组织学与胚胎学：01绪论

第第1 1章章 组织学绪论组织学绪论南南华华大大学医学学医学院院组组胚胚教研教研室室Introduction of Histology一一、组织学的研究内容组织学的研究内容组织学（组织学（histologyhistology） 研究机体微细结构及其相关功能的科学。研究机体微细结构及其相关功能的科学。研究内容：研究内容：细胞细胞组织组织器官器官机体机体系统系统又称显微解剖学又称显微解剖学1. 1.细胞（细胞（cellcell）是人体的结构和功能单位。是人体的结构和功能单位。 构成：细胞膜、细胞质、构成：细胞膜、细胞质、 细胞核。细胞核。2. 2.组织（组织（tissuetissue）构成：构成：细胞群细胞群+ +细胞外基质细胞外基质 细胞外基质：是细胞产生的、存在于细胞间的物质，细胞外基质：是细胞产生的、存在于细胞间的物质，包括纤维、基质和体包括纤维、基质和体液，是细胞生存的微环境。液，是细胞生存的微环境。类型：类型：上皮组织、结缔组上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织织、肌组织和神经组织3. 3.器官（器官（organorgan）不同的组织按一定的比不同的组织按一定的比 例、数量及方式组合成器官。例、数量及方式组合成器官。胃胃左左: :胃壁结构光镜图胃壁结构光镜图 右右: :器官器官 上皮组织上皮组织肌组织肌组织结缔组织结缔组织4. 4.系统（系统（systemsystem） 若干功能相关的器官若干功能相关的器官构成系统。构成系统。二二、组织学技术简介组织学技术简介 问题问题 解决方法解决方法 观察对象太小观察对象太小 放大放大 显微镜显微镜 观察对象无色，无反差观察对象无色，无反差 染色染色（HEHE染色染色） 观察对象生化成分不同观察对象生化成分不同 细胞化学细胞化学、免疫组织化学免疫组织化学 观察对象是活体观察对象是活体 组织、细胞培养组织、细胞培养( (一一) )光学显微镜（光学显微镜（Light Microscope, LMLight Microscope, LM）技术）技术1. 1.普通光学显微镜技术普通光学显微镜技术 分辨率分辨率0.2m,0.2m,最大放大最大放大 倍数倍数1500.1500.光镜结构光镜结构取材、固定、脱水、取材、固定、脱水、包埋、切片（包埋、切片（5 57 m 7 m 厚）、染色、封片厚）、染色、封片（1 1）石蜡切片（）石蜡切片（Paraffin SectioningParaffin Sectioning）：）： 最经典而最常用的切片技术。最经典而最常用的切片技术。切片机切片机（2 2）苏木精）苏木精- -伊红（伊红（hematoxylin-eosinhematoxylin-eosin,HEHE）染色）染色苏木精为碱性染料，使染色质和核糖体着紫蓝色；伊红为酸苏木精为碱性染料，使染色质和核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，使细胞质和细胞外基质着红色。性染料，使细胞质和细胞外基质着红色。嗜碱性嗜碱性: :酸性物质与碱性染料亲和力强，被酸性物质与碱性染料亲和力强，被苏木精染成紫蓝色。苏木精染成紫蓝色。 嗜酸性嗜酸性: :碱性物质与酸性染料亲和力强，被碱性物质与酸性染料亲和力强，被伊红染成红色。伊红染成红色。中中 性性: : 与两种染料亲和力都不强与两种染料亲和力都不强, , HEHE染色呈粉红色、染色呈粉红色、淡紫色。淡紫色。HEHE染色照片染色照片（3 3）其它制片方法）其它制片方法冰冻切片冰冻切片铺片（柔软组织）铺片（柔软组织）涂片（液体）涂片（液体）撕片（肌组织、神经纤维）撕片（肌组织、神经纤维）磨片（骨、牙）磨片（骨、牙）血涂片血涂片铺片铺片骨磨片骨磨片Ground sectionGround section（磨片）：（磨片）：bonebone2. 2.特殊光学显微镜技术特殊光学显微镜技术 从研究对象的特性与研究目的出发，应用带特殊从研究对象的特性与研究目的出发，应用带特殊装置显微镜的技术，统称特殊光学显微镜技术。装置显微镜的技术，统称特殊光学显微镜技术。