实验九抗酸染色.ppt

实验九抗酸染色,临床病原生物学教研室,一、实验目的：1.掌握抗酸染色的原理和方法2掌握结核分支杆菌痰涂片的报告方法。,分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。,二、实验原理：,三、实验材料：细菌：结核杆菌染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液其它：接种环、酒精灯、载玻片等,四、实验方法：1、细菌涂片的制备1）涂片：20mm*25mm薄涂片或20mm*15mm厚涂片2）干燥：自然干燥3）固定：火焰固定,四、实验方法：1、细菌涂片标本的制备涂片干燥固定2、染色,3、油镜观察,1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热5-10分钟，待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：3%盐酸酒精脱色301；用水冲洗。3）复染：用碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸水纸吸干。,五、实验结果：,结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。,六、注意事项：,1、无菌操作2、涂片厚度要适中3、固定4、冲洗5、染色时间6、初染加热的温度，勿沸腾,准备,细菌：卡介苗染液：抗酸染液（2套/室）其它：载玻片（1张/人）、结核分枝杆菌示教片（1张/人）痰标本8盒,