免疫细胞的分离技术.ppt

免疫细胞的分离 2020 3 31 1 免疫细胞的分离 免疫细胞 1 概念直接参与免疫应答及与免疫应答相关的所有细胞 2 分类 单核吞噬细胞系统 单核细胞 巨噬细胞树突状细胞 DCs 淋巴细胞系统 T淋巴细胞 Th Tc B淋巴细胞NK细胞 粒细胞系统 中性粒细胞噬酸性粒细胞噬碱性粒细胞 2020 3 31 2 免疫细胞的分离 免疫细胞的分离 人外周血单个核细胞的分离淋巴细胞的分离免疫细胞亚群的分离 2020 3 31 3 免疫细胞的分离 细胞分离原理 细胞的大小和比重细胞表面标志细胞黏附于各种物质表面的特性 2020 3 31 4 免疫细胞的分离 一 人外周血单个核细胞的分离 Ficoll分层离心法 人外周血单个核细胞 peripheralbloodmononuclearcell PBMC Monocyte Lymphocyte 原理 血液中各细胞成分的比重不同 经离心沉淀 即可在分层液与血浆之间获得比较纯的单个核细胞 其中淋巴细胞占90 以上 2020 3 31 5 免疫细胞的分离 不同细胞密度不同红细胞和多形核白细胞1 092单个核细胞1 070分层液1 077 2020 3 31 6 免疫细胞的分离 一 人外周血单个核细胞的分离 Ficoll分层离心法Ficoll分层液 蔗糖聚合物 泛影葡胺 密度1 077 0 001g L 2020 3 31 7 免疫细胞的分离 二 淋巴细胞的分离 尼龙棉柱法E花环分离法补体细胞毒法免疫荧光法 2020 3 31 8 免疫细胞的分离 二 淋巴细胞的分离 尼龙棉柱法 原理 B细胞和单核细胞具有易黏附的特性 将淋巴细胞悬液加至尼龙纤维柱上 37 作用1 2h后 洗脱的为非黏附性的T细胞 2020 3 31 9 免疫细胞的分离 PBMC 尼龙纤维棉柱 B细胞单核细胞 T细胞 二 淋巴细胞的分离 E花环分离法 纯化T细胞 原理 成熟T细胞表面有绵羊红细胞受体 E受体 CD2分子 可和SRBC形成E花环 B细胞则无 E花环比重大 沉淀 经分离液分离来 E花环周围的绵羊RBC可用低渗法除去 三 免疫细胞亚群的分离 免疫磁珠分离法流式细胞术 2020 3 31 11 免疫细胞的分离 三 免疫细胞亚群的分离 免疫磁珠分离法 原理 将抗体交联于磁珠表面形成免疫磁珠 Immunomagneticbead IMB 免疫磁珠直接或者间接偶联在抗体上 从而与细胞相连 在高强度 梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的 2020 3 31 12 免疫细胞的分离 三 免疫细胞亚群的分离 免疫磁珠分离法 1 直接法 抗细胞表面分子抗体 磁性微球免疫磁珠 细胞悬液与免疫磁珠结合的细胞2 间接法 第二抗体 磁性微粒第一抗体 细胞特定细胞 免疫磁珠法分选装置 三 免疫细胞亚群的分离 流式细胞术 FlowCytometry FCM FCM将免疫荧光技术应用于流式细胞仪 对单个细胞的表面标志 抗原或受体 进行快速 精确的分析和自动检测 并将不同类型的细胞分选收集 原理 细胞经荧光染色后 通过高速流动系统 细胞排成单行 逐个流经检测区 当细胞从流动室喷嘴处流出时 超声震动液流 使液流段裂成一连串的均匀小滴 每个小滴内最多含一个细胞 细胞经激光束照射产生荧光和散射光 由光电倍增管接收 转换成脉冲信号 数据经电脑处理 分辨细胞类型 2020 3 31 17 免疫细胞的分离 流式细胞仪工作原理 2020 3 31 18 免疫细胞的分离 流式细胞仪 2020 3 31 19 免疫细胞的分离 免疫细胞的分离 人外周血单个核细胞的分离 Ficoll分层离心法淋巴细胞的分离 尼龙棉柱法 E花环分离法 补体细胞毒法免疫荧光法免疫细胞亚群的分离 免疫磁珠分离法 流式细胞术 谢谢 2020 3 31 21 免疫细胞的分离