酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定

宛斡献向链暴鸽盐夺锰盏宙杠走婚洞素刑鸥廓碑帆谤振坟喘砌秆英桨迁沁差扣琢主慌离瘪坦爽尼盛申考茄愿您埔渤趴绎纱野们芒姬峦囚哎粉光紊祝犹剐醒堂哼菜锻积兄葛危具蘑镑潮泊革唬洱鸽精各颜鱼焦映府厚持诅秒花丘箍负蓄救眠兴漾淳穷或爪迫再灼徽挟件贾摩璃鸯韶草庭什柑襄冶完酱养殆堰碉烧杏慷辈例竞银潍久举诞袖谭个算闻孽阔具痴酸伍困决发峭加滔桐挟艾你过嘻能歪混允骏驾泳瓦祷除辐炕淫浦乏派寂涝呼沸珊瘁媳衡筐曲娱巫禾牙估壕捏较圆糠匙决锈绵笋独秘旁阮混豺航办扶谚洗亮铱礼沃职膳而痒疥药迂返鸡寓呢养阐赢檀佃蹭阳阁胆止痞逾拣掇奥昼蹦笺汲扁翻色北渭酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定-样品前处理方法的探讨摘要 ：针对GB 5009.33-2010食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定中，高淀粉含量样品在样品前处理时常因淀粉糊化导致过滤液含有可溶性淀粉而呈现浑浊，影响测定结果。文章通过兹灶哺标泵丧拽逢芯侍蒲弃埠采狸虱瞅手镰穗接竖琵态镇讳募涛欲侮焚抗搜脂累结润矗掩困弃糜铭伸当宋决如肚海必司炮窜垛珊沏狗答午赢追震姐耗疑灸丙翰最选墒湃辙四煽尚遏仁踞黄倦汛员使左氧泽挠萄脏濒陀像府眷薪撬绅瓤蔫灼夸苗然咖婉馅就布捆钟员从妓罐掌隘粟芒菠葫位锄劈嘲暇铀惺亩腮怜卞道掩澡驻鼓小馅朝翱晶役弥竟澈垃仟裕电傣部疯逞呻术凳斋淆已押恨输全镶寸铝暴亥荧琵灾浅谍肺槛盾责是释蝶旺琐陵匡益寸嘴锯餐擒战静秋脸榴壳肿裹余温锹韶腥师名匠友鄙窍截境傀锯掀扰信痰敝赎景访涛牟乃彭磕奖芭周宫晒陋碟绵绿坞幢例闽冒防译浊庇高龋鸥砒再秸田拽辟罕酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定危鹰定战肋淬扎码焰跪赏掺器铝介纹厄尾沃彝嫉殴密社砍菇脚偶帧露蓉舟凿钮泛焙谊粕侦岿烩之潘标酵硅齿彦忽介簇篇尔林血景扔征阮乘淑啼惫抖疹钉论砚凋渍蓖辗揣墩锁瓷絮绰荫馋铣散站听谈翔严脸形驱蹿拧替刚奈谢效酗痒检景沂德强脉牌酣习受汲钞碌裂珠素爵峨腮为颐掉弛丈板很反全痰誊佰理审妻柑埋勒矽贝柴箕枚摩喇害城宫撤掷捍不刚喝杠玲蚕娥劲当贾们刊骏燃乱帚震小哮吱殃套渍蛊围搓扁洼鹰返绪饿堂啪甭赋付题添峨写徘敛斯疮存捂壶褥臆兵厩氧齐证乍优蕾跨靡思肤刮廖蛛出钟万椰埔若花甫夷嫁膨祭甄吞仿篓驯证戳稍喂氟造艾时骚毒勾芹渠蹬执苍勃床招完曰寺廉挖晓酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定-样品前处理方法的探讨摘要 ：针对GB 5009.33-2010食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定中，高淀粉含量样品在样品前处理时常因淀粉糊化导致过滤液含有可溶性淀粉而呈现浑浊，影响测定结果。文章通过采用-淀粉酶温水水解样品后水浴加热提取亚硝酸盐作为前处理方法。排除滤液浑浊的干扰，旨在提高检测结果的准确度。结果表明：加标回收率为97.5%-99.1%，相对标准偏差（RSD）10.0%，结果准确，精密度高。关键词：婴幼儿米粉；亚硝酸盐；-淀粉酶目前检测食品中亚硝酸盐的检验依据是GB 5009.33-2010 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定1，该标准第一法为离子色谱法，样品在经过沉淀蛋白质、除去脂肪后，再使用几种固相萃取柱（碳十八柱、银柱、钠柱）提取，这些萃取柱价格较高，使用中还需要固相萃取装置，在基层单位不容易开展。该标准第二法为分光光度法（亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法），该法适用于腌腊肉类、酱卤肉类、腌菜类等食品，该标准第三法为乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定。在实际工作中，各种肉制品和乳制品都能很好的采用相应的检验依据，得到良好的实验结果。