《中药的检查》PPT课件.ppt

中药的检查,中药的检查,药材和饮片通常都检查什么？中药制剂通常都检查什么？中药的检查与化药的检查有何区别？,中药材及其炮制品的检查,普遍检查杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分一些检查重金属、砷盐、干燥失重、炽灼残渣、溶剂残留、树脂残留农药残留、黄曲霉素、二氧化硫、有害元素特殊检查：大黄-土大黄苷、乌头-双酯型生物碱,比较中药的检查与化药的检查有何异同？,杂质限量计算一般杂质检查特殊杂质检查,重金属砷盐铁盐有害元素干燥失重水分炽灼残渣灰分,农药残留黄曲霉素二氧化硫,杂质的来源,一是由中药材原料中带入；二是在生产制备过程中引入；三是贮存过程中受外界条件的影响，制剂的理化性质改变而产生。,一般杂质检查方法,杂质检查法水分灰分测定法铁盐干燥失重炽灼残渣重金属砷盐,树脂残留农药残留黄曲霉素S02有害元素,一、杂质检查法,药材中混存的杂质系指下列各类物质：一、来源与规定相同，但其性状或部位与规定不符；二、来源与规定不同的物质；三、无机杂质，如砂石、泥块、尘土等。,杂质检查法,检查方法1.取规定量的供试品，摊开，用肉眼或放大镜（510倍）观察，将杂质拣出；如其中有可以筛分的杂质，则通过适当的筛，将杂质分出。2.将各类杂质分别称重，计算其在供试品中的含量（%）。,1、根、根茎、藤木、叶、花、皮类，泥砂和非药用部位等杂质不得超过2%。2、果实、种子类，泥砂和非药用部位等杂质不得超过3%。3、全草类，不允许有非药用部位，泥砂等杂质不得超过3%。4、动物类，附着物、腐肉和非药用部位等杂质不得超过2%，5、矿物类，夹石、非药用部位等杂质不得超过2%，6、菌藻类，杂质不得超过3%。7、树脂类，杂质不得超过3%。8、需去毛、刺的药材，其未去净茸毛和硬刺的药材不得超过1%。,杂质检查法,【注意】1.药材中混存的杂质如与正品相似，难以从外观鉴别时，可称取适量，进行显微、化学或物理鉴别试验，证明其为杂质后，计入杂质重量中。2.个体大的药材，必要时可破开，检查有无虫蛀、霉烂或变质情况。3.杂质检查所用的供试品量，除另有规定外，按药材取样法称取。,二、水分测定法,分类及适应药材类型：第一法(烘干法)适用于不含或少含挥发性成分的药品。第二法(甲苯法)适用于含挥发性成分的药品。第三法(减压干燥法)适用于含有挥发性成分的贵重药品。第四法（气相色谱法）适用于中药制剂中微量水分的测定。,烘干法测定水分,测定法：取供试品25g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在100105干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（）。水分检查原始记录表本法适用于不含或少含挥发性成分的药品。,甲苯法测定水分,A为500mL的短颈圆底烧瓶，B为水分测定管；C为直形冷凝管，外管长40cm。使用前，全部仪器应清洁，并置烘箱中烘干。,甲苯法测定水分,取供试品适量（约相当于含水量14ml），精密称定，置A瓶中,加甲苯约200ml，必要时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时,将冷凝管内部先用甲苯冲洗,再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算供试品中的含水量（%）。,三、灰分测定法,原理把一定量的样品经炭化后放入高温炉内灼烧，使有机物质被氧化分解，以二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，而无机物质以硫酸盐、磷酸盐、碳酸盐、氯化物等无机盐和金属氧化物的形式残留下来，这些残留物即为灰分，称量残留物的重量即可计算出样品中总灰分的含量。仪器高温炉坩埚坩埚钳干燥器分析天平,灰分测定法,总灰分：中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，总灰分=生理灰分+酸不溶性灰分细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为“生理灰分”。酸不溶性灰分：中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分，称为酸不溶性灰分。,总灰分测定法,称取供试品23g（如需测定酸不溶性灰分，可取供试品35g），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500600，使完全炭化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。,酸不溶性灰分测定法,供试品先按总灰分测定的方法测定其总灰分，然后取所得的灰分，在坩埚中注意加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中含酸不溶性灰分的含量（%）。,高温炉（又名马福炉）：用于金属熔融、有机物灰化及重量分析的沉淀灼烧等。高温炉有加热部分、保温部分、测温部分等组成，有配套的自动控温仪，用来设定、控制、测量炉内的温度。