水生实验动物质量监测.ppt

实验动物质量标准和监测,张钰广东省实验动物监测所,实验动物是指经人工培育、遗传背景清楚、对其质量实行控制、用于科学试验及产品生产的动物。区别于实验用动物。,与实验动物相关标准,实验动物遗传（3）,实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制GB14923,实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法GB/T14927.1,实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法GB/T14927.2,近交系、封闭群、杂交群近交系：至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可以追溯到起源20代或以后代数的一对祖先。近交系数应大于99%。封闭群：以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从外界引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上。杂交群：由不同品系或种群之间杂交产生的后代。,遗传监测重要性保障品系的遗传特性防止发生遗传突变和遗传污染,实验动物寄生虫学等级及检测GB14922.1,实验动物寄生虫学检测方法GB/T18448.1-18448.10,实验动物微生物学等级及检测GB14922.2,实验动物微生物学检测方法（1）GB/T14926.42-14926.43,实验动物微生物学检测方法（2）GB/T14926.1-14926.6；GB/T14926.8-14926.17；GB/T14926.41；GB/T14926.44-14926.49,实验动物微生物学检测方法（3）GB/T14926.50-14926.55,实验动物质量（8）,实验动物检测方法（4）GB/T14926.18-14926.32GB/T14926.56-14926.64,SPF鸡微生物学监测总则GB/T17998,普通级动物（ConventionalAnimal,CV）（基础级动物）,清洁级动物（CleanAnimal,CL）,无特定病原体级动物（SpecificPathogenFreeAnimal,SPF）,无菌级动物（GermFreeAnimal,GF）,GB14922.1GB14922.2,实验动物,SPF级动物监测项目,我国实验动物质量要求的最低标准，其它行业、地方标准不能低于国家标准要求。,保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。确保实验数据的准确性和可重复性。,质量监测意义,实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测,实验动物环境设施（2）,实验动物环境与设施GB14925,实验动物设施建筑技术规范GB50447,日常性监督指标温度、日温差、相对湿度、压差；监督性检测指标沉降菌、氨气浓度、噪声、照度；必要时检测指标空气洁净度、换气次数、气流速度、昼夜明暗交替时间。,实验动物营养和饲料（12）,实验动物配合饲料通用质量标准GB14924.1实验动物配合饲料卫生标准GB14924.2实验动物小鼠、大鼠配合饲料GB14924.3实验动物兔配合饲料GB14924.4实验动物豚鼠配合饲料GB14924.5实验动物地鼠配合饲料GB14924.6实验动物犬配合饲料GB14924.7实验动物猴配合饲料GB14924.8,实验动物配合饲料常规营养成分的测定GB/T14924.9实验动物配合饲料氨基酸的测定GB/T14924.10实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定GB/T14924.12实验动物配合饲料维生素的测定GB/T14924.11,笼具（地方标准）,塑料笼箱；隔离器；代谢笼；笼架；层流架；饮水瓶；IVC,动物,编号,外观检查,麻醉,皮肤取样,取血,无菌解剖,检测,检测报告,真菌检查,分离血清，检查病毒抗体或其他病原抗体,气管分泌物、肠内容物、脏器分离细菌,采用抽样检测。检测程序包括监测项目的选定、采样、检测。,采样,要求,方法,成年动物,哨兵动物法（CD1小鼠）,繁殖单元,随机抽样法（例如四角和中央）,检测频率,普通级动物：每三个月至少检测动物一次。,清洁级动物：每三个月至少检测动物一次。