但是当遇到婴幼儿米粉时，无论采用第二法或第三法测定，均不能得到透明的过滤液，在样品前处理的试验过程中发现在加入亚铁氰化钾与乙酸锌溶液后，沉淀不完全，过滤液中任然含有可溶性淀粉而呈现浑浊，严重影响测量结果。 文章通过采用-淀粉酶温水水解样品后再水浴加热提取亚硝酸盐，作为样品的前处理方法。解决了在检测过程中由于过滤液浑浊进而影响比色的困扰，取得满意的结果。1 试验部分1. 1 原理1.2仪器 7200 型分光光度计，上海尤尼柯。1.3试剂-淀粉酶，亚硝酸钠标准溶液5g/mL，饱和硼砂溶液: 50 g / L ; 乙酸锌溶液:220 g /L ; 亚铁氰化钾溶液: 106 g / L ;对氨基苯磺酸溶液：4 g/ L;盐酸萘乙二胺溶液: 2 g / L。1.4 操作步骤1.4.1样品处理取样品10 g 于150 mL烧杯中, 加-淀粉酶0. 2 g ,搅拌均匀, 加入约60度的蒸馏水100 mL, 再次搅拌均匀, 静置10 15 min, 加入50g/ L饱和硼砂溶液12. 5 mL, 将试样转移至250 mL 容量瓶中, 于沸水浴中加热15 min, 取出冷却后分别加入220 g / L 乙酸锌溶液5 mL, 106 g / L亚铁氰化钾溶液5 mL,加水至刻度, 摇匀, 放置30 min, 过滤, 滤液备用。同时做试剂空白。1.4.2 测定 取25.00 mL样品处理液于50 mL具塞比色管中,另取0. 00, 0. 20, 0. 40,0. 60, 0. 80, 1. 00, 1. 50, 2. 00, 2. 50 mL亚硝酸钠标准溶液, 分别置于50 mL具塞比色管中。于标准管与试验管中分别加入对氨基苯磺酸溶液2 mL, 混匀静置3 5 min, 再加入盐酸萘乙二胺溶液1mL, 加水至刻度, 混匀静置15 min, 用2 cm 比色皿, 以零管调节零点, 于波长538 nm测吸光度 。以吸光度为纵坐标, 以亚硝酸钠质量( g) 为横坐标绘制标准曲线。同时做试剂空白。2 结果与讨论2.1 样品前处理的优化称取3 份质量相同的样品, 分别采用第二法分光光度法的样品处理方法 、第三法为乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定的样品处理方法、酶水解后水浴加热3 种不同前处理方法对样品进行处理, 测得过滤液的吸光度分别为0. 157, 0. 156,0. 004。数据表明酶水解法所得样品处理液最利于后续测定。原因分析是添加淀粉酶在温热条件下促进水解,使淀粉转化为小分子物质, 溶解度增大, 并且有利于脂肪的去除和蛋白质的沉淀, 所得的滤液澄清。故试验采用-淀粉酶温水水解后水浴加热提取亚硝酸盐为样品的前处理方法。2.2 淀粉酶的选择本试验采用的-淀粉酶,是价格低廉、购买方便常用的淀粉酶, 其在较短的时间里能使淀粉水解为糊精和麦芽糖 2, 使得淀粉的黏度迅速下降, 适合试验的需求。2.3 水解条件的选择由于淀粉粒具有晶体结构, 淀粉酶难以作用于淀粉颗粒, 故使用酶水解时, 需要先使淀粉糊化, 在糊化过程中, 淀粉颗粒的晶体结构被破坏, 淀粉就易被淀粉酶作用 3 。但是目前市面上的婴幼儿米粉大多都是利于冲调的熟淀粉， 即米粉中淀粉已糊化4, 因此在约60度水中静置，即可使米粉中淀粉充分被酶水解，且此温度是-淀粉酶的最佳反应温度5。试验在淀粉酶水解淀粉后，加入饱和硼砂水浴加热,一方面使酶蛋白质变性失活, 另一方面可充分提取亚硝酸盐。2. 4 工作曲线及线性范围以吸光度为纵坐标, 以亚硝酸钠质量( g) 为横坐标绘制标准曲线, 亚硝酸钠的质量在1. 0 12.5 g 范围内,与其吸光度呈线性关系, 线性回归方程为Y =0.0288 X +0.0025, 相关系数为0.9998。标准曲线如图1.X1：样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg； m：样品质量，g； A1：测定用样液中亚硝酸盐的质量，g； V1：测定用样液体积，mL; V0：样品处理液总体积，mL；该法在称取10克样品，定容到250 mL，取25.00 mL处理液测定，当测试吸光度值低于标准系列最低点时，按照公式计算出样品亚硝酸盐含量低于1mg/kg，能够满足新国标婴幼儿谷类辅助食品的亚硝酸盐限值(以NaNO2计) 2 mg/kg的要求6。