培养基配方及配制方法

培养基配方1 斜面菌种保存培养基 培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸，纱布过滤， 滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热 纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121C 灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。 太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的34 倍加水， 搅拌均匀后，37C左右浸泡1小时，然后缓缓加温至5563C（在升 温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温46小时（用摩尔/升碘液测 定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次 取过滤后的清液，力琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大 小而定），121C灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备 用。2 基菌落总数检测 平板计数琼脂培养基将?胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121C下灭菌15min， 取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。3志贺氏菌检测GN增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：lg,甘露醇：2g,柠檬酸钠：5g, 去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g,蒸 馏水 1000ml。制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为，分装， 在115C高压灭菌15min。HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱 20g，氯化钠5g，琼脂1820g，蒸馏水1000ml0，%溴麝香草酚蓝溶 液 16ml，Andrade 指示剂 20ml.，甲液 20ml，乙液 20ml。制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加 入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH， 再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至5055C，倾注浇平板。 注1：此培养基不能高温灭菌。注2：甲液的配置：硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。注3：乙液的配置：去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。注4： Andrade指示剂的配置：酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。 将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪 色不全，再加氢氧化钠溶液1 2ml。SS琼脂3.3.1 基础培养基：成分：牛肉膏：5g,胨：5g,三号胆盐：3.5g,琼脂：17g，蒸馏水： 1000ml。制法：将牛肉膏蛋白胨，三号胆盐加入U400ml蒸馏水中，将琼脂加 入到600ml蒸馏水中，煮沸使其溶解，然后液混合，于121C下灭菌 15min，保存备用。3.3.2 完全培养基成分：基础培养基：1000ml，乳糖：10g，柠檬酸钠：8.5g，硫代硫 酸钠：8.5g，10%柠檬酸铁溶液：10ml，1%中性红溶液:，煌绿溶液：。 制法：加热融化基础培养基，按比例加入处染料以外的所有成分，搅 拌均匀，调，加入中性红溶液和煌绿溶液，混合均匀后浇平板。注1：配制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱48h内使用。 注2：煌绿溶液配好后，应在10日内使用。注3：可以购买SS琼脂的干燥培养基。麦康凯琼脂成分：蛋白胨：17g，胨：3g，猪胆盐（牛、羊胆盐）：5g，氯化钠： 5g，琼脂：17g，蒸馏水：1000ml，乳糖：10g，%结晶紫水溶液：10ml，% 中性红水溶液：5ml。制法：将蛋白胨、胨、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调， 将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，将两液混合均匀，于121C 下灭菌 15min 备用。临用时加热融化琼脂，趁热加入乳糖，等冷却到5055C时，加入结晶紫和中性红水溶液，搅拌均匀后浇平板。 注：结晶紫和中性红水溶液配好后，须经高压灭菌。伊红美蓝琼脂（EMB）成分：蛋白胨：10g，乳糖：10g，磷酸氢二钾：2g，琼脂17g, 2%伊红Y溶液：20ml，%美蓝溶液：10ml，蒸馏水1000ml，。制法：将蛋白胨、磷酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中，调pH,于121C下 灭菌 15min 备用。临用时加热融化琼脂，并加入乳糖，冷却至5055C时加入伊红和美 蓝溶液，混合均匀后浇平板。三精铁琼脂成分：蛋白胨：20g，牛肉膏：5g，乳糖：10g，蔗糖：10g，葡萄糖: 1g，氯化钠：5g，六水硫酸亚铁铵：0.2g，硫代硫酸钠：0.2g，琼脂: 12g，酚红：0.025g，蒸馏水：1000ml，。制法：将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中，调pH，然 后加入琼脂，加热溶解，加入%酚红水溶液，摇匀，分装时量多一点 于121C下灭菌15min，搁高层斜面备用。