,无特定病原体动物：每三个月至少检测动物一次。,无菌动物：每年检测动物一次。每2-4周检查一次动物的生活环境标本和粪便标本。,监测方法,GB/T14926.1-14926.64GB/T18448.1-18448.10,水生实验动物的质量控制,水生生物终生生活在水中，绝大部分体外受精、体外发育，在许多领域得到广泛应用，是毒性试验、环境监测、发育生物学、生理学、生态学、遗传学等研究常用的实验材料。目前还没有质量监测标准，来保障实验用水生生物的质量。,国际斑马鱼研究中心提供974种斑马鱼，主要包括野生型和转基因和基因突变动物。,检测类别,水体质量问题一般检查和剖检细菌疾病寄生虫疾病（原生虫疾病、多细胞寄生虫）非感染性和先天性疾病肿瘤疾病,国内外斑马鱼环境控制指标一览表,水体质量问题（WaterQualityProblems）,铜毒性氯毒性氨毒性亚硝酸盐毒性气泡病（GasBubbleDisease）,铜毒性表现：咳嗽反射、换气次数和氧消耗增加、部分鱼嗜睡或不协调；发育迟缓、畸胎。显微观察：鳃和侧线损伤，肝细胞可能出现空泡。氯毒性鱼对氯很敏感，引起急慢性死亡。表现：鱼鳃严重急性坏死，呼吸困难，头周围出现斑点。显微观察：鱼鳃严重坏死。,氨毒性表现：行为异常（兴奋过度、厌食、生长迟缓，对病原敏感），换气减少。显微观察：鱼鳃上皮增生。亚硝酸盐毒性表现：组织缺氧。,气泡病气体饱和度超过当时温度、盐度和压力条件下的最大值。表现：皮肤、鱼鳍或鳃出现肉眼可见泡沫，眼球后组织也可见明显泡沫，眼球突出。显微观察：组织切片可见泡沫。,一般检查和剖检（GeneralDiagnosticsandNecropsyProtocols）,行为体表检查鱼腮剖检触片（imprints）组织学,行为,摩擦,寄生虫,反常的呼吸模式,腮损伤,旋转或盘旋游泳,神经损伤,另一些疾病迹象（绝食、精神萎靡、待在不正常部位）,体表检查：立体解剖显微镜异常：鱼鳍磨损、眼球混浊、溃疡、褪色、体表寄生虫和肿瘤等制作湿片（Preparewetmounts）：观察寄生虫和其它病原体,鱼腮颜色解剖镜下检查：寄生虫、囊肿、粘液过多和出血等制作湿片：寄生虫、真菌和细菌,剖检：体腔：腹水、出血或其它异常肾脏：肿大、褪色心脏：是否正常内脏器官：白色的囊肿可能感染分支杆菌组织压片：寄生虫、真菌或肉芽肿触片：常用Giemsa或Diff-Quik染色对肾脏或其它感染脏器检查原虫和细菌,组织诊断鱼的整体（通常纵切）或有代表性的脏器进行固定，固定液Dietrichs或Davidson，进行切片，染色镜检。,细菌疾病（BacterialDiseases）,分支杆菌病（Mycobacteriosis）滑动细菌（GlidingBacteria）细菌性喉囊炎（Bacterialaerocystitis）鱼鳔细菌感染,分支杆菌病病原：海分支杆菌、脓肿分支杆菌、龟分支杆菌、偶发分支杆菌、草分支杆菌和嗜血分支杆菌等。临床症状和病变：溃疡、出血、头部周围充血、鱼鳞凸起、鱼鳍磨损、皮肤或鳃苍白等。内脏器官白色结节。显微观察：肉芽肿诊断：抗酸染色、PCR确诊。,滑动细菌（细菌性鳃病、环境性鳃病）病原：黄杆菌属、屈桡杆菌等菌属；淡水鱼主要感染柱状黄杆菌和嗜鳃黄杆菌。临床症状和病变：呼吸困难，鱼鳍和鱼尾表现特征性鱼鳍腐蚀，白色。显微观察：上皮增生，次级鳃瓣融合，有的坏色，病变部位可见大量细菌。诊断：观察到细菌。,细菌性喉囊炎病原：不能确定具体的细菌类型，免疫抑制鱼内脏细菌移植到鱼漂引起疾病。临床症状和病变：嗜睡，聚集鱼池底部。鱼鳍基部出现红斑。显微观察：鱼漂出现大范围损伤和严重慢性炎症。组织切片可见明显坏死，革兰氏染色可见大量细菌群落。诊断：组织切片观察到特征性损伤，多种染色证实细菌的存在。,寄生虫病,天鹅绒疾病（VelvetDisease）微孢子虫病（Microsporidiosis）Ich（白点病）,原生动物疾病（ProtozoanDiseases）,原生动物疾病,天鹅绒疾病病原：淡水天鹅绒（Piscinoodiniumpillulare）鞭毛虫纲，腰鞭毛虫目生活史：腰孢子虫阶段滋养体分裂前体腰孢子虫临床症状：精神萎靡，浮于水体表面，呼吸困难显微观察：皮肤或鱼鳃湿片见滋养体组织切片：鳃感染上皮增生，皮肤感染上皮增生和坏死诊断：切片中见滋养体(卵形的、不透明、无运动能力),微孢子虫病病原：微孢子虫（Microsporidium）（微孢子门、微孢子目），特定种属名：Paeudolomaneurophilia；生活史：专性细胞内寄生，复杂生命周期，产生具有传染性和抵抗性的孢子，通过摄入具有传染性的孢子感染。