Nexgen Four(N 4)全自动酶免分析仪标准操作规程

聊城市第三人民医院检验科 作业指导书文件编号：LCSY-LAB-MY-SOP-001 版序/修订号：B/0文件名称全自动酶免分析仪生效日期：20111201 第 15 页 共 15 页全自动酶免分析仪标准操作规程目录一Nexgen Four(N 4)全自动酶免分析31.1目的31.2范围：酶标板技术体外诊断31.3 原理31.4操作程序41.5维护与校准71.6新试验的程序设定9二项目SOP102.1 丙型肝炎病毒抗体102.2 梅毒螺旋体抗体12一Nexgen Four(N 4)全自动酶免分析1.1目的实现酶标板实验的全自动化操作。包括以下基本操作步骤：血清样本和质控品的稀释、试剂分配、温控孵育、清洗酶标板、读数、数据结果分析、分析结果打印。1.2范围：酶标板技术体外诊断1.3 原理其基本操作步骤均通过软件控制由仪器自动完成。每个任务都要同时使用电动机械装置（如：机械加样臂、泵、电子管等）和电子部分（如：微控制和微处理器等），包括软件管理。NEXGEN FourTM 工作原理的基础是3种不同级别的可编辑的工作任务如下：Protocol 就是直接提供给仪器某一个ELISA试剂盒的整个实验过程； Protocol 提供给仪器所有物理参数（如：试剂数量、孵育时间、孵育温度等），可以使仪器正确的完成某一个ELISA试剂盒的实验过程。Panel 就是提供给仪器一些不同分析项目的Protocol组合，从而可以在一次运行中完成这些分析项目。Panel 定义了与仪器相关的所有物理参数（如：试剂位置、酶标板位置、样本位置等），使同时运行的这些不同分析项目的程序预先组合在一个文件内。Session 提供仪器正确运行的所有说明（如：病人姓名、在工作区的位置、报告形式等） 及每个标本所需做的测试项目。在输入Session 的过程中，用户可以根据软件提示一步一步操作并确认项目。1.4操作程序1.4.1开机自检1.4.1.1 打开Nexgen 4仪器的电源开关。（内部电脑的Window2000系统会启动，约需5min）。1.4.1.2 准备标本，试剂，阴阳性对照，质控品，加样头，洗液，蒸馏水等。1.4.1.3 开启电脑，点击Support图标，Windows XP 自动启动。1.4.1.4 仪器操作软件自动加载（Easy User Interface），单击“简易用户界面”软件左侧的“监控”，仪器会自动初始化并进入“Nexgen维护工具”界面的“启动 / 结束工作”程序。每天第一次开机时，仪器自动启动自检程序，自检完成后，若液路填充栏后的为选定，则仪器会自动进行左右两侧的液路填充。1.4.1.5仪器初始化及自检完成后，单击“启动”栏最下方的“洗板器灌注”，选择本次实验需用的洗液瓶进行灌注。“洗板器灌注”要选择两侧，至少灌注三次并保证洗液能充分冲灌到洗板器。完成“洗板器灌注”后，单击上面菜单的“手工操控”栏，在这里可以分别单独执行微孔板架移动、样本盘转动、洗液灌注、加样头归零、液路填充等操作。1.4.1.6自检及其准备工作完成以后，单击屏幕右下侧的“关闭”，退出监控程序。1.4.2运行实验单击“ELISA工作表编辑”，从“选取模板或工作表”菜单的“模板”下点击所要运行的模板名称，例如HBV4，点击“下一步”到“信息”“下一步”到“添加样本”，根据要测试的样本数进行添加，输入样本数的范围，点击“加入样本”，这时样本添加完成，只要在“工作列表”中点击“测试”，待测样本会变成红色，就表示已经选中所有添加的样本“下一步”到“加至样本架”栏，点击全部加入“下一步”到“工作表报告”“下一步”到“完成”，选中“我想保存已编辑的工作表及立即执行之”点击“完成”。