结构：高温电炉的最高使用温度可达到10000C左右。炉膛以传热性能良好、耐高温而无胀碎裂性的碳化硅材料制成，外壁有形槽，槽内嵌入电阻丝以供加热。耐火材料外围包裹一层很厚的绝缘耐热镁砖石棉纤维，以减少热量损失。钢质外壳以铁架支撑。炉门以绝热耐火材料嵌衬，正中有一孔以透明云母片封闭用作观察炉膛的加热情况。伸入炉膛中心的是一支热电偶，作测定温度用。热电偶的冷端与高温计输入端连接，构成一套温度指示和自动控温系统。,使用方法用毛刷仔细清扫炉膛内的灰尘和机械性杂质，放入已经炭化完全的盛有样品的坩埚，关闭炉门。开启电源，指示灯亮。将高温计的黑色指针拨至需要的灼烧温度。随着炉膛温度上升，高温计上指示温度的红针向黑针移动，当红针与黑针对准时，控温系统自动断电；当炉膛温度降低，红针偏离与黑针对准的位置时，电路自动导通，如此自动恒温。达到需要的灼烧时间后，切断电源。待炉膛温度降低至2000C左右，开启炉门，用长柄坩埚取出灼烧物品，在炉门口放置片刻，进一步冷却后置干燥器中保存备用。关闭炉门，做好整理工作。,坩埚素烧瓷坩埚，它的物理性质和化学性质与石英坩埚相同，耐高温(1200)，内壁光滑，可用热的稀盐酸洗涤。价格低廉是它的最大优点。但它抗碱性能较差，在温度骤变时，易破裂。铂坩埚，铂溶点高(1773)，导热良好，清洗方便，能抗碱金属、碳酸盐及氮化氢的腐蚀，但价格昂贵，使用不当会腐蚀或发脆。,干燥器：干燥器的使用：干燥器带有磨口的玻璃盖子，为了使干燥器密闭，在盖子磨口处均匀地涂一层凡士林油。干燥器中带孔的圆板将干燥器分为上、下两室，上室被干燥的物体，下室装干燥剂。干燥剂不宜过多，约占下室的一半即可，否则可能沾污被干燥的物体，影响分析结果。最常用的干燥剂有硅胶、CaO、无水Cal2等。硅胶是硅酸凝胶，烘干除去大部分水后，得到白色多孔的固体，具有高度的吸附能力。为了便于观察，将硅胶放在钴盐溶液中浸泡，使之呈粉红色，烘干后变为蓝色。蓝色的硅胶具有吸附能力，当硅胶变为粉红色时，表示已经失效，应重新烘干至蓝色。,干燥器使用注意事项：启盖时，左手扶住干燥器，右手握住盖上的圆球，向前推开器盖，不可向上提起，搬动干燥器时，要用双手捧住，并用两个拇指压住盖沿，防止盖子滑下打碎。当高温坩埚放入干燥器后，不能立即盖紧盖子。一方面因为干燥器中的空气因高温而剧烈膨胀，推动干燥器盖，有时会将盖子推落打碎，另一方面，当干燥器中的空气从高温降到室温后，压力大大降低，盖子很难打开。即使打开了，也会由于空气流的冲入将坩埚中的被测物冲散使分析失败。正确的操作：当坩埚中放入干燥器后，先盖上盖子，再慢慢推开盖子，放出热空气。这样重复数次，直到听不到“嘣”“嘣”的声音后，把盖子盖紧并移至天平室后，冷却至室温。,总灰分检查原始记录表总灰分的含量（%）（W3W1）/W2,灰分测定的注意事项,1.测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能通过2号筛，将粉末混合均匀后再取样。2.如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10%硝酸铵溶液2ml；使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，得到的残渣再按上面所说的方法炽灼至坩埚内容物完全灰化。,三、浸出物测定方法,冷浸法水溶性浸出物测定法热浸法分类醇溶性浸出物测定法挥发性醚浸出物测定法,仪器,水浴锅,电子天平、粉碎机标准筛、干燥箱干燥器、定量滤纸,磨口锥形瓶250-300ml,移液管（25、50、100、,漏斗,蒸发皿,1.水溶性浸出物测定法,测定用的供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀冷浸法取供试品约4g，精密称定，置250300ml的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（）。,热浸法取供试品约24g，精密称定，置100250ml的锥形瓶中，精密加水50100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（）。醇溶性浸出物测定法照水溶性浸出物测定法测定。除另有规定外，以各品种项下规定浓度的乙醇代替水为溶剂。,球形冷凝管,锥形烧瓶,加热器,试验铁架,万能铁夹,冷却水,浸出物热浸法装置,冷却水,浸出物检查原始记录表浸出物含量（%）（W3-W1）/W2,五、二氧化硫残留量测定法,为什么要测定？方法硫磺具有漂白、增艳、防虫等作用，某些中药材在加工过程中有用硫磺熏蒸的习惯，残留的S02可能影响人体健康。,第一法（酸碱滴定法）,原理本方法系将中药材以蒸馏法进行处理，样品中的亚硫酸盐系列物质加酸处理后转化为二氧化硫后，随氮气流带入到含有双氧水的吸收瓶中，双氧水将其氧化为硫酸根离子，采用酸碱滴定法测定，计算药材及饮片中的二氧化硫残留量。,二氧化硫残留量测定法,A为1000ml两颈圆底烧瓶；B为竖式回流冷凝管；C为（带刻度）分液漏斗；D为连接氮气流入口；E为二氧化硫气体导出口。