临床症状：衰弱和脊柱弯曲症状显微观察：中枢神经系统（脊索和后脑）可见孢子诊断：观察到孢子（湿片或切片）,A：衰弱；B：脊柱弯曲,Ich（白点病）病原：多子小瓜虫(Ichthyophthiriusmultifiliis)（纤毛虫纲、膜口目、凹口科）临床症状和病变：粘液过多、呼吸困难和精神萎靡，皮肤凸起的白色节结白点显微观察：皮肤和鳃的湿片可见纤毛虫湿片，组织切片可见上皮增生、滋养体。诊断：湿片见纤毛虫，确诊见到滋养体，寄生部位发现虫体。,体表白点（红大马哈鱼Sockeyesalmon）,腮的湿片（箭头为纤毛虫）,多细胞寄生虫（MetazoanParasites）,毛细线虫病（Capillariasis）肾粘孢子虫病（RenalMyxosporidiosis）,毛细线虫病病原：毛细线虫（蠕虫），Pseudocapillariatomentosa是第一个鉴别的感染斑马鱼的毛细线虫，具有广泛的宿主。临床症状和病变：发黑、衰弱、嗜睡、剖检肝肿大和贫血。显微观察：雌虫肠道湿片充满特殊虫卵湿片，组织切片见蠕虫位于肠壁，感染组织严重蜂窝织炎切片。诊断：椭圆形、具双极囊的卵存在；确诊还需观察到虫体。,肠道湿片,肠道切片,肾粘孢子虫病病原：粘原虫（粘原虫门，粘孢子虫纲），两极虫属（Myxidium）或楚克拉虫属（Zschokkella）生活史：滋养体阶段和多细胞的孢子阶段。鱼吞食孢子或粘附鳃和皮肤感染。临床症状和病变：一般无明显临床症状，可在多个器官中形成包囊。显微观察：病变组织切片见虫体；粘孢子具有特殊极囊（亚甲基兰和吉姆萨等特殊方法染色）。诊断：组织切片观察到虫体。,位于肾小管中滋养体,粘孢子具两个极囊Giemsa染色返回,非感染性和先天性疾病（Non-infectiousorIdiopathicDiseases）,肾钙质沉着症（Nephrocalcinosis）心脏病：心包积液和扩张性心肌病卵相关炎症（Egg-AssociatedInflammation）肝红细胞症（HepaticMegalocytosis）,肾钙质沉着症钙在肾小管和集合管中沉积而成。水中较高CO2浓度（12mg/L）；食物中钙镁较高等。临床症状和病变：一般无明显临床症状。显微观察：组织切片见肾小管和集合管中有嗜碱性、水晶状的沉积物。诊断：肾组织切片中钙的沉积。,钙沉积,心脏病临床症状和病变：心脏区域非常肿胀，切开出现严重出血或大块的血栓显微观察：心包腔中充满血液或蛋白样渗出物；组织切片见心室扩张，充满液体。诊断：剖检心脏出血，组织学确定。,心脏区域凸出,卵相关炎症临床症状和病变：腹部扩张，卵巢成实心、瘤状物，甚至从内到外体表出现白色的溃疡显微观察：严重慢性炎症，纤维素增生，纤维素瘤。诊断：组织学变化。,体侧形成溃疡,肝红细胞症肝细胞的细胞质和细胞核极度扩大。临床症状和病变：无明显临床症状显微观察：组织切片见个别肝细胞的核过度肥大。诊断：发现扩张的肝细胞极度增大的细胞核。,部分肝细胞肿大,肿瘤疾病,精原细胞瘤（Seminoma）肠癌（IntestinalCarcinoma）后腮瘤（UltimobranchialNeoplasia）甲状腺瘤（ThyroidNeoplasia）肝脏肿瘤（HepaticNeoplasia）梭形细胞肉瘤（SpindleCellSarcomas）血管瘤（Hemangiomas）,精原细胞瘤肉眼变化：常见的自发性肿瘤；腹部肿胀，柔软、白色多室性的肿块。显微改变：精母细胞的精原细胞瘤；生殖细胞可分化成不同的发育阶段，甚至有精子形成切片,精原细胞瘤,精原细胞瘤（精母细胞和精子细胞都存在）,2.肠癌肉眼变化：无明显的眼观变化；一些极端病例中，可见内脏团柔软到坚硬，呈棕褐色；大多数发生肠道的前端。显微改变：不同的形态，腺泡肿瘤，小细胞癌等。,3.后鳃瘤肉眼变化：超过1.5岁的雄鱼比较普遍，无明显的眼观变化。显微改变：后鳃腺体积增大50倍；失去细胞结构和腺泡排列。,4.肝脏肿瘤肉眼变化：肿瘤呈柔软白色到棕褐色的肿块，在肝脏上出现单个或多个肝脏肿瘤。显微改变：肝细胞腺瘤分化较好的肝细胞瘤，位于肝板正常位置，形成增殖性肿块；肝细胞癌低分化肝细胞，失去正常肝板位置，周围扩散。,肝细胞癌,6.梭形细胞肉瘤肉眼改变：可能发生在内脏、骨骼肌或发生在眼后引起眼球突出；常呈发白色的、固体状肿块纤维改变：包括纤维肉瘤、平滑肌肉瘤和恶性神经鞘肿瘤等。,梭形细胞肉瘤：眼球突出返回,眼部神经鞘肿瘤返回,7.血管瘤大部分眼部肿瘤属于“梭形细胞肉瘤”眼球后组织毛细血管瘤。,谢谢,2009年7月28日广州南沙,