细胞生物学：实验5 细胞的吞噬活动-2015

实验五实验五细胞的吞噬活动细胞的吞噬活动实验目的 掌握小鼠腹腔注射和颈椎脱臼处死方法。 熟悉巨噬细胞吞噬活动的基本过程。 了解诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞的原理。实验原理吞噬细胞Phagocyte：单核细胞Monocyte 巨噬细胞macrophage 粒细胞Granulocytes 白细胞是机体防御系统中能游走的单位，它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。 单核细胞是血液中最大的血细胞。目前认为它是巨噬细胞的前身，单核细胞在骨髓形成后会进入血液，通过毛细血管进入肝、脾、淋巴结及结缔组织中进一步发育、分化形成巨噬细胞。 巨噬细胞的吞噬过程:a. 在接触到病原体或异物时，细胞膜凹陷伸出伪足包围异物，并发生胞吞作用形成吞噬泡 b. 继而巨噬细胞质中的溶酶体与吞噬泡融合 c. 消化分解异物，通过胞吐作用排出1. 病原体; 2. 吞噬小体;3. 溶酶体; 4. 消化后的成分;5. 细胞质; 6. 细胞膜. 含台盼蓝（蓝色标记物）的淀粉（大分子，不会被巨噬细胞消化）肉汤（高蛋白含量，抗原性强）作为异物，能加速腹腔中产生较多的巨噬细胞，以供观察吞噬活动。实验步骤 实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6淀粉肉汤1ml(含0.3台盼兰，起标记作用)，以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。 实验时，每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1鸡血悬液0.51ml（统一取 1 ml），注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。 30min后，向腹腔注入0.5ml1ml（统一取 1 ml）生理盐水，轻柔小鼠腹部使腹腔液稀释。 3min后，用颈椎脱位法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹壁，把内脏推向一侧，用注射器抽取腹腔液，滴片，盖上盖玻片。 镜检，高倍镜下画图记录所见结果。小鼠操作注意事项 固定时一手抓住尾巴，另一只手轻轻按压脊部并推至耳固定时一手抓住尾巴，另一只手轻轻按压脊部并推至耳后颈椎处，捏取尽可能多的肌肉层固定小鼠头部，随后后颈椎处，捏取尽可能多的肌肉层固定小鼠头部，随后用同一只手的小指固定尾巴，最后一手固定小鼠。用同一只手的小指固定尾巴，最后一手固定小鼠。 颈椎脱臼处死小鼠需快速；颈椎脱臼处死小鼠需快速； 一手固定颈椎（三角形头一手固定颈椎（三角形头颅骨），一手拉住尾巴；颅骨），一手拉住尾巴； 固定颈椎的手迅速向前向固定颈椎的手迅速向前向下推，尾巴向后拉，使颈下推，尾巴向后拉，使颈椎脱臼。椎脱臼。注射时斜注射时斜45轻挑腹部皮肤轻挑腹部皮肤及肌肉，进入腹腔，针尖会有及肌肉，进入腹腔，针尖会有落空感，可适当回抽看是否有落空感，可适当回抽看是否有血液流出，没有则可注射；确血液流出，没有则可注射；确保不伤及内脏。保不伤及内脏。吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞鸡血红细胞小鼠血小板小鼠红细胞作业：回答问题并绘制一个已吞噬或正在作业：回答问题并绘制一个已吞噬或正在吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞。吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞。画图要求：与上次相同画图要求：与上次相同