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课题课题1 1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养微生物的实验微生物的实验室培养条件：室培养条件：合合适的营养和环境条件适的营养和环境条件确确保其他微生物无法混保其他微生物无法混入入一一. . 培养基培养基 1. 1. 概念：概念： 按按照微生物对照微生物对营养物质营养物质的不同的不同需求，配制出供其生长繁殖的营需求，配制出供其生长繁殖的营养基养基质。质。 需要加入琼脂（凝固剂）需要加入琼脂（凝固剂） 多糖多糖2. 2. 种类：种类：按按物理形物理形态分态分液体培养基、半固体培养基液体培养基、半固体培养基固体培养基固体培养基应用微生物分离、鉴定、计数和应用微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面菌种保存等方面 按照培养基按照培养基用途（功能）分用途（功能）分 基础培养基基础培养基选择培选择培养基养基鉴别培养基鉴别培养基按照培养基的成分来分按照培养基的成分来分 合成培养基、天然培养基、半合成培养基合成培养基、天然培养基、半合成培养基各自优缺点？各自优缺点？选择培养基选择培养基不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : 分离自养型微生物分离自养型微生物加入四环素等抗生素的培养基加入四环素等抗生素的培养基: : 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基培养基: : 分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄分离金黄色葡萄球菌球菌从成分上判断：从成分上判断：牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基麦芽汁培养基麦芽汁培养基葡萄糖铵盐培养基葡萄糖铵盐培养基马铃薯蔗糖培养基马铃薯蔗糖培养基天然培养基天然培养基天然培养基天然培养基合成养基合成养基半合成养基半合成养基3. 3. 成分：成分：水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）+满足微生物对满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的、特殊营养物质、氧气的要求要求培养乳酸菌培养乳酸菌 添加添加 维生素维生素培养霉菌培养霉菌 PH调至调至 酸性酸性培养细菌培养细菌 PH调至调至 中性或微碱中性或微碱CC二二. 无菌技术无菌技术1.1.无无菌菌技术技术2.2.消消毒和灭菌有何不同？毒和灭菌有何不同？泛泛指培养微生物操作中，所有防指培养微生物操作中，所有防 止杂菌污染的方法。止杂菌污染的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。被微生物感染。3. 3. 常用的常用的消毒消毒方法：方法：煮沸消煮沸消毒法毒法巴巴氏消氏消毒法毒法紫外线紫外线化化学药剂消毒法学药剂消毒法70-7570-75 3030分钟分钟8080 15 15分钟分钟 牛牛奶奶 接种室、接种箱或超净工作台接种室、接种箱或超净工作台 酒精、氯气（水）酒精、氯气（水） 接种环接种环接种针接种针4.常常用的用的灭菌灭菌方法：方法：灼烧灼烧灭菌灭菌干热灭菌干热灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 培养基培养基 100kPa 121 100kPa 121 15-30min 15-30min 接接种环、接种环、接种针、试管口、瓶口种针、试管口、瓶口 玻璃器玻璃器皿和金属皿和金属 判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。选择合适方法。1 1）豆浆）豆浆 2 2）游泳池）游泳池 3 3）超净工作台）超净工作台 4 4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 5 5）培养细菌用的培养皿）培养细菌用的培养皿 6 6）无菌水）无菌水 7 7）牛肉膏蛋白胨培养基）牛肉膏蛋白胨培养基8 8）接种环、接种针）接种环、接种针9 9）实验操作者的双手）实验操作者的双手计算、称量计算、称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板（分装）倒平板（分装）接种（方法）接种（方法）培养培养保存保存制备培制备培养基养基纯化纯化细菌细菌调节调节PHPH4 4、倒平板、倒平板冷冷却至却至50501 1、为什么需要使锥形瓶口通过火焰？、为什么需要使锥形瓶口通过火焰？2 2、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？3、如何知道灭菌后的培养基是否还有、如何知道灭菌后的培养基是否还有杂菌？杂菌？4、接种细菌后，培养基还需倒置培养、接种细菌后，培养基还需倒置培养吗？吗？复习：复习：1 1、按照用途分培养基可分为哪几类？、按照用途分培养基可分为哪几类？ 其中添加青霉素的培养基为哪种类其中添加青霉素的培养基为哪种类型？添加伊红型？添加伊红美蓝的为哪种培养基？美蓝的为哪种培养基？2 2、培养基的成分都含有哪些？、培养基的成分都含有哪些？3 3、配制培养基时是先调节、配制培养基时是先调节PHPH值，还是值，还是先灭菌？先灭菌？4 4、无菌操作是如何实现的？、无菌操作是如何实现的？5 5、接种：、接种： 方法方法 接种针接种针 穿刺接种穿刺接种 接种环接种环 平板划线平板划线法法 玻璃刮铲玻璃刮铲 稀释涂布稀释涂布平板法平板法 平板划线法平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作表面连续画线的操作, ,将聚集的菌种将聚集的菌种逐步逐步稀释分散稀释分散到培养基的表面到培养基的表面. . 在数次画线后在数次画线后, ,可以分离到由可以分离到由一一个细胞繁殖个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细而来的肉眼可见的子细胞胞群体群体, ,这就是这就是菌落菌落. .1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？前都要灼烧接种环？在最后一次划在最后一次划线操作结线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环：操作的第一步灼烧接种环： 每每次划线前灼烧接种环：次划线前灼烧接种环：最后一次划最后一次划线结束后灼烧接种线结束后灼烧接种环：环： 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；杀杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。染环境和感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？再进行划线？3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？么总是从上一次划线的末端开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条划线后，线条末端末端细菌的数目比细菌的数目比线条起线条起始处始处要要少少，每，每次从上一次划线的末端开次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落繁殖而来的菌落稀释涂布平板法稀释涂布平板法菌液菌液 稀释度足够高的菌液里，微生物被稀释度足够高的菌液里，微生物被分散成分散成单个细胞单个细胞，从而在培养基表，从而在培养基表面形成面形成单个菌落单个菌落系列梯度系列梯度稀释稀释涂布涂布到到培养基培养基 涂布平板的所有操作都应在火焰附近涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无步应如何进行无菌操作？菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。将接种后的培养基和一个未接种的将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入恒温培养箱中培养，培养基都放入恒温培养箱中培养，12h和和24h后观察后观察观察菌落的观察菌落的颜色，形状，大小颜色，形状，大小是否是否符合某种细菌的菌落特征符合某种细菌的菌落特征未接种的培养基表面如果有菌落生未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明什么？长，说明什么？大肠杆菌菌落特征：绿色有金属光泽大肠杆菌菌落特征：绿色有金属光泽伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面接种到固体斜面培养基，菌落长培养基，菌落长成后置于成后置于44冰冰箱保存。箱保存。2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法
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