（1 1）荧光显微镜）荧光显微镜 用于观察在组织化学与免疫组织化学中使用荧光素染用于观察在组织化学与免疫组织化学中使用荧光素染色或作为标记物的标本以及某些自发荧光的标本，使研色或作为标记物的标本以及某些自发荧光的标本，使研究者通过观察荧光的分布与强弱来了解组织的情况。究者通过观察荧光的分布与强弱来了解组织的情况。荧光素标记显示毛细血管荧光素标记显示毛细血管内皮细胞内皮细胞荧光素标记显示神经细胞荧光素标记显示神经细胞（2 2）相差显微镜）相差显微镜用于观察组织培养中活细胞的形态结构。用于观察组织培养中活细胞的形态结构。体外培养的的活细胞相差显微镜图体外培养的的活细胞相差显微镜图 （左（左: :成纤维细胞成纤维细胞 右右:HeLa:HeLa细胞）细胞）（3 3）激光共聚焦扫描显微镜（）激光共聚焦扫描显微镜（CLSMCLSM）CLSMCLSM是一种高光敏度与高分辨率的仪器，可对细胞的多是一种高光敏度与高分辨率的仪器，可对细胞的多种结构进行高效快速的微量定性与定量测定。配以微机种结构进行高效快速的微量定性与定量测定。配以微机图像处理系统，即可对细胞进行三维结构的图像分析。图像处理系统，即可对细胞进行三维结构的图像分析。（二）电子显微镜（二）电子显微镜（Electron Microscope, EMElectron Microscope, EM）技术）技术 电镜是用电子束代替可见光，用电磁透镜代替光学透镜，电镜是用电子束代替可见光，用电磁透镜代替光学透镜，用荧光屏将肉眼不可见的电子束呈像。用于观察组织细胞的用荧光屏将肉眼不可见的电子束呈像。用于观察组织细胞的超微结构（超微结构（ultrastructureultrastructure）：即细胞膜、细胞器、染色体等亚）：即细胞膜、细胞器、染色体等亚细胞结构。分辨率细胞结构。分辨率0.2m, 0.2m, 放大倍数几万放大倍数几万-几十万几十万1. 1.透射电镜术透射电镜术（ Transmission Electron Microscopy, TEMTransmission Electron Microscopy, TEM ） 透射电镜术是用电子束穿透超薄切片透射电镜术是用电子束穿透超薄切片(5080nm(5080nm），在荧光屏），在荧光屏上产生物像进行观察和上产生物像进行观察和 摄影。摄影。 戊二醛、锇酸双重固定戊二醛、锇酸双重固定树脂包埋树脂包埋超薄切超薄切片（片（50 50 80nm 80nm 厚）厚）电子染色（醋酸铀、柠电子染色（醋酸铀、柠檬酸铅）檬酸铅） 根据电子束在不同结构上被散射程根据电子束在不同结构上被散射程度的差异表现为电子密度高（黑或深灰色）和度的差异表现为电子密度高（黑或深灰色）和电子密度低（浅灰色）电子密度低（浅灰色）透射电镜图透射电镜图2. 2.扫描电镜术扫描电镜术（Scanning Electron Microscopy, SEMScanning Electron Microscopy, SEM）扫描电镜术用于观察组织表面的立体结构，具有真扫描电镜术用于观察组织表面的立体结构，具有真实的立体感，无需制备切片。实的立体感，无需制备切片。扫扫描描电电镜镜图图（三）组织化学技术（三）组织化学技术（HistochemistryHistochemistry） 组织化学技术是应用化学、物理、免疫学等的组织化学技术是应用化学、物理、免疫学等的 原原理和技术，对组织或理和技术，对组织或 细胞内某种物质进行定性、定细胞内某种物质进行定性、定位、定量研究的技术。位、定量研究的技术。1. 1.一般组织化学技术一般组织化学技术 利用化学反应的基本原理，使试剂和组织中的待检利用化学反应的基本原理，使试剂和组织中的待检物发生反应，产生有色沉淀物或重金属沉淀后，用光物发生反应，产生有色沉淀物或重金属沉淀后，用光镜或电镜观察。镜或电镜观察。PASPAS（过碘酸希夫）反应，显示多糖和糖蛋白，呈紫红色。（过碘酸希夫）反应，显示多糖和糖蛋白，呈紫红色。 糖糖 多醛多醛 品红硫酸复合物品红硫酸复合物 （希夫试剂，无色）（希夫试剂，无色）紫红色反应产紫红色反应产过碘酸过碘酸PAS染色2. 2. 