尿纤维连接蛋白在诊断上尿路移行细胞癌的临床意义

尿纤维连接蛋白在诊断上尿路移行细胞癌的临床意义 作者：凌海滨 赵莹 李向东 苗文隆 李凤歧 成日青【摘要】 目的: 探讨尿纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)与上尿路移行细胞癌的生物学关系。方法: 采用ELISA法检测30例上尿路移行细胞癌、25例其它泌尿系疾病患者及20例正常人尿液Fn含量，并同时测定尿肌酐（Creatin,Cr），计算Fn/Cr比值，比较各组人群尿Fn/Cr比值之间的差异；分析不同肿瘤分期、分级尿Fn/Cr之间的差异；比较其与尿脱落细胞学检测上尿路移行细胞癌的敏感性。结果: 上尿路移行细胞癌尿Fn/Cr比值为（46.426.5）mg/mol，明显高于正常人（14.78.8）mg/mol及其它泌尿系疾病患者（28.222.7）mg/mol。以34mg/mol为标准，尿Fn/Cr比值诊断上尿路移行细胞癌的灵敏度和特异度分别为73.3%和77.8%。尿Fn/Cr比值与上尿路肿瘤分期分级有关。尿脱落细胞学检测上尿路移行细胞癌的敏感性为53.3%，采用Fn/Cr检测较脱落细胞学检查敏感性无统计学意义（P>0.05）。结论: 尿Fn/Cr可作为上尿路移行细胞癌的诊断指标。其高低与膀胱癌的分期、分级有关，可大致判断浸润度和恶性度，并可用于上尿路移行细胞癌的预后评估。 【关键词】 尿纤维连接蛋白; 尿纤维连接蛋白/尿肌酐比值; 上尿路; 移行细胞癌 【ABSTRACT】 Objective: To investigate the biological relationship between urine fibronectin (Fn) and upper urinary tract transitional cell carcinoma(TCC) in patients. Methods：Urinary Fn was detected by ELISA technique in 30 cases with upper urinary tract TCC, 24 cases with other urogenital diseases and 19 healthy subjects. Meanwhile the analysis for creatin (Cr) in urine was carried out and the Fn/Cr ratio was calculated. The discrepancy of urinary Fn/Cr among three groups and tumor grades and stages was analized as well. Sensitivity and specificity of the urinary Fn/Cr were compared with that of the urinary cytology. Results：The urinary Fn/Cr ratio was significantly higher in upper urinary tract TCC (46.426.5mg/mol)than in other urogenital diseases (28.222.7mg/mol)and the healthy subjects (14.78.8mg/mol) (P<0.01, P<0.05). Taking 34mg/mol for Fn/Cr as standard, The sensitivity and specificity of urinary Fn/Cr ratio were 73.3% and 77.8% respectively. Urinary Fn/Cr ratio had obvious discrepant among tumor grades and stages (P<0.01). Otherwise,the sensitivity was 53.3% for urinary cytology. Conclusions： Urinary Fn/Cr ratio has significant diagnostic value in the patients with upper urinary tract TCC. Obvious relationship between urinary Fn/Cr and the stages or grades has been noted. Determining urinary Fn values may give an idea about the invasive potential of the tumor and may estimate the prognosis. 【KEY WORDS】 Urinary fibronectin; Urinary fibronectin /urinary creatin value; Upper urinary tract; Transitional cell carcinoma 上尿路移行细胞癌中基底膜Fn有不同程度丧失，这样使尿液中Fn含量有所变化。Fn在诊断膀胱癌并估测预后的意义已有相关报道13。本实验拟通过检测尿Fn含量在上尿路移行细胞癌患者、正常人及其它泌尿系疾病患者中的变化，证实尿Fn在上尿路移行细胞癌中的临床应用价值。 1 资料和方法 1.1 一般资料 1.1.1 上尿路移行细胞癌组 30例，男21例，女9例；年龄：4280岁，平均63岁；肾盂癌23例，其中期4例，期15例，期3例，期1例；输尿管癌7例，其中期3例，期2例，期1例，期1例。期以前患者均手术治疗。 1.1.2 其它泌尿系疾病组 25例，男14例，女11例；年龄3078岁，平均60岁；其中BPH2例，肾囊肿2例，肾结石4例，输尿管结石4例，输尿管息肉2例，肾盂/膀胱炎2例，肾癌3例，肾结核2例，输尿管炎性狭窄4例。 1.1.3 正常对照组 20例，男12例，女8例；年龄2477岁，平均58岁。 1.2 方法 1.2.1 标本采集 前一天晚上10时后禁水。留取清晨第一次全程尿液，分为两份，一份送检验科检测尿Cr，另一份则在离心机3000r/min离心后，收集上清液，置于干净的试管，封盖，于-80保存。离心后尿沉渣行尿脱落细胞学检查。 1.2.2 标本检测 ELISA法测定尿Fn，单位g/L。