高中生物 第四部分 浅尝现代生物技术 实验13 DNA片段的PCR扩增学案 浙科版选修1

第四部分 浅尝现代生物技术 实验13 DNA片段的PCR扩增一、PCR技术1PCR的全称是：_。2PCR技术是用于DNA片段复制、扩增的生化技术。3PCR技术用途：除用于基因扩增外，还用于_。4PCR技术的具体应用：在法学、医学、食品和考古学上也是重要的实用工具，如_鉴定、_鉴定、食品质量的确定、_病诊断、肿瘤病和其他疾病的诊断以及考古中人种的确定等。答案：1.聚合酶链反应3测定DNA序列4亲子犯罪遗传二、DNA的体内自我复制与PCR技术DNA聚合酶在有_的存在时，利用4种_，可从_末端向_末端合成新链。PCR技术还需要_作为_，这一段叫_。答案：DNA模板脱氧核苷三磷酸53与DNA模板互补的一段单链DNA聚合酶作用的起点引物三、PCR作用的过程11个循环的操作：步骤具体操作双链DNA_将双链DNA加热至_，DNA_，DNA之间的_打开，双链分离(也叫做_)续表步骤具体操作与_结合双链分离后，将温度_，这一降温过程叫_。退火后，引物可与2个_分别结合DNA新链的_ _下，聚合酶可利用_组装模板的互补链，从引物延伸至_末端2.一般大约需要重复上述3步骤_个循环。3结果：一个循环形成_个双链DNA，在20个循环后(大约1h),1个DNA片段可扩增上百万个拷贝，30个循环可产生10亿个拷贝。答案：1.分开95变性氢键解链引物迅速降至4060退火单链的DNA模板延伸724种dNTP32153032四、实验操作1设备、用品(略)2材料：凝胶、DNA标样、PCR试剂盒、TBE缓冲液、0.1%亚甲蓝3.步骤：文字说明：取3个0.5 mL微量离心管，分别记做1、2、3号。用取样器按表一加入试剂，关闭上盖并在振荡器上振荡20 s，使之混合均匀将3个微量离心管放在固定器上，保证每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的时间依次放入3个水浴进行PCR将TBE缓冲液加入到电泳槽中，使缓冲液高出凝胶面34 mm，再将样品加入凝胶板的加样孔中。所加顺序内容依次为：凝胶板中的加样情况说明表加样孔编号（对应右图所示）1234离心管中样品标号SA1A2A3所加样品1号样品20微升DNA标准溶液PCR产物1（72 1min后得到的）PCR产物2（72 1min、70 2min后得到的）对照组产物2号样品2微升蓝色缓冲液1号样品与2号样品必须充分混匀后再加入开始进行电泳，若用18 V电池的电泳46 h；若甲直流电泳仪电源，80 V可电泳40 min电泳后将凝胶缓冲液倒出，缓冲液可再利用。将10 mL染色剂（亚甲蓝）覆盖在凝胶表面，1520 min后移去（可再利用），再加入5 mL70%乙醇，不断摇动12 min，使其分布均匀，再除去，加入冷水，几分钟后看到蓝色的区带出现，这就是扩增的DNA比较、判断胶片结果图表辅助：表一：试剂1号管(12个循环)2号管(14个循环)3号管(对照)PCR混合液2020蒸馏水20引物202020模板DNA101010总体积505050表二：时间温度目的2 min30 s30 s1 min2 min95 95 49 72 70 开始变性(解链)最后扩增胶片染色结果6EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F375