乙肝患者血清HBV外膜大蛋白与HBV DNA检测的关系及意义

乙肝患者血清HBV外膜大蛋白与HBV DNA检测的关系及意义?2054?检测GPI和RFIgM可以提高RA的诊断率,有较好的临床应用和研究价值.4参考文献1SchallerM,BurtonDR,DitzelHJ.AutoantibodiestoGPIinrheumatoidarthritis:linkagebetweenananimalmodeandhumandiseaseJ.NatImmunol,2001,2(8):746.2KimJY,LeeMH,JungKI,eta1.Detectionofanitibodiesagainstglucose6phosphateisomeraseinsynovialfluidofrheu?-matoidarthritisusingsurfaceplasmonresonanceJ.ExpMolMed,2003,35(4):310.3SchubeaD,SchmidtM,EaissD,eta1.AutoantibodiestoGPIandCreatineKinaseinRAJ.NatImmunol,2002,3(5):411.4KassahnD,KolbC,So!monS,eta1.FewhumanautoimmuneseradetectGPIJ.NatImmumol,2002,3(5):411.5JouenF,VittecoqO,LegnillouF,eta1.Diagnosticandprognosticvaluesofantiglucose6phosphateisomeraseanti-bodiesincommunityrecruitedpatientswithveryearlyarthritisJ.ClinExpImmunol,2004,137(3):606.6MatsumotoI,LeeDM,GoldbachManskyR,eta1.Lowprevalenceofantibodiestoglucose6phosphateisomeraseinpatientswithrheumatoidarthritisandaspectrumofotherchronic乙肝患者血清HBV外膜吉林医学2009年9月第3O卷第18期autoimmunedisordersJ.ArthritisRheum,2003,48(4):944.7HerveCA,WaitR,VenablesPJ.Glucose一6一phosphateisomeraseisnotaspecificautoantigeninrheumatoidarthritisJ.Rheumatology(Oxford),2003,42(8):986.8KouskoffV,KorganowAS,DuchatelleV,eta1.OrganspecificdiseaseprovokedbysystemicautoimmunityJ.Cell,1996,87(5):811.9SchallerM,StohlW,BenoitV,eta1.PatientswithinflammarionarthriticdiseasesharborelevatedseFulnandsynovialfluidleveloffreeandimmuneeomplexedglucose一6一phosphatedisomerase(G6PI)J.BiochemBiophyResCommun,2006,349(2):838.1O鲍春德,叶萍,陈晓翔,等.血清中6一磷酸葡萄糖异构酶抗原升高在类风湿性关节炎中的意义探讨J.中华风湿病学杂志,2005,9(5):277.11何东仪,钟丽民,沈杰,等.葡萄糖6一磷酸异构酶检测在类风湿关节炎中的意义J.现代免疫学,2008,28(4):326.12董建玲,杨南萍,张杰,等.葡萄糖一6一磷酸异构酶抗原对类风湿关节炎诊断的意义J.中华风湿病学杂志,2009,13(4):263.收稿13期:20090711编校:杨宇大蛋白与HBVDNA李军(长钢总医院检验科,四川江油621701)检测的关系及意义摘要目的:通过对乙型肝炎(简称乙肝)患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBVLP)和HBVDNA的检测,探讨二者在判断乙肝病情和HBV复制情况时的相关性及其在临床上的意义.方法:采用荧光定量PCR方法对238份乙肝患者血清HBVDNA进行检测,采用酶联免疫吸附(ELISA)试验,对上述标本进行HBVLP和HBV血清免疫学标志物(HBVM)模式的检测.结果:HBVLP检出度与HBVDNA的检出度差异有统计学意义(P<0.05),不同HBVM模式的HBVDNA与HBVLP的检出结果差异有统计学意义(P<0.05),但HBVDNA拷贝数与HBVLP的表达相关性差异有统计学意义(r=0.677,P<0.05).结论:血清中HBVLP的含量与HBVDNA的拷贝数具有较好的相关性,但HBVLP尚不能完全代替HBVDNA的检测来反映HBV复制情况.