葡萄糖半固体发酵管成分：蛋白胨：1g，牛肉膏：0.3g，氯化钠：0.5g，%溴甲酚紫酒精 溶液：，葡萄糖：1g，琼脂：0.3g，蒸馏水：100ml，。制法：将蛋白胨，牛肉膏，氯化钠加入水中，调 pH 后，加入琼脂， 煮沸溶解，再加入指示剂和葡萄糖。分装，于121C下灭菌15min, 备用。半固体管成分：蛋白胨：1g，牛肉膏：0.3g，氯化钠：0.5g，琼脂：0.4g， 蒸馏水：100ml，。制法：将上述成分溶于水中，加热煮沸，并调pH后分装小试管，121C 高压灭菌15min，直立凝固备用。尿素琼脂成分：蛋白胨：1g，氯化钠：5g，葡萄糖1g，磷酸二氢钾：2g，%酚 红溶液：3ml，琼脂：20g，蒸馏水：1000ml，20%尿素：100ml，土。 制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，调pH，加入琼脂后加热使 其溶化并分装小瓶，121C高压灭菌15min，冷却至5055C后，加入 经过滤灭菌的尿素溶液，最终尿素浓度为2%，最终的pH应为土。 分装于灭菌试管内，搁斜面备用。西蒙氏柠檬酸盐琼脂成分：氯化钠：5g，七水硫酸镁：0.2g，磷酸二氢铵：1g，磷酸氢二 甲：1g，柠檬酸钠：5g，琼脂：20g，蒸馏水：1000ml，%溴麝香草酚 蓝溶液：40ml，。制法：先将盐类溶解于水中，调pH，再加琼脂，加热溶化，然后加 入指示剂，混合均匀后分装试管，121C下灭菌15min，搁成斜面。实验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于36C 土1C培养4天，每天 观察结果，阳性者斜面上有菌落生长。培养基由绿色转为蓝色。氰化钾（KCN）培养基成分：蛋白胨：10g，氯化钠：5g,磷酸二氢钾：0.225g，磷酸氢二 钠：5.64g，蒸馏水：1000ml，%氰化钾溶液：20ml,制法：将除氰化钾以外的成分配好分装，121C灭菌15min,放在冰 箱内使其充分冷却，每 100ml 培养基加入%氰化钾溶液（最后浓度为 1:10000），分装于12mmX100mm灭菌试管，每管约4ml，立刻用橡皮 塞塞紧，放在4C冰箱内，至少可保存两个月，同时将不加氰化钾的 培养基作为对照培养基，分装备用。试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成作为稀释菌液，挑取1 环接种于氰化钾培养基，另外挑取 1 环接种于对照培养基，在 36C 土1C下培养1 2天，观察结果，如有细菌生长，则为阳性，经2天 后不生长则为阴性。注：氰化钾是剧毒物质，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天 分装培养基应在冰箱内进行，实验失败的主要原因是封口不严，氰化 钾逐渐分解，变成氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长， 造成假阳性现象。氨基酸脱羧酶实验培养基成分：蛋白胨：5g，酵母浸膏：3g，葡萄糖：1g，蒸馏水：1000ml，% 溴甲酚紫乙醇溶液：1ml，L-氨基酸或DL-氨基酸：0.5g或1g/100ml， 制法：除氨基酸以外的所有成分加热溶解后，分装每瓶100ml，分别 加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按%加入，DL- 氨基酸按 1%加入。再调，对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管，上面滴加一层液体石蜡。115C高压灭菌10min。 实验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36C 土1C下培养1824h,观察结果，氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。 阴性者因为碱性物质产生，但因葡萄糖产酸而是培养基变成黄色，对 照管应为黄色。蛋白胨水（靛基质试验用）成分：蛋白胨或胰蛋白胨：20g，氯化钠：5g，蒸馏水：1000ml， 制法：将上述成飞混合均匀，分装小管，121C灭菌15min。 靛基质试剂：柯凡克试剂：将 5g 对二氨基甲醛溶于 75ml 戊醇中，然后慢慢加入浓 盐酸 25ml。欧-波试剂：将lg对二氨基苯甲醛溶于90ml95%的乙醇内，然后慢慢 加入浓盐酸 20ml。实验方法：挑取少量接种物接种，在36C 土1C下培养1 2天，必要 时可培养 45 天，加入柯凡克试剂约，轻摇试管，阳性者试剂层呈深 红色，或加入欧-波试剂，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者 接触面上呈玫瑰红色。注：蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后应用已知菌种实 验。糖发酵管成分：牛肉膏：5g，蛋白胨：10g，氯化钠：3g，十二水磷酸氢二钠： 2g，%溴麝香草酚蓝溶液：12ml，蒸馏水：1000ml，。葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121C灭菌15min。其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100ml,121C灭 菌15min,另将各种糖类配好10%溶液，一同灭菌，将5ml糖溶液加 入到100ml液体培养基中，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。实验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36C 土1C, 一般 观察23天，迟缓反应需观察1430天。5乳糖发酵管成分：蛋白胨：0.2g，氯化钠：0.5g，乳糖：5g，2%溴麝香草酚蓝水溶液：，蒸馏水：100ml,。制法：除乳糖以外的各成分溶解于50ml蒸馏水内，调pH，将乳糖溶 解于另外50ml蒸馏水中，分别于121C灭菌15min,将两者混合，以 无菌操作分装到小试管中。注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1天内发酵。