10个序列。转座子常常被定为到特定的基因中，造成该基因突变。B 复合型转座子 复合型转座子是一类带有某些抗药性基因（或其他宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列，表明IS序列插入到某个功能基因两端时就可能产生复合转座子。一旦形成复合转座子，IS序列就不能再单独移动，因为它们的功能被修饰了，只能作为复合体移动。大部分情况下，这些转座子的转座能力是由IS序列决定和调节的。 除了末端带有IS序列的复合转座子外，还存在一些没有IS序列的，体积庞大的转座子（5000bp以上）TnA家族。8、TnA转座子？A无IS序列、体积庞大（5000bp）B编码-内酰胺酶；转座酶、解离酶转座所必须C38bp的倒置重复序列9、简述与因子在转录过程中的作用？前者的作用是负责模板链的选择和转录的起始，它是酶的别构效应物是酶专一性识别模板上的启动子。后者是一个由6个相同亚基组成的六聚体，它的相对分子质量为275000，它具有NTP的水解促使新生RNA链从三元转录复合物种解离出来，从而终止转录。10、终止（是基因得以高效表达的关键之一）：1) 不依赖于因子的终止：由“回环”和“茎状”结构组成的“发卡” 结构，在终止子序列末尾有大约6个U组成的序列 2) 依赖于因子的终止：因子是一个Mr为2.0105的六聚体蛋白，它能水解各种核苷三磷酸，实际上是一种NTP酶。由于催化了NTP的水解，因子能促使新生的RNA链从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。DNA修复(DNA repairing)：是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能。11、RNA聚合酶基础转录因子的功能（TBP/TFIID/TFIIF/TFIIH)？TBP与启动子上TATA区结合TFIID与各种调控因子相互作用TFIIF结合RNA聚合酶并在TFB帮助下阻止聚合酶与非特异性DNA序列结合TFIIH在启动区解开ds DNA,使RNA聚合酶磷酸化，接纳核苷酸切除修复系统 12、转录的真实性保证有哪些？取决于有特异的转录起始位点，转录起始后按照碱基互补配对原则准确地转录模板DNA序列及具有特异的终止部位。13、什么是RNA编辑？其生物学意义是什么？及其形式？答：RNA 编辑是指某些RNA特别是mRNA前体经过插入、删除或取代一些核苷酸残疾等操作，导致DNA所编码的遗传信息的改变，使得经过RNA编辑的mRNA序列发生了不同于模版的DAN的变化。生物学意义：1，校正作用，有些基因在突变的途中丢失的遗传信息可能通过RNA的编辑得以恢复；2，调控翻译，通过编辑可以构建或去除其实密码子和终止密码子，是基因表达调控的一种方式；3，扩充遗传信息，能使基因产物获得心得结构核功能，有利于生物的进化。形式：单碱基突变、尿甘酸缺失和添加。14、链霉素与氯霉素能够抑制蛋白质的合成机理？链霉素这类抗生素属于糖甙类，它们主要抑制革兰氏阴性细菌蛋白质合成的三个阶段：起始复合物的形成，使氨酰tRNA从复合物中脱落；在肽链延伸阶段，使氨酰tRNA与mRNA错配；在终止阶段，阻碍终止因子与核蛋白体结合，使已合成的多肽链无法释放，而且还抑制70S核糖体大、小亚基的分离。氯霉素属于广谱抗生素。氯霉素与核糖体上的A位紧密结合，因此阻碍氨酰tRNA进入A位，抑制转肽酶活性，使肽链延伸受到影响，菌体蛋白质不能合成，影响细胞生长。15、限制线内切酶的命名原则？以Hind III为例，H代表宿主微生物的属名的第一个字母，in 为种名的头两个字母，d 代表该菌菌株，III表示该菌株属于第三个限制-修饰系统的酶17、PCR技术的特点: 1）操作简便；2）省时；3）灵敏度高；4）特异性强；5）模板材料易获得（法医学上的血斑、精斑、毛发等；还可从考古样品制备DNA模板） PCR与细胞内DNA复制的异同点有哪些？同: 底物、酶、模板、引物、Mg2+ 、机制、DNA合成方向异: 半不连续 / 连续；不完全 / 完全解开成单链; 解链酶/ 高温变性；RNA / DNA引物;温度一致 / 温度循环.17、PCR与细胞内DNA复制的异同：相同：都从5-3端进行合成，都需Mg离子，都按碱基互补配对原则进行复制。不同：1）PCR两条链都是连续复制，细胞内DNA是半不连续复制2）PCR技术DNA双链完全解开成单链，后者DNA链不完全解开成单链3）前者使用的Taq酶耐高温，后者的解链酶需在温和条件下起作用4）前者使用的引物是DNA片段，后者的引物是RNA片段5）PCR过程中是温度循环变化，后者复制时温度一致。18、cDNA文库、基因组文库构建步骤的构建？cDNA文库的构建：通过一系列酶催化作用，使总poly(A)mRNA转变成双链cDNA群体并插入到适当的载体分子上，转化大肠杆菌寄主细胞，构成包含所有基因编码序列的cDNA基因文库。基因组文库构建步骤：制备大小合适的随机DNA片段，在体外将这些DNA片段与适当的载体相连成重组子，转化到大肠杆菌或其他受体细胞中，从转化子克隆群中筛选出含有靶基因的克隆20、乳糖操纵子的作用机制：1)乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动子P和一个调节基因I。2）阻遏蛋白的负调节性：没有乳糖存在时I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成乳糖的三种酶。所以乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。3）CAP的正调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。4）协调调节：负调节和正调节两种机制，互相协调互相制约。21、Trp操纵子的弱化机制？前导肽基因中有两个相邻的色氨酸密码子，前导肽的翻译对tRNATrp的浓度敏感。当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRNATrp也就少，这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区（或停留在两个相邻的trp密码子处），这时的前导区结构是2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，所以转录可继续进行，直到将trp操纵子中的结构基因全部转录。而当培养基中色氨酸浓度高时，核糖体科顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前，核糖体就到达2区，这样使2-3不能配对，3-4区可以自由配对形成茎-环状终止子结构，转录停止，trp操纵子中的结构基因被关闭而不再合成色氨酸。22、DNA甲基化的重要生物学意义？DNA甲基化可稳定地抑制转录，缺乏DNA甲基化酶时抑制消失，许多应被抑制的基因（如原病毒基因、原癌基因或其它潜在的有害序列）被转录，影响正常的发育进程。DNA甲基化对转录的抑制直接参与发育调控。随个体发育或细胞分化，将需要保持“沉默”的基因甲基化，需要转录的基因去甲基化。
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