高中生物 专题五 课题2 多聚酶链式反应扩增dna片段课件 新人教版

参与的组分在 DNA 复制中的作用解旋酶_DNA 母链_课题 2 2多聚酶链式反应扩增 DNA DNA 片段生物体内的 DNA 复制细胞核1DNA 复制的场所是_。2参与 DNA 复制的组成成分与反应条件打开 DNA 双链提供 DNA 复制的模板参与的组分在 DNA 复制中的作用_合成子链的原料DNA 聚合酶_引物_续表4 种脱氧核苷酸催化合成 DNA 子链使 DNA 聚合酶能够从引物的 3端开始连接脱氧核苷酸PCR 扩增技术1概念DNAPCR 技 术 是 _ 的 简 称 ， 是 一 种 在_ 进行的迅速扩增 DNA 的技术。它能够以极少量的_为模板在短时间内复制出上百万份。2PCR 反应过程(1)变性。(2)复性。(3)延伸。3结果两个引物DNA 聚合酶只能特异性地复制在_之间的DNA 序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。多聚酶链式反应体外DNA 含量测定1原理：利用 DNA 在_的紫外线波段的吸收峰曲线来测定相应含量。260 nm2 计算公式 ：DNA 含 量 (g/mL) 50(260 nm 读数)(_)。稀释倍数体内复制PCR 扩增解旋方式在解旋酶的作用下，细胞提供能量，部分解旋加热至 90 左右，双链全部解开，不需要解旋酶引物一小段 RNARNA 或者单链 DNA合成子链在引物的基础上，一条链连续合成，另一条不连续合成分别从两条链的引物端开始，连续合成，控制温度条件在 72 特点边解旋边复制，半保留复制在体外迅速扩增DNA 聚合酶不需要耐高温聚合酶耐高温的 TaqDNA 聚合酶循环次数受生物自身控制30 多次相同点两者都需要模板、四种脱氧核苷酸，都需要酶和能量，需要一定缓冲溶液环境DNA 的体内复制与 PCR 扩增的区别与联系PCR 技术的原理及过程1PCR 原理PCR 技术利用了 DNA 的热变性原理：在 80100的范围内，DNA 的双螺旋结构解体，双链分开，当温度缓慢降低时，两条彼此分离的 DNA 链又会重新结合成双链。2PCR 的反应过程(1)变性：当温度上升到 90 以上时，双链 DNA 解旋为单链。(2)复性：温度下降为 50 左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链 DNA 结合。(3)延伸：当温度上升至 72 左右时，四种脱氧核苷酸在DNA 聚合酶的作用下，合成新的 DNA 链。3PCR 反应的条件(1)稳定的缓冲液环境。(2)DNA 模板。(3)分别与模板 DNA 两条模板链相结合的引物。(4)A、T、C、G 四种脱氧核苷酸。(5)耐热的 DNA 聚合酶，一般用 TaqDNA 聚合酶。(6)能严格控制温度变化的温控设施。PCR 扩增技术与 DNA 体内复制的区别【例 1 】下列属于 PCR 扩增区别于 DNA 体内复制的是()需要解旋酶 需要引物 常温常压下进行以四种脱氧核苷酸为原料需要耐高温的 TaqDNA 聚合酶边解旋边复制可以短时间得到大量拷贝需要模板ACBD【名师点拨】：体内复制与 PCR 扩增既有区别又有联系，PCR 体外扩增概念很明确，在体外，加热解旋，因此需要耐高温的 TaqDNA 聚合酶，它能以极少量的 DNA 为模板，在几小时内复制出上百万份的 DNA。【答案】：C【配对练习 1】真核生物细胞质中也有 DNA，例如叶绿体、线粒体等，关于细胞质 DNA 复制不正确的是()A需要解旋酶B需要 DNA 聚合酶C两条链同时复制只有一个起点D不是半保留复制解析：真核生物细胞质中 DNA 复制需要解旋酶、DNA 聚合酶、两条链同时复制只有一个起点，是半保留复制。答案：DPCR 扩增的条件【例 2】PCR 扩增包括三个环节，变性、复性(退火)、延伸，这三步的温度依次是()A94 、55 、72 B72 、55 、94 C55 、94 、72 D80 、60 、72 【名师点拨】：PCR 扩增的原理就是利用 DNA 耐高温的特性，使 DNA 在 94 左右双链解螺旋，然后在低温(3755 )的情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链 DNA模板结合，形成部分双链；在 TaqDNA 聚合酶的最适温度(72 )下，以引物 3端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板从子链的 53方向延伸，合成 DNA 新链。【答案】：A【配对练习 2】在下面哪个温度范围内，DNA 双螺旋结构解开()A1020 B80100 C2030 D4060 解析：PCR 扩增在 80100 温度范围内，DNA 双螺旋结构解开。 答案： B