SMPQC002900菌种标准管理规程

1.0 目的 1.1规范生测组菌种的购买、接收、转种传代、保藏、使用、标签及废弃等方面的工作。2.0 范围 2.1适用于本公司检验和生产用菌种的管理。3.0 职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。4.0 定义 4.1CMCC：国家医学微生物菌种保藏管理中心（China medical Culture Collection）菌株：又称品系，在病毒中称为毒株，表示单个分离物的纯培养及其后代。4.2非致病菌：不引起宿主疾病的细菌。4.3致病菌：能引起宿主致病的细菌4.4条件致病菌：在正常情况下对人体无害，但当有机体的防卫功能减弱或该菌寄居部位发生改变时，可引起机体病变的微生物。如大肠杆菌进入腹腔后可引发腹膜炎。5.0 规程菌种接收安瓿G175%酒精消毒 液体培养基复壮G1划线法 固体平板培养G25.1菌种管理流程图：工作菌种 W3 工作菌种 W5 菌种鉴定 转接 工作菌种 W4 是 转接 转接 转接 保藏 保藏菌种 G2 保藏菌种 G4 保藏菌种 G3 否 销毁销毁销毁销毁5.2菌种的来源药品微生物检验用标准菌株来自中国医学菌种保藏中心（China medical Culture Collection）在冷冻干燥菌种安瓿标签上标有CMCC(B)26003或CMCC(F)98003等字样。(B)代表细菌，(F)代表真菌，数字为菌株的标准代码。5.3公司订购菌种接收与保藏公司订购的菌种到货时，其运输条件应符合菌株规定的运输要求，比如检查用来维持菌株运输过程中规定储备温度的冰袋仍应起到保温的效果。菌种名称、编号、特征、数量应与订购要求一致。检查用来存放菌种的包装如安瓿或试管等，应完好，无破损。从中国医学菌种保藏中心购买的标准菌株冻干粉剂管，直接存放于28冰箱保存。并填写标准菌株接收与发放记录（R-SMP-QC-0029-02）。5.3.5从菌种保藏中心购买的原始菌种是冻干粉剂，使用时首先需复活冻干菌种，应按（菌种保藏中心提供的）相关资料的要求进行复溶、培养和保存。5.3.6核对无误后及时填写菌种购买与接收记录（R-SMP-QC-0029-01）。5.4菌种的复活原始菌种是玻璃安瓿装.1清洁安瓿，在安瓿的外表面喷上75%的酒精并让其自然风干。.2用砂轮在安瓿四分之一处环割，用手轻轻将安瓿掰开(开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂) .3无菌操作，用无菌滴管吸取0.2ml适宜的液体培养基至安瓿中，轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解，用无菌吸管将安瓿内菌液转接到相应的液体培养基中营养肉汤或大豆胰蛋白胨肉汤(TSB)适用于枯草芽胞杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、金黄色葡萄球菌和沙门菌；胆盐乳糖液体培养基(BL)适用于大肠杆菌、铜绿假单胞菌；硫乙醇酸盐液体培养基适用于梭状芽胞杆菌等厌氧微生物，根据菌的不同培养温度要求，细菌置3035培养1824小时，真菌置2328培养2448小时。观察培养基是否混浊，混浊说明菌种复活生长；若在规定的时间内没有混浊，细菌可延长培养至7天，真菌可延长培养至14天。仍不混浊，应经过高压蒸汽灭菌后丢弃。取混浊的培养液，接种针划线接种于斜面培养基上，细菌继续培养1824小时，真菌2328培养2448小时。5.5菌种确认5.5.1当菌种复活以后，微生物实验室还应确认菌种的纯度。用无菌接种环从液体培养基中取细菌培养物接种到宜于该菌种生长的平板上培养，再按照菌种鉴定标准操作规程，对菌种进行鉴定确认。所有购入的菌株均应做复活和确认实验。及时填写微生物鉴别记录（R-SOP-QC-0009-01）。5.6菌种的保藏5.6.1菌种短期保藏经常使用的菌种采用低温斜面法保藏法（芽孢菌、酵母菌和霉菌2个月移种一次；无芽孢的细菌每月移种一次）。甘油冷冻保藏：将待保藏菌株接种平板或琼脂斜面，适宜温度下培养适宜的时间后（细菌3035培养1824小时，白色念珠菌2328培养2448小时，黑曲霉2328培养57天），用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过与试管壁之间的摩擦使细菌充分扩散到预先装于试管中的无菌蒸馏水中。黑曲霉则使用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌蒸馏水将孢子洗脱，然后用适宜的方法吸出孢子悬液至试管中。调节菌液浓度，向已制备好的菌悬液中加入等体积、含20%无菌甘油的TSB或营养肉汤，轻轻振摇小管，使内容物充分混合，分装于无菌小管，制备好的甘油管在-30条件贮存。