此时仪器会进行初始化并进入运行工作表的“设定工作表”菜单，单击图示的相应位置，分别摆放微孔板条、样本、试剂架和洗液瓶。（可在此界面转动样本盘并放入样本架，样本舱门打开后，仪器会报警，须关闭舱门并点OK。）（若不能看到样本盘界面，可以选择到“选取工作表”并点击“自定义浏览”然后在点击到“设定工作表”栏即可）“下一步”到“设定输入”“下一步”到“运行工作表”，（此时可对步骤表中的步骤进行选择，代表要做的步骤，代表不做的步骤）选择好步骤后，点击“运行”，仪器开始执行操作步骤。（可以通过点击“暂停”和“恢复”按钮让仪器暂停工作和恢复工作。 实验完成以后，点击“下一步”直到“完成”，退出操作界面。 注意：1.仪器在加样本的过程中不可转动样本盘。若一侧报警需要处理时，要等到两侧样本均加完才能进行操作。2.若在试验过程中需将病人标本取出（加样完毕），可在当前页面选择“设定工作表”，点击转盘上放置样本的相应样本架序号，转盘会转到相应位置，即可取出，关闭舱门并点击OK。点击“运行工作表”可回到实验界面。1.4.3 关机程序实验结束后，点击“监控”，进入“启动/结束工作”界面，点击屏幕右侧的“关闭”菜单下的“下一步”，分别执行“清空废弃加样头头”、“清空内置废液箱”、“用蒸馏水替换洗液”、“移走样本盘”、“移走试剂盘”、“移走微孔板”，当此按钮变为停止位置时，点击之并让左右两侧机械壁回到安全的关机位置。点击“蒸馏水清洗洗板器”按钮，此时用蒸馏水进行洗板器的冲洗，需执行三次以上，洗板器完全清洗完成后，点击“关闭仪器电脑”，此时内部电脑Win2000系统会关闭。等到屏幕提示“现在可以安全关闭仪器”，这时可以点击右下角的关闭按钮，再点击左下角的退出按钮。然后点击StartTurnOffComputerTurnOff关闭外部电脑。然后关闭仪器电源开关及其电脑和显示器的开关即可。1.5 维护与校准1.5.1每日保养1.5.1.1每天开机时进行仪器的自检和两侧的液路填充，并查看自检报告，是否所有项目均通过。1.5.1.2从冰箱中取出试剂架后需用干抹布擦干试剂架上的水气，然后才能放在仪器上，避免水气氧化仪器的金属涂层。1.5.1.3关机前需要严格执行关机程序，对液路系统进行彻底冲洗（防止盐类结晶堵塞管路、金属针和洗板器）。并点击停止位置按钮，让两侧的机械臂回到安全的关机位置，只有机械臂在停止位置的情况下才能关闭仪器电源，否则易造成金属针的损坏。1.5.1.4每天实验完成后需彻底排空废液箱中的废液，如无法排出则需要借助洗耳球等工具将废液引流排出。1.5.2每周保养1.5.2.1对左右两侧的加样针冲洗站进行清洁。使用酒精棉签清洁冲洗站，重点是右侧的小洞，然后用棉签蘸水擦拭。保养中注意不要将棉絮和残渣留在冲洗站中，如有残渣一定要清洁干净，否则会堵塞废液阀。1.5.2.2用蒸馏水替换所有洗液瓶，选择洗板器灌注程序进行6遍以上冲灌。左右各执行3遍以上液路填充程序。1.5.2.3用酒精棉签清洁左右两侧金属针外表面，然后用蒸馏水清洁并擦干。给金属针的外壁均匀涂上一层凡士林，然后用软布涂布均匀。1.5.3每两周保养 1.5.3.1用消毒液对废吸头盒进行消毒，然后用蒸馏水冲洗，再用软布擦干。1.5.3.2用消毒液对工作区进行消毒，让后用软布擦干。1.5.3.3定期将My DocumentOpenLABExecuted Sessions文件夹和Archived sessions文件夹备份到D:Backup文件夹中，并以当前日期命名子文件夹的名称。1.5.4每月保养1.5.4.1用10%的NaClO溶液替换所有洗液瓶，选择洗板器灌注程序进行6遍以上冲灌。等待510分钟，用蒸馏水替换所有洗液瓶，选择洗板器灌注程序进行10遍以上冲灌。