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考点49 微生物的培养,考点50 微生物的应用,专题15 微生物的培养与应用,高考考法突破,考法1 微生物的培养和分离,应试基础必备,考点49 微生物的培养,考点49 微生物的培养,考法2 微生物的筛选与计数,应试基础必备,1微生物的培养 (1)培养基 概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质。 成分：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。 培养基的制备：计算称量溶化灭菌倒平板。 (2)无菌技术 关键：防止外来杂菌的入侵。 方法：实验室中常用紫外线或化学药物消毒，如用酒精擦拭双手；灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。 (3)实验操作 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 a步骤：计算称量溶化灭菌倒平板。 b倒平板操作时待培养基冷却至50度左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 纯化大肠杆菌 a原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 b方法：平板划线法、稀释涂布平板法。,考点49 微生物的培养,应试基础必备,菌种的保藏 a短期保存：固体斜面培养基上4 保存，菌种易被污染或产生变异。 b长期保存：甘油瓶中20 冷冻箱中保藏。,2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)筛选菌株 原理：人为提供有利目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 (2)统计菌落数目的方法 显微镜直接计数法 a原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 b方法：用计数板计数。 c缺点：不能区分死菌与活菌。 间接计数法(活菌计数法) A原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。 B计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 C操作 a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。 (3)实验流程：土壤取样制备培养基微生物的培养与观察细菌的计数。,考点49 微生物的培养,应试基础必备,3培养基对微生物的选择作用 (1)纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：,(2)纤维素分解菌的筛选原理 以纤维素作为唯一碳源的选择培养基上，刚果红纤维素红色复合物，纤维素分解菌可分泌纤维素酶，分解纤维素使红色消失，出现透明圈。即：可根据透明圈来筛选纤维素分解菌。 (3)土壤中纤维素分解菌的筛选流程 土壤取样(要在富含纤维素的环境中取样)选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落。,返回考点目录,考点49 微生物的培养,高考考法突破,角度1 对培养基的认识 1培养基的成分,考法1 微生物的培养和分离,考点49 微生物的培养,高考考法突破,2培养基的分类,考点49 微生物的培养,3培养基的配制原则 (1)目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等选择原料配制培养基，如培养自养型的微生物就不用加入有机营养物质。 (2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 (3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同。,高考考法突破,(4)自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据：能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源无关。自养微生物以CO2或碳酸盐为碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。 (5)营养成分不同,考点49 微生物的培养,(6)微生物最常用的碳源和氮源：最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常用的氮源是铵盐和硝酸盐。对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源。 4琼脂的作用：加入培养基中的琼脂只能起到凝固作用，一般不能被微生物利用。 