试剂盒由DR Lab California提供。测定尿Cr，单位mol/L。计算Fn/Cr比值，单位mg/mol。 1.2.3 结果计算 由试剂盒所提供标准品测定的OD值，绘制标准曲线，根据待测尿标本测定的OD值，由标准曲线计算出Fn的浓度，并计算Fn/Cr比值。所有数据在不同多组间比较采用单因素方差分析，计量资料采用2检验。 2 结果 正常对照组平均(14.78.8)mg/mol，上尿路移行细胞癌组平均(46.426.5)mg/mol,两组间有显著差异(P<0.01)，表明尿Fn/Cr在上尿路移行细胞癌患者中明显高于正常人；其它泌尿系疾病组平均(28.222.7)mg/mol，与上尿路移行细胞癌组有差异性(P<0.05)，表明尿Fn/Cr在上尿路移行细胞癌患者中明显高于其它泌尿系疾病患者(见表1)。表1 三组检测结果的比较(注：*与对照组相比P<0.01；与其他泌尿系疾病组相比P<0.05 期上尿路移行细胞癌平均（49.128.9）mg/mol，与期上尿路移行细胞癌平均（29.719.5）mg/mol有显著差异(P<0.05),表明Fn/Cr在期上尿路移行细胞癌患者中明显高于期上尿路移行细胞癌患者。期与期TCC间有显著差异(P<0.01)，表明Fn/Cr在期上尿路移行细胞癌患者中又明显高于期上尿路移行细胞癌患者。由下表结果可知，Fn/Cr与上尿路移行细胞癌分级也有显著关系。表2 上尿路移行细胞癌不同分期分级检测数值的比较注：*与期相比P<0.05，与期相比P<0.01；与G1期相比P<0.01，#与G2期相比P<0.01 本实验敏感性为73.3%(22/30)，特异性为77.8%(35/45)，假阳性率22.2%，假阴性率26.7%；用细胞学检测，敏感性为53.3%(16/30)，特异性为97.8%(44/45)。2检验提示采用Fn/Cr检测较脱落细胞学检查敏感性无统计学意义（P>0.05）。 3 讨论 上尿路移行细胞癌的诊断方法有超声、IVU、CT、MRU、膀胱镜及细胞学检查等，而准确价廉、快捷安全、无创的诊断方法一直是我们的研究重点。 Fn在泌尿系统只存在于尿路上皮的基底膜及粘膜下层，在完整的上皮表面基本无表达，尿液中Fn一般认为由尿路基底膜释放。上尿路移行细胞癌中基底膜Fn有不同程度丧失而使尿液中Fn含量升高。 尿液长时间搁置，化学成分及蛋白成分可能会被破坏，Fn的稳定性会降低，故采集一次性尿液立刻处理较收集24h尿更合理4。同时，由于尿液的浓缩与稀释有较大的变化，而不同个体间尿液中Cr相对较稳定，因此同一尿样标本的尿Fn/Cr比值更趋于准确及稳定，更能反映个体的实际状况3。 本实验上尿路移行细胞癌患者尿液Fn/Cr明显高于正常人(3.16倍)及其它泌尿系疾病患者(1.65倍)，有明显的统计学意义(P<0.05)，表明尿Fn可作为上尿路移行细胞癌的诊断指标。 本组实验结果表明，上尿路移行细胞癌随着病期发展，Fn/Cr随之升高，阳性结果由I期的28.6%升至期的100%，尤其对期上尿路移行细胞癌患者的诊断正确率高达100%；Fn/Cr检测G1、G2、G3的敏感性为37.5%、75%和87.5%，这与肿瘤侵犯基底膜以及肿瘤诱导产生的蛋白酶增加了Fn从基底膜中的释放有关5。故随着上尿路基底膜中Fn的减少，细胞与细胞、细胞与基质间的粘附力降低，最终导致肿瘤细胞的游离，而使肿瘤浸润转移。故根据Fn可初步估计上尿路移行细胞癌患者的分期与分级。但Fn/Cr检测低分期和低分级上尿路移行细胞癌时，可能会出现较高的假阴性。 我们对尿Fn/Cr与尿脱落细胞学检测上尿路移行细胞癌的敏感性进行了比较，结果显示两种检测方法无差异性(P>0.05)。尿脱落细胞学检查特异性高，但敏感性很低；尿Fn/Cr的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为73.3%、77.8%、68.8%和81.4%。在临床实践中，泌尿外科医生更关心不能错过临床意义上的肿瘤，并不十分排斥因假阳性而行膀胱镜检查。因此，作为一种筛选手段，敏感性和阴性预测比特异性更重要。Fn/Cr和尿脱落细胞学检查一样，目前仍不能代替膀胱镜单独检测和筛查上尿路移行细胞癌。 本研究的假阳性结果出现在泌尿系结石(2例)、感染(1例)、BPH(1例)及肾结核患者(2例)，提示可能与这些疾病有关，其详细机制有待于今后继续总结病例进行研究，因此临床上在应用尿Fn诊断上尿路移行细胞癌时须注意鉴别。 综上所述，在诊断或鉴别上尿路疾患时，测定尿Fn含量是一种可行性较高的辅助检测手段，可以认为是诊断上尿路移行细胞癌以及估测其分期、分级很有价值的肿瘤标志物。【参考文献】 1 郭剑明，张永康，王国民,等.膀胱癌患者测定尿纤维连接蛋白的临床意义J.中华泌尿外科杂志,1998，19（3）：1451472 Menendez V, FernandezSuarez A,Galan JA,et al.Diagnosis of bladder cancer by analysis of urinary fibronectinJ.Urology,2005,65(2):2842893 Mutlu N,Turkeri L,Emerk K.Analytic and clinical evaluation of new urinary tumor marker:bladder tumor fibronectin in diagnosis and followup bladder cancerJ.Clin Chem Lab Med,2003,41(8):106910744 SanchezCarbayo M,Urrutia M,Gonzalez de Buitrago JM,et al.Evaluation of two new urinary tumor markers:bladder tumor fibronectin and cytokeratin 18 for the diagnosis of bladder cancerJ.Clin Cancer Res,2000,6:358535945 Malmstrom PV,Larsson A,Johansson S. Urinary fibronectin in diagnosis and followup patients with urinary bladder cancerJ.Br J Urol,1993,72:3073109 / 9文档可自由编辑打印