1.5.4.2用10%的NaClO溶液替换系统冲洗液瓶，左右两侧各执行3遍以上液路填充程序。用蒸馏水替换所有洗液瓶，左右两侧各执行6遍以上液路填充程序。1.5.4.3在关机的情况下，将左右两侧的机械臂移到安全的位置（移动前需要将两机械手抬到最上面。）去除洗板头上的十字固定螺丝，将洗板头往上平稳移除，使用通针将16根针一一导通。清洁完洗板头后，将洗板头沿卡槽平稳放入。再执行洗板器灌注程序，冲灌洗板器即可。1.5.5不定期保养1.5.5.1不定期检查真空泵的冷凝瓶中液体的，一般3个月左右，此瓶中会出现一些冷凝水。可将瓶底侧的旋钮调节到与桌面垂直，将水放出。（水面是无法全部排出的，排到没有水滴出为止。）排完水后将旋钮调节到与桌面平行即可。另外需保证冷凝瓶不漏气，可通过洗板时冷凝瓶处是否有异常气流声音来判断。1.5.5.2在更换系统蒸馏水和洗液时需观察过滤器的状态，看是否有变色。仪器进行液路填充时可以观察注射器中是否气泡产生。如有问题则需要保养过滤器（用10%NaClO浸泡，然后再用蒸馏水浸泡），安装过滤器时需注意过滤器的方向。（过滤器订货号：NXG6621 FILTER ART）。1.5.5.3不定期的清洁仪器外观和工作区域消毒。1.6新试验的程序设定1.6.1 打开Nexgen Startup程序，点击【Protocol and Panels】，打开【新建】选择 【ELISA Protocol】然后根据提示将操作说明输入。1.6.2 打开Nexgen Startup程序，点击【Protocol and Panels】，打开【新建】选择 【ELISA Panel】选择放入酶标板、各试剂以及洗液的位置。1.6.3 打开康金系统，增加项目。二项目SOP2.1 丙型肝炎病毒抗体2.1.1 测定原理所用包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原（包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原）。待测样本加入已包被抗原的反应孔内孵育，若标本中含有抗-HCV抗体，则该抗体与微孔内抗原形成抗原抗体复合物，加入酶结合物，经孵育后，酶结合物连接至抗原抗体复合物上，在TMB底物参与反应的情况下，产生显色反应。2.1.2 试剂购自上海科华生物工程股份有限公司（批准文号:国药准字S10950047），试剂盒28避光保存，自检定合格之日起有效期6 个月。组成：微孔反应板（8孔12）、样品稀释液（20ml1瓶）、封板（5片）、阴性对照（1.0ml1瓶）、阳性对照（1.0ml1瓶）、酶结合物（7.5ml2瓶）、洗涤液（80ml1瓶）、显色剂A（8.0 ml1瓶）显色剂B（8.0 ml1瓶）、终止液 （7.0 ml1瓶）。2.1.3 仪器 亚特斯 NEXGEN Four2.1.4 标本要求；2.1.4.1 血清或血浆。2.1.4.2 在采集血液后的2 小时内分离血清。并置于具塞试管中。2.1.4.3 8h 内不及时测定的样品可存放于28冰箱保存。3 天后测定的样品置-15-20冰冻保存，待复融后测量。但不易反复冻融。2.1.4.4 样品视为传染品，注意安全操作。2.1.5操作步骤2.1.5.1打开电脑自动开启“Nexgen Startup”程序。2.1.5.2打开N4仪器电源，点击【监控】进入自检程序。2.1.5.3自检结束后点击“液压填充”，在“液压填充”栏中根据需要选择左面，右面或者两边，分别对管路，金属针进行灌注。2 1.5.4后点击“关闭”，开机自检完成，退出自检菜单。