关键词】乙型肝炎;乙肝病毒外膜大蛋白;HBVDNA;乙肝病毒标志物InvestigationoftherelationbetweenserumhepatitisBviruslargeproteinandHBV-?DNAinpatientswithhepatitisBLIJun(ChanggangGeneralHospital,Jiangyou621701,China)Abstract:0bjectiveToapproachthedependabilitybetweenthesignificanceofhepatitisBviruslargeprotein(HBVLP)andHBVDNA.MethodSerumHBVDNAlevelwasquantitativelydetectedusingrealtimepolymersechainreaction,HBVLPandHBVmarkersexpressionweremeasuredbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELLSA)in238casesofinfectedseruu1.ResultsTherewassignificantdifferencebetweenthelevelofHBVDNAandHBVLP(P<0.05).TheexpressionofHBVDNAandHBVLPhadsig-nificantdifferenceamongvariouspatternsofHBVserologicalmarkers(P<0.05).HBVLPexpressionwasmerelycorrelatedwiththelog-吉林医学2009年9月第30卷第18期?2055?afithmofHBVDNAlevel(r=0.677,P<0.001).ConclusionThereisaprefectcorrelationbetweenthecopiesofHBVDNAandthelevelofHBVLPexpressionstillcannotreflectthereplicationofHBV.KeyWords:HepatitisB;HepatitisBviruslargeprotein;HBVDNA;HBVmarkel8乙型肝炎(简称乙肝)是我国发病率较高的传染病,已成为危害广大人民群众健康的社会公众性问题.长期以来,临床上检测HBV及其复制情况的方法主要有酶免疫法测HBV血清标志物和PCR法测定HBVDNA.HBVS基因编码合成的HBV外膜蛋白由三种蛋白组成,包括主蛋白(即HBsAg),中蛋白(即HBsAg和PreS蛋白)和大蛋白(即HBsAg,PreS蛋白和PreS蛋白)J.近年来随着对乙肝表面抗原大蛋白中前S区抗原在乙肝发病机制,感染与复制等方面研究的深入,研究者们逐渐认识到乙肝表面抗原前S区具有越来越重要的临床意义.由于大蛋白是构象蛋白,PreS抗原作为大蛋白的一部分,无法模拟其拓扑结构,在制作单克隆抗体时其序列会被折叠,卷曲而失去暴露表位的机会.这样低级结构抗原制作出来的单克隆抗体检测可能会导致漏检.因此,笔者利用构象型前S区的高亲和力,高特异性的单抗体检测乙肝病毒外膜大蛋白(HBVLP),对238例乙肝患者血清进行检测,探讨HBVLP与乙肝病毒复制的关系及其临床意义.1材料与方法1.1材料:收集2007年12月一2008年12月间我院门诊和住院的乙型肝炎患者血清标本238例,其中男144例,女94例,年龄1556岁.全部病例均符合病毒性肝炎防治方案中乙型肝炎病原学诊断标准J.所有标本静脉抽血分离血清后于一20qC保存.1.2方法:HBV核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒购自深圳匹基生物工程有限公司;乙肝血清标志物检测酶标试剂盒购自上海复星长征医学科学有限公司;HBVLP的单克隆抗体酶标试剂盒由北京热景康生物技术有限公司提供.乙肝血清标志物和HBVLP的检测严格按照试剂说明书操作.1.3仪器:酶标法采用深圳雷杜电子有限公司的RT一2100C自动酶免疫分析仪测定;PCR法采用美国ABI公司的700自动荧光PCR分析仪.1.4统计学处理:HBVLP与HBVDNA的检出率用配对资料检验;不同乙肝病毒血清标志物中HBVDNA阳性率与大蛋白阳性率的比较采行X列表的检验;HBVLP含量与HBVDNAR拷贝数的相关性分析用直线相关分析.2结果2.1大蛋白阳性率与HBVDNA阳性率的比较:笔者检测了238份HBV感染者血清,其中HBVDNA阳性的为176份,阳性率为73.9%;HBVDNA阴性的62份,其血清标志阳性,符合诊断标志j,但检测HBVDNA拷贝数低于阳性标准.大蛋白的阳性例数为202份,总阳性率为84.9%.大蛋白的检测结果与HBVDNA的检测结果经配对卡方检验,两者检出率差异有统计学意义(P<0.05).虽然二者的阳性检出率差异有统计学意义,但二者均具有较高的阳性检出率.详见表1.2.2不同乙肝病毒血清标志物模式中HBVDNA与HBVLP的检测结果比较:见表2.经统计学分析两者检出率差异有统计学意义(P<0.05).不同的HBVM模式中HBVDNA和HBVLP的检出率不同,由表2可见HBsAg和HBeAg同时阳性者的DNAT和HBVLP均有较高的阳性率,HBeAg阴性者DNA和HBVLP的阳性率都很低.表1大蛋白阳性率与HBVDNA阳性率的比较(例)表2不同乙肝病毒血清标志物中HBVDNA与HBVLP的检测结果比较例(%)2.3HBVDNA与HBVLP的相关性HBVDNA拷贝数的对数值与HBVLPA值的结果:见表3.经相关性分析,二者的相关系数r=0.677,P<0.001.