5选择培养基和鉴别培养基的辨析：选择培养基一般只生长特定的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。,角度2 无菌技术操作的方法 1灭菌的方法与原理,高考考法突破,(3)酒精灯灼烧法：适用于操作时试管口及接种环的灭菌。 以上三种高温灭菌的原理是使细菌体内蛋白质变性而达到杀灭细菌的目的。 2消毒的方法 (1)煮沸消毒法：100 煮沸56 min，可以杀死微生物细胞，可用于饮水和餐具的消毒。 (2)巴氏消毒法：80 煮15 min或7075 煮30 min，实际生产中常用于鲜奶的消毒。 (3)70%酒精消毒法：70%酒精杀菌能力最强，常用于实验时操作者手的消毒。体积分数为70%的酒精杀菌效果最好的原因是如果浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，则杀菌能力减弱。,考点49 微生物的培养,高考考法突破,3消毒和灭菌的比较,考点49 微生物的培养,角度3 平板划线法和稀释涂布平板法对大肠杆菌的纯化的比较,高考考法突破,考点49 微生物的培养,高考考法突破,考点49 微生物的培养,角度4 分离微生物的方法 (1)改变培养基中的营养成分，如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物。 (2)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离出能消除石油污染的微生物的目的。 (3)当培养基中加入抗生素时，如加入青霉素、链霉素，可以抑制细菌的生存，从而分离出真菌等真核微生物。 角度5 关于透明圈 1抗生素与透明圈的关系：抗生素是由真菌产生的、可以抑制细菌的生长、繁殖甚至杀死细菌的一类物质。用含抗生素的滤纸片均匀置于平板培养基上的不同位置，培养一段时间后，某种细菌形成的透明圈越大，说明该细菌对该抗生素越敏感，抑菌能力越强。若不出现透明圈，说明该细菌对该抗生素不敏感。 2分解圈(或透明圈)的大小与降解能力的关系：在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景。接种培养后待筛选的菌落周围就会形成分解圈(或透明圈)，分解圈(或透明圈)的大小反映了菌落利用此物质的能力。常作为初步筛选菌落的快速方法。如在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或原油可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或降解原油能力的大小。,考点49 微生物的培养,高考考法突破,考点49 微生物的培养,1检测培养基是否被污染的方法：将未接种的培养基放在适宜温度下培养，若培养基上有菌落说明培养基被污染，无菌落说明未被污染。 2两种常用刚果红(CR)染色法的比较,考法2 微生物的筛选与计数,高考考法突破,考点49 微生物的培养,3菌株筛选原理的比较,4.正确的取样方法：摇匀培养液再取样。 5计数时数据误差较大的原因：一是未摇匀培养液，吸管在上部取样，则数据偏小，在下部取样，则数据偏大；二是应统计这一区间的活菌个体数，若把死亡个体算进来，数据会偏高。 6影响微生物数量变化的因素：养分、空间、温度、pH值变化和有毒排泄物等都是影响微生物数量持续增长的限制因素，因而也影响K值(环境容纳量)的大小。,本考点结束,考点49 微生物的培养,高考考法突破,应试基础必备,考点50 微生物的应用,考点50 微生物的应用,考法3 果酒和果醋的制作方法及应用,考法4 腐乳的制作及条件控制,考法5 泡菜制作及亚硝酸盐含量的测定,应试基础必备,1果酒与果醋的制作,考点50 微生物的应用,应试基础必备,2腐乳的制作 (1)原理：毛霉等微生物能产生蛋白酶和脂肪酶，作用如下：,考点50 微生物的应用,(2)腐乳的制作流程,(3)影响腐乳品质的因素 盐：a.浓度过低，不足以抑制微生物生长，豆腐易腐败变质。b.浓度过高，会影响腐乳口味。 酒的含量：一般控制在12%左右。 香辛料：具调味、杀菌作用。 (4)温度：1518 。 3泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 (1)作用菌种：乳酸菌和假丝酵母。 (2)原料：白菜、洋白菜等。 (3)原理：在无氧的条件下，微生物利用菜中的糖和其他营养物质进行发酵，乳酸菌将糖分转化为乳酸，这时需氧菌的活动被抑制；当乳酸增加到一定程度时，乳酸菌的活动受到抑制，发酵活动逐渐变缓甚至停止。 (4)制作步骤,应试基础必备,返回考点目录,(5)亚硝酸盐含量的测定 危害：当摄入总量较多时，可引起中毒或死亡。在特定条件下，亚硝酸盐可以转变成致癌物亚硝胺。 原理：亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色产物，通过目测比较，大致估算其含量。 检测步骤：配制溶液制备标准显色液制备样品处理液比色。 