2.1.5.5单击“ELISA工作表编辑”，进入联机测试程序：选取已经建立的模板名称，点击“下一步”，进入“信息”界面，点击“下一步”，进入“添加样本”（1到n），点击“加入样本”，显示样本放置位置，进入“工作表报告”界面，点击“下一步”，接着点击“完成”，2.1.5.6仪器会进行初始化并进入运行工作表的“设定工作表”菜单，单击图示的相应位置，分别摆放微孔板条、样本、试剂架和洗液瓶。2.1.5.7接着在“运行工作表”界面点击运行，此时仪器开始运行。完成后点击“完成”，在结果全部完成后提示“运行结束”，按ok确认2.1.5.8进入“数据结果”界面，在数据结果中选择已完成的测试名称，根据系统提示点击“下一步”查看结果，并可选择“打印”，最后点击“关闭”，退出操作界面，进入关机程序。2.1.5.9执行关机程序。2.1.5.10进入康金系统处理数据，即可得到结果。2.1.6检验方法的局限性2.1.6.1此方法仅适用于个人的血清或血浆样本检测，不适用于混合血清或血浆样本以及其他体液样本。2.1.6.2 检测高度溶血的样本，血液没有完全凝固的血清样本、有微生物污染的样本可能会有错误结果。2.2 梅毒螺旋体抗体2.2.1测定原理用梅毒螺旋体抗原包被反应板，用梅毒螺旋体抗原标记辣根过氧化物酶，应用双抗原夹心法原理，检测人血清或血浆样本中的梅毒螺旋体抗体。2.2.2 试剂购自上海科华生物工程股份有限公司（批准文号:国药准字S10950057），试剂盒28避光保存，自检定合格之日起有效期6 个月。组成：微孔反应板（8孔12）、封板（5片）、阴性对照（1.0ml1瓶）、阳性对照（1.0ml1瓶）、酶结合物（12ml1瓶）、洗涤液（80ml1瓶）、显色剂A（8.0 ml1瓶）显色剂B（8.0 ml1瓶）、终止液 （7.0 ml1瓶）。2.2.3 仪器 亚特斯 NEXGEN Four2.2.4 标本要求；2.2.4.1 血清或血浆。2.2.4.2 在采集血液后的2 小时内分离血清。并置于具塞试管中。2.2.4.3 8h 内不及时测定的样品可存放于28冰箱保存。3 天后测定的样品置-15-20冰冻保存，待复融后测量。但不易反复冻融。2.2.4.4 样品视为传染品，注意安全操作。2.2.5 操作步骤2.2.5.1打开电脑自动开启“Nexgen Startup”程序。2.2.5.2打开N4仪器电源，点击【监控】进入自检程序。2.2.5.3自检结束后点击“液压填充”，在“液压填充”栏中根据需要选择左面，右面或者两边，分别对管路，金属针进行灌注。2.2.5.4后点击“关闭”，开机自检完成，退出自检菜单。2.2.5.5单击“ELISA工作表编辑”，进入联机测试程序：选取已经建立的模板名称，点击“下一步”，进入“信息”界面，点击“下一步”，进入“添加样本”（1到n），点击“加入样本”，显示样本放置位置，进入“工作表报告”界面，点击“下一步”，接着点击“完成”，2.2.5.6仪器会进行初始化并进入运行工作表的“设定工作表”菜单，单击图示的相应位置，分别摆放微孔板条、样本、试剂架和洗液瓶。2.2.5.7接着在“运行工作表”界面点击运行，此时仪器开始运行。完成后点击“完成”，在结果全部完成后提示“运行结束”，按ok确认2.2.5.8进入“数据结果”界面，在数据结果中选择已完成的测试名称，根据系统提示点击“下一步”查看结果，并可选择“打印”，最后点击“关闭”，退出操作界面，进入关机程序。2.2.5.9执行关机程序。2.2.5.10进入康金系统处理数据，即可得到结果。2.2.6检验方法的局限性2.2.6.1此方法仅适用于个人的血清或血浆样本检测，不适用于混合血清或血浆样本以及其他体液样本。2.2.6.2 检测高度溶血的样本，血液没有完全凝固的血清样本、有微生物污染的样本可能会有错误结果。 年 月 日修改次数修改内容修改人批准人生效日期