从表3也可见HBVDNA拷贝数的对数值与HBVLPA值具有一定的相关关系.3讨论MichaelBmns等通过研究鸭乙肝病毒发现,含有嗜肝病毒血清的感染性不仅依赖于具感染性的病毒颗(Dane氏颗粒)的多少,而且还依赖于缺乏核酸的亚病毒颗的数量.研究?2056?表3不同HBVDNA拷贝数的对数值与HBVLPA值的比较发现亚病毒颗在HBV感染过程中,能显着增强细胞内的病毒复制和基因表达,而这种增强作用是由HBVLP前S区的反式激活作用所触发的FooNC证明HBVLP是导致肝细胞损伤,死亡和纤维化病变的主要原因,因此检测HBVLP对反映病毒复制情况和预后具有重要的临床意义.HBVDNA定量检测是直接对HBV的遗传物质DNA进行基因扩增,是病毒复制存在的最早期,最灵敏也是最可靠的指标,可对HBV感染作出早期诊断,也可用于判断乙肝患者传染性高低.由于DNA的检测要特殊条件,对不具备HBVDNA检测条件的基层医院,由于无法判定HBV的复制情况,给临床治疗方案的确定带来很大的困难.HBVLP的检测不需要特殊的设备,适合各级医院开展.本文通过对HBVLP的研究,以期找到合适的替代方法.通过对238例乙肝患者的检测,检出的HBVLP的总阳性率为84.9%,与孙颖等检出的阳性率(79.4%)相近,但与HBVDNA的阳性率(73.9%)相比二者阳性率相近,但HBVLP的阳性率稍高,经配对检验P<0.05,说明HBVDNA和HBVLP的检出率还存在一定的差异.二者在定性检测方面,HVCLP的阳性率稍高于DNA,还不能与HBVDNA的阳性率完全一致.这种差异是由于方法学不同,检测的成份和特异性不同造成的,并不足以说明HBVLP的检测更敏感,对此还有待进一步研究.二者在定量检测的相关性研究中,由表3可得HBVLPA值与HBVDNA拷贝数的对数有较好的相关关系.从表3也能清楚地看出HBVLPA值随HBVDNA拷贝数的增加而增加,HBVLP的阳性率也随之增加.可以认为使用酶联免疫定量法检测得出的HBVLPA值一HBVDNA定量检测有良好的一致性,能较可靠地反映HBV复制情况,可以作为HBV感染,复制和乙肝患者诊断,治疗和预后的重要参考物,具有较好的临床应用价值,适用于广大基层医院开展,而HBVLP能否完全或基本代替HBVDNA的检测,则有待进一步的探讨.不同的乙肝血清学标志物模式中,HBVDNA的检测,则吉林医学2009年9月第3O卷第18期有待进一步的探讨.不同的乙肝血清学标志物模式中,HBVDNA和HBVLP的阳性率有不同的表现,如表2,其中HBsAgtHBeAg同时阳性者的DNA-和HBVLP均有较高的阳性率,阳性率分别为97%和95%,二者阳性率相近;HBeAg阴性者DNA和HBVLP的阳性率都较低,阳性率分别为59%和77%.由此可以说明,HBeAg的存在与HBV的复制程度有密切的关系.但由于乙肝两对半的血清免疫学标志物检查方法的灵敏度,特异性的限制以及HBV为逃避宿主的免疫反应常发生变异,导致其检测结果失真,出现假阴性.表2中HBeAg阴性乙肝患者DNA和HBVLP也有一定数值的阳性率,提示HBeAg阴性慢性乙肝患者中确实有很大部分口患者体内仍然存在HBV的复制.用HBV一/2检测能够反映HBeAg阴性乙肝患者体内HBV的复制情况,弥补目前两对半检测的不足,也是HBVDNA检测的一个有益补充.而目前临床是否能把HBeAg阴性作为无病毒复制的标准还值得探讨,需进一步检测DNA和HBVLP,对无条件做基因检测的医院,HBVLP的检测是目前较理想的检测方法.4参考文献1BrussV,GerhardtE,VielufK,eta1.FunctionsofthelargehepatitisBvirus8urfaeeproreininviralparticlemorphogenesisJ.Interavirology,1996,9(1):23.2BrussV,VielufK.FunctionsoftheinternalpreSdomainofthelargesurfaceproteininhepatitisBvirusparticlemorphogenesisJ.JVirol,1.995,69(11):6652.3BrussV.EnvelopmentofhepatitisBvirusnucleocapsidJ.VirusRes,2004,106(2):199.4LambertC,MannS,PrangeR.Assessmentofdeterminanrsaffectingthedualtopologyofhepadnavirallargeenvelopepro?teinsJ.JouranalofGeneralVirology,2004,85(Pt5):1221.5中华医学会传染病与寄生虫病学分会,肝病学分会联合修订,病毒性肝炎防治方案J.中华传染病杂志,2001,19(1):56.6BrunsM,MiskaS,Chassots,eta1.Enhancementofhepati-tisBJ.JVirol,1998,72(2):1462.7FoeNC,AhnBY,MaX.CenulvaeuolizarlonandapoptosisinducedbyhepatitisBvireslargesurfaceproteinJ.JVirol,1998,75(2):1462.8孙颖,辛绍杰,雷厉,等.乙肝病毒外膜大蛋白检测对判定HBVDNA复制的意义J.世界华人消化杂志,2006,14(3):354.收稿日期:20081011编校:王丽娜