4与发酵有关的微生物,考点50 微生物的应用,高考考法突破,角度1 微生物种类与产物的关系 1酵母菌与果酒的关系：酵母菌有氧呼吸时，产生能量多，产物为二氧化碳和水，可大量繁殖；无氧呼吸时，产生能量少，产物为酒精和二氧化碳，仅能满足自身代谢，基本不繁殖，所以用酵母菌进行工业生产果酒时先进行通气，再密闭。 2醋酸菌与果醋的关系：制作果醋的微生物主要是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再进一步转变为醋酸。 角度2 制作果酒的材料的选择与处理 选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，再除去枝梗，以防葡萄汁流失以及污染。冲洗以洗去灰尘为目的，不要太干净，以防洗去野生酵母菌。 角度3 防止发酵液被污染的措施 (1)榨汁机要清洗干净并晾干。 (2)发酵瓶要洗净并用体积分数为70%的酒精消毒。 (3)装入葡萄汁后要封闭充气口。,考法3 果酒和果醋的制作方法及应用,考点50 微生物的应用,高考考法突破,角度4 发酵条件的控制及酒精的检测 (1)葡萄汁装入发酵瓶时，要留约1/3的空间，目的是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，耗尽O2后再进行酒精发酵；防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液溢出。 (2)严格控制温度：1825 利于酵母菌的繁殖和酒精发酵；3035 利于醋酸菌的繁殖和醋酸发酵。 (3)充气：酒精发酵为无氧发酵，需封闭充气口；醋酸发酵为有氧发酵，需适时通过充气口充气。 (4)果酒发酵要定时排气的原因：操作过程中由于产生二氧化碳使瓶内气压增大，如果不及时排气，导致发酵瓶瓶塞被冲开甚至爆炸。 (5)检验酒精的常用方法：重铬酸钾在酸性条件下与酒精反应呈灰绿色。 角度5 果酒和果醋的制作步骤的比较,考点50 微生物的应用,高考考法突破,角度6 制作果酒和果醋的装置图分析 (1)各部位的作用 充气口：在醋酸发酵时连接充气泵进行充气。,排气口：排出酒精发酵时产生的CO2；与排气管相连的长而弯曲的胶管，可有效阻止空气中微生物的进入，避免来自空气的污染。 出料口：用来取样。 (2)该装置的使用方法 使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口连接充气泵，输入氧气。,考点50 微生物的应用,考点50 微生物的应用,高考考法突破,角度1 盐和卤汤的作用 1发酵过程中加盐的作用：不仅可以调制风味，而且能够抑制杂菌等其他微生物的繁殖。 2卤汤的作用：除具有一定的防腐作用外，还能使腐乳具有独特的风味。 角度2 防止杂菌感染的措施 (1)用来腌制腐乳的玻璃瓶洗干净后要用沸水消毒灭菌。 (2)装瓶时操作要迅速小心，装瓶后要用胶条密封，且最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染，进而影响腐乳风味。 角度3 影响因素 1温度：温度影响菌丝的生长和代谢，如温度过低，则菌丝生长缓慢，不能进入豆腐块的深层；温度高，菌丝易老化和死亡，影响腐乳的品质。 2发酵时间：发酵时间影响生化反应速度及生化产物的量。 角度4 腐乳味道鲜美、易于消化吸收的原因 毛霉产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为多肽和氨基酸；其产生的脂肪酶能将豆腐中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。,考法4 腐乳的制作及条件控制,考点50 微生物的应用,考点50 微生物的应用,高考考法突破,角度1 材料的选择及用量 (1)蔬菜应新鲜，若放置时间过长，蔬菜中的硝酸盐易被还原成亚硝酸盐。 (2)清水和盐的质量比为41，盐水要煮沸后冷却。煮沸有两大作用：一是除去水中的氧气，二是杀灭盐水中的其他细菌。 角度2 条件控制 (1)泡菜坛要选择透气性差的容器，以创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵，防止蔬菜腐烂。 (2)泡菜坛坛盖边沿的水槽内注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境，并注意在发酵过程中经常补水。 (3)发酵过程温度控制在室温即可。温度过高则易滋生杂菌，温度过低则发酵时间延长。 角度3 亚硝酸盐含量的测定 (1)测定亚硝酸盐含量的方法：比色法。 (2)在泡菜腌制过程中定期测定亚硝酸盐含量的目的：把握取食的最佳时间。 (3)泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素：温度、腌制时间、食盐用量等。温度高、时间短、食盐用量低都会造成杂菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。,考法5 泡菜制作及亚硝酸盐含量的测定,考点50 微生物的应用,本考点结束,考点50 微生物的应用,
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