另配磁力搅拌器、电热套、氮气源及气体流量计,测定法取药材或饮片细粉约10g（如二氧化硫残留量较高，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g），精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端E口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢（H2O2）溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加入3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml），并用0.01mol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/mim；打开分液漏斗C的活塞，使盐酸溶液（6mol/L）10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定液（0.01mol/L）滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。,A为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml；B为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml；c为氢氧化钠滴定液摩尔浓度，mol/L；0.032为1ml氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当的二氧化硫的质量，g；W为供试品的重量，g。,供试品中二氧化硫残留量（mg/g）=,重金属,第一法第二法第三法第四法,化药常用哪个方法？中药常用哪个方法？,砷盐,古蔡氏法Ag-DDC法原理、方法、注意事项样品前处理,化药常用哪个方法？中药常用哪个方法？,有机破坏测砷盐,中药材、中药制剂和一些有机药物砷盐的检出通常应先行有机破坏，因砷在分子中可能以有机状态结合，如不经破坏，则砷不易析出。常用的破坏方法有酸破坏法（溴-稀硫酸破坏法、硫酸-过氧化氢破坏法）、碱破坏法（氢氧化钙破坏法、无水碳酸钠破坏法、硝酸钠-无水碳酸钠破坏法）直接炭化法等，以氢氧化钙破坏法较为常用。,砷盐的样品前处理,一般有机药物的处理方法：取一定量的供试品，加入等量的无砷氢氧化钙混匀后，加水湿润，烘干，在小火上小心炽灼（注意不使内容物溅出）至烟雾除尽，移入高温炉中，在500-600炽灼至灰化，砷成为非挥发性的亚砷酸钙，取出放冷，加蒸馏水5ml，再缓缓加入盐酸及浓溴液数滴（不含硫的检品可不加浓溴液），置水浴上加热至溶液中的红色溴驱尽，滴加氯化亚锡试液数滴，再全部转入测砷瓶中，依法测定，做空白试验校正。注意炽灼温度以600左右为宜，温度过高，As2O3损失大，给检查带来误差；一定要灰化完全，若不完全，有游离碳存在，能使所显砷斑颜色较浅，且不规律。,溶剂残留,树脂残留,农药残留,方法,色谱柱,检测器,限量,树脂残留物,苯的限量为2ppm，正己烷、甲基环己烷、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的限量为20ppm。GC法；方法学验证：同溶剂残留,图1对照品溶液色谱图1-正己烷；2-苯；3-甲基环己烷；4-甲苯；5-二甲苯；6-苯乙烯；7-二乙烯苯,检查农药残留量的必要性？中药材有相当数量为人工栽培，为提高药材产量，减少昆虫、真菌和霉菌的危害，在生产过程中常喷洒农药。此外，土壤中残留的农药也可能引入药材中，致使中药材农药残留问题较为严重，而农药对人体危害极大，所以需对中药材及中药制剂进行农药残留量检查。,农药残留量的检查,常见农药的种类按化学结构分类：有机氯类：DDT、六六六等；有机磷类：敌敌畏、乐果等；苯氧羧酸类除草剂：2，4D；2，4，5T等；氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威）等；二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、福美锌等；无机农药：磷化铝、砷酸钙等；植物性农药：烟叶和尼古丁等；其他：溴螨酯、氯化苦等。其中有机氯和有机磷类农药是长期残留的，故应测定其含量。,农药残留量的检查,1、残留农药的提取提取溶剂：有机氯类农药：常用正已烷（或石油醚）、乙腈、丙酮、苯等，混合溶剂常用正已烷-丙酮、乙腈-水等。有机磷类农药：根据其极性采用相应极性的溶剂进行提取。提取方法：索氏提取法；振荡提取法。,农药残留量的检查,2、样品纯化：液液分配（LLP）：常用溶剂体系有二氯甲烷丙酮/水、二氯甲烷甲醇/水、乙腈石油醚、乙腈石油醚/水、二氯甲烷乙腈/水等。柱层析分离：常用吸附剂有弗罗里硅土（Florisil）、Celite-Nuchar、硅胶、氧化铝、活性炭等。,农药残留量的检查,3、检测方法：气相色谱法。,层析柱：毛细管柱。检测器：常用电子捕获检测器。固定液及其配比有机氯农药：常用DC-200、OV-17、QF-1、SE-30、OV-210等。有机磷农药：常用10%DC-200、10%-200+15%QF-1、2%DEGS等。