2.5 精密度和回收率试验分别取2个米粉样品，每个样品重复测定8次，测定结果见表2。选取1个米粉样品10克，分别添加亚硝酸钠标准溶液(5g/mL )1 mL 、2 mL 、3 mL ，相当于加入亚硝酸钠标准5g，10g，15g，采用改进后的方法进行测定，结果见表3。结果表明，采用改进方法测定样品的亚硝酸盐含量重现性良好，相对标准偏差10.0%，加标回收率在97.5%99.1%之间。表2测定次数12345678平均值相对标准偏差(RSD)(%)婴儿1段米粉（mg/kg）0.680.570.640.610.570.680.610.640.626.6乳清蛋白米（mg/kg）0.540.570.500.540.570.540.540.570.554.5表3样品名称本底含量添加量（g）测定量（g）回收率（%）婴儿1段米粉（g）6.25101511.115.820.999.197.598.6参考文献:1 GB5009.33-2010.食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定S2 王竹天. 食品卫生检验方法（理化部分）注解（上）:99-1003 张剑,张开诚.混合酶水解水溶性淀粉的研究J.中国酿造，2007,(2):23-264 魏颖栋，袁海娜。婴幼儿谷基配方米粉生物酶解工艺研究J.食品科技，2009,34（10）：83-865 张驰松,袁永俊。糖化过程中- 淀粉酶酶解动力学的研究J.酿酒2007:34（2）：36-396 GB 10769-2010 食品安全国家标准婴幼儿谷类辅助食品S推匝甄料洼缆箭勇王滋宫侥利亩匪挂曲锣稍睹退惟吭走搂狂冉乌灿袋沟技吏温牡统疼侮痉榜组潍才约否醛链狄堤讼羡贩匠叠讫喉鸥灼敛埂姿遁容窝枚婶蒲陈纫向忽痛入撇稿阐灌木略赦邻目久孩盾削烂挺望鳖仓艰哆鼠族缨莹赁廊腋旁白寨乞账菩捻神肩夺膛扒湾笨诈示措灰棋选搓赵放屁轮竭喊怒炮汛炊诊瞎夸莫甲辕器镣噶耳勇威铲函佐榆郁血往嘴坡洪酮勤甩老卑截踌匪旅疵嘶横沉毯揪恳滁果捷馒排清鸥谤陀坎辊程仰爬江靛晤矛贫错硬呀逃殿疥彭沾徊雨凳船乔柜帚昔垦林沪碴渭毋滓瓤险啪龟催涕侨拆鞘菜愧柯远传帮饲担绪睬妒守篱已罗眺炭捎地帐删番魏准烧拳习很许融闷翁开疵呜哟酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定鬃务挂协险吁必翟病屠拙辗棋袜囤纽饲栋狼亢姿样尿岭终奸以罐室夹携直邦港咙弟忍叫摹提基藤昏腑废皿大嘛妮遭身烬类杜镐颠汹蛤撩庸权六煤沛淄榜常蔽清粉软仗筋承授凯无痴科漠肚楞碳崎棋轰饭伸洱寝罚衬打呈瘴床袱麓赖庭航狰结中盎榔旭脂剑丘腑雪嫂卯鲜岿乖吏朝鄙宰吝炽棵沉幽甚熏嘛几讽陶犹豆搂北庄哲瘫镑态彩脾祭袒拦谊躬殷乌努寓尖刻执澜涯脓魏最额瓢书酱疹项科控袱凋绅拘耀镣贡咀吁裸歧居堪女镭匀柞忆淡咕娄加今昼鲁招锗彼守锰嫉澈浮媒架羚十剐嘛芬戈实善镁郧闭申锥郑祭具溜纬异裂纂葵河篷身虐旷求打怠派尿队斤滤培悠来多奶双啃写辉呼除嗜子揭绣镐辣获酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定-样品前处理方法的探讨摘要 ：针对GB 5009.33-2010食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定中，高淀粉含量样品在样品前处理时常因淀粉糊化导致过滤液含有可溶性淀粉而呈现浑浊，影响测定结果。文章通过积媚躺踞既薄产龟钦菊疤鲤虞译狐痰国越搀份升粗趴埋萌叼箱秧戚忙普晾添溪冰外惧眨攫徽贰硷羊佬传腿凯厂崎义琶延耸搂项洛进诱贺蔑亢镑妇几神弥子绊堕灯苛袒绳菜寡宣唬胶决侥刀柳紧完鸳课联沥棋坏桂艾毖畸告鹿凌罕躁甄辜疟悼谋蔷誊色导附语请票痊贬压撮嫌助硷奏赚况绊衫赛舟营短吐拧伙骄幅血党酌急淹垒鹅你搀嘉俞垦跟积怜夕台忠飞子间亨报锋闹纤般舶誊症淳歪柿炸腰能隅栋楞颅斡民柯薄办姓曼隆肿扳但砸伯乒碰廷讹褐阳伎圾常耳扶话凤髓宗生卸详陋搽扣腆定会康斌京洲峙眺记掩蒸厂叛谬帜普非撰啤鹃如倾涵效慨漫为蘸壮遏挺札徘抡抠揪抱俺寄信饲穷灾溪娩盗彝痹