免疫组化技术免疫组化技术（ImmunohistochemistryImmunohistochemistry） 根据抗原与抗体特异性结合的根据抗原与抗体特异性结合的 原理，检测组织中的原理，检测组织中的多肽或蛋白质的多肽或蛋白质的 技术，通过在技术，通过在 显微镜下观察标记物显微镜下观察标记物而获知该肽或蛋白质在而获知该肽或蛋白质在 组织中的分布与组织中的分布与 含量。含量。免疫荧光染色免疫荧光染色免疫组化染色免疫组化染色（ABCABC法）法）（四）放射自显影技术（四）放射自显影技术（AutoradiographyAutoradiography） 通过研究活细胞对某种放射性物质的特异性摄通过研究活细胞对某种放射性物质的特异性摄入，以显示该物质在组织和细胞内的分布、含量入，以显示该物质在组织和细胞内的分布、含量和代谢过程，借以反映细胞的功能状态。和代谢过程，借以反映细胞的功能状态。放射自显影放射自显影 : : 示幽门部胃小凹底的干细胞示幽门部胃小凹底的干细胞 （3 3H H标记的胸腺嘧啶核苷标记）标记的胸腺嘧啶核苷标记）（五）细胞培养术和组织工程（五）细胞培养术和组织工程 细胞培养术细胞培养术 (cell culture)(cell culture)是把从机体取得的细胞在是把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养；培养组织块或器体外模拟体内的条件下进行培养；培养组织块或器官则称组织培养术或器官培养术官则称组织培养术或器官培养术 用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响。和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响。 培养条件：营养、生长因子、培养条件：营养、生长因子、pHpH值、渗透压、值、渗透压、O O2 2和和CO2CO2浓度、温度，控制污染，用相差显微镜观察。浓度、温度，控制污染，用相差显微镜观察。细胞培养细胞培养(cell culture)(cell culture)相差显微镜图片相差显微镜图片组织工程组织工程（tissue engineeringtissue engineering）用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术。旨在为器官缺损患者提供一致替代物。术。旨在为器官缺损患者提供一致替代物。研究包括四个方面：研究包括四个方面： 种子细胞；种子细胞； 细胞外基质；细胞外基质； 构建组织或器官，即把细胞置于细胞外基质构建组织或器官，即把细胞置于细胞外基质 中进行三维培养、并形成所需要的形状；中进行三维培养、并形成所需要的形状； 将构建物移植机体。将构建物移植机体。 三三、组织学在医学中的地位及学习方法组织学在医学中的地位及学习方法（一一）地位地位（二二）学习方法学习方法 是学习病理学、生理学、生物化学是学习病理学、生理学、生物化学等等 学学科科的基石。的基石。 1. 1. 形态和机能相联系形态和机能相联系 2. 2.平面和立体相联系平面和立体相联系 3. 3.局部和整体相局部和整体相联系联系 4. 4. 建立动态变化的概念建立动态变化的概念 平面与立体（三）学习中要注意的问题（三）学习中要注意的问题1. 1.审视角度审视角度 组织细胞亚细胞分子水平组织细胞亚细胞分子水平组织水平：层次顺序、特征性结构和细胞组织水平：层次顺序、特征性结构和细胞细胞水平：主要细胞的分布、结构特点细胞水平：主要细胞的分布、结构特点亚细胞水平：重要细胞的超微结构亚细胞水平：重要细胞的超微结构分子水平：在生物化学中详细学习分子水平：在生物化学中详细学习2. 2.培养观察能力：培养观察能力：重视实习课和图像观察重视实习课和图像观察3. 3.培养空间思维能力：培养空间思维能力：将二维图形还原为三维构像将二维图形还原为三维构像本章重点本章重点1. 1.组织学的的研究内容、组织的概念；组织学的的研究内容、组织的概念；2.HE2.HE染色法、嗜酸性、嗜碱性、中性的概念；染色法、嗜酸性、嗜碱性、中性的概念；3. 3.石蜡切片术的基本过程。石蜡切片术的基本过程。