5.7菌种的传代和使用5.7.1采用低温斜面法或甘油管保藏的微生物需定期传代。5.7.2斜面法霉菌、酵母菌、放线菌和芽孢菌2个月传代一次；甘油管法则每2年传代一次。5.7.3无芽孢细菌1月传代一次，每次传代必须检验菌种是否污染。5.7.4根据规定严格控制每一菌株传代不超过5次。5.7.5菌种的使用应分级管理，常用非致病菌株操作人员可单独管理；条件致病菌株应由两人使用和复核。5.7.6根据生产和检测要求，菌种使用时产孢子的菌株选用孢子形态，其他菌种为对数生长期菌龄。5.7.7菌种在低温保存时，细菌和酵母菌的菌悬液在制备后的24小时内使用（用于抗生素效价测定的菌液使用期限为一个月），霉菌孢子液在制备后的7天内使用。超过使用期限或受杂菌污染时，须重新制备。5.7.8当使用的菌液有数量或浓度要求时，不管菌悬液制备后的时间有多长，每次试验时必须同时用平板法进行菌数复核检查。5.8菌种的标签5.8.1保藏的菌种容器表面应贴有相应的菌种标签（R-SMP-QC-0029-07），应包含菌种名称、系列号（CMCC号或ATCC号）、传代批号、代数、传代日期、传代人、有效期。5.9 带菌物的销毁5.9.1带菌物品包括：废弃菌种、阳性对照、带菌废弃斜面、菌悬液、污染用具及样品检验过程中培养出的微生物。 5.9.2 处理方法：高压蒸汽121灭菌至少30分钟后照微生物实验室废弃物处理标准管理规程（SMP-QC-0026-00）执行。5.9.3 及时填写菌种销毁记录（R-SMP-QC-0026-01）。5.10标准菌种清单见下表菌种中文名称菌种英文名称编号大肠埃希菌Escherichia coliCMCC(B)44102金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusCMCC(B)26003枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisCMCC(B)63501生孢梭菌Clostridium sporogenesCMCC(B)64941铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaCMCC(B)10104沙门菌SalmonellaCMCC(B)50094白色念珠菌Candida albicansCMCC(F)98001黑曲霉Aspergillus nigerCMCC(F)980035.11其它5.11.1菌种管理是生测组的一项重要工作，以上操作非专业人员不得接触，非熟练人员须在熟练人员指导下操作，并在记录中备注栏注明。菌种是特殊的标准品，在一定条件下，许多种类都是病原菌，如金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，白色假丝酵母菌等，这就要求处理菌种时有一些有别于其他标准品的特殊要求：5.11.1.1根据种株对人和动物的致病力、毒性、流行传染的危害程度等把菌种进行分类，实行严密安全的保藏管理。5.11.1.2有关裸露菌种的所有操作都应在生物安全柜中进行；5.11.1.3操作人员要严格遵守实验室和实验人员防止传染的安全防护措施章程，采取有效的预防措施进行自我保护；5.11.1.4所有的与菌种的相关联的事情都要由专门的微生物技术人员处理和控制，并建立完善的菌种记录；5.11.1.5为了防止菌种污染，操作员必须无菌操作，若无必要，其他部门的员工未经允许不得进入微生物实验室。所有的意外情况，如菌种泄漏或人员受伤，都必须立即向微生物主管或上级领导报告以便得到及时解决。6.0 附录无7.0 相关的记录7.1菌种购买验收登记台账（R-SMP-QC-0029-01）7.2标准菌株接收与发放记录（R-SMP-QC-0029-02）7.3甘油管保藏与发放记录（R-SMP-QC-0029-03）7.4微生物鉴别记录（R-SOP-QC-0009-01）7.5菌种传代记录（R-SOP-QC-0007-01）7.6菌种使用与发放记录（R-SMP-QC-0029-04）7.7菌悬液制备、菌液制备与计数记录（R-SMP-QC-0029-05）7.8菌液使用记录（R-SMP-QC-0029-06）7.9菌种销毁记录（R-SOP-QC-0026-01）7.10菌种标签（R-SMP-QC-0029-07）7.11菌悬液标签（R-SMP-QC-0029-08）8.0 培训范围8.1质量控制部QC人员。9.0 参考及相关的文件 9.1 药品GMP指南质量控制实验室与物料系统2011年8月第一版，中国医药科技出版社。9.2中国药典2010年版二部，2010年1月 第1版，中国医药科技出版社。10.0 修订历史 修订号修订内容描述生效日期