柱温：有机氯农药：一般使用180-220，视农药而异，其中以200最常用；有机磷农药：测定对象不同，柱温变化较大。载气：氮气。,农药残留量的检查,难点提示：对中药进行农药残留量检查已成为必然，尤其是出口中药材及中药制剂必须进行该项检查。农药残留量分析属微量分析，在对样品进行前处理时需特别注意待测成分的损失。,农药残留量的检查,黄曲霉毒素测定法,为什么要测定？方法注意事项,检查黄曲霉素的必要性,中药材采集后干燥或贮存不当，或在制备和加工过程中处理不善，可能污染在自然界普遍存在的黄曲霉而产生黄曲霉毒素，黄曲霉毒素具有极强的毒性和致癌性，故需对中药材及中药制剂中黄曲霉毒素含量进行控制。,黄曲霉的基本结构：,黄曲霉毒素是一类结构相似的化合物，其基本结构都有二呋喃和香豆素。黄曲霉毒素在紫外线照射下，都能了出荧光，根据荧光颜色、Rf值及结构等不同，分别命名为B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q等。,B1,B2,G1,黄曲霉毒素测定法（2015）,本法系用高效液相色谱法（附录D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。规定：B15g/kg，G2+G1+B2+B1的总量10g/kg。陈皮、僵蚕、桃仁、胖大海、酸枣仁,黄曲霉毒素测定法（2015）,色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70；以荧光检测器检测，激发波长ex=360nm（或365nm），发射波长em=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。,黄曲霉毒素测定法（2015）,混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0g/ml、0.3g/ml、1.0g/ml、0.3g/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。,黄曲霉毒素测定法（2015）,供试品溶液的制备取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱（AflaT-estP）,流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。,黄曲霉毒素测定法（2015）,测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5l、10l、15l、20l、25l，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20-25l，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。,黄曲霉毒素测定法（2015）,附注：（1）本实验应用相应的安全、防护措施，并不得污染环境。（2）残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%次氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。,重金属及有害元素测定法（2015）,铅、镉、砷、汞是目前世界公认的对人体有害的元素，国际上对此十分重视，很多国家对进口中药、中药制剂均有明确的限度规定。某些国家对铜也有明确限定。,重金属及有害元素测定法（2015）,6种常见药材中需测定：甘草、黄芪、西洋参、丹参、白芍、金银花、测定方法：原子吸收分光光度法，电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）,ICP-MS,特点仪器构造ICP工作原理样品前处理分析方法应用前景,ICP-MS,电感耦合等离子体质谱：是以电感耦合等离子体（ICP）作为离子源，产生的样品离子经质量分析器和检测器按质荷比（m/z）分离后，得到质谱图，用于元素和同位素分析的一种新方法。,ICP-MS的特点,更低的检出限：0.020.1ng/ml非常宽的线性范围：89个数量级谱线简单、干扰少、精密度高多元素同时定性、定量分析等特点速度快：通常的分析时间15min可分析地球上几乎所有的元素（C、O）。,ICP-MS的仪器构造,等离子体离子源通常，液体样品通过蠕动泵引入到一个雾化器产生气溶胶。双通路雾室确保将气溶胶传输到等离子体。在一套形成等离子体的同心石英管中通入氩气（Ar）。炬管安置在射频(RF)线圈的中心位置，RF能量在线圈上通过。强射频场使氩原子之间发生碰撞，产生一个高能等离子体。样品气溶胶瞬间在等离子体中被解离（等离子体温度大约为6000-10000K），形成被分析原子，同时被电离。将等离子体中产生的离子提取到高真空（一般为10-4Pa）的质谱仪部分。真空由差式抽真空系统维持：被分析离子通过一对接口（称作采样锥和截取锥）被提取。,雾化系统,等离子炬管,取样锥,离子透镜,河水的ICP-MS质谱图,ICP-MS的样品前处理：微波消解、干法分析方法：内标法、外标法应用：中药的元素分析：有益微量元素、有害元素元素形态分析：,