香菇多糖的复合酶法提取

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,香菇多糖的复合酶法 提取,香菇多糖,是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质。,香菇多糖的作用：,香菇多糖具有,抗病毒、抗肿瘤，调节免疫力、降血糖、抗氧化,等功能。有关香菇多糖的研究，特别是结构方面的研究已引起国内外学者的高度关注，并有望成为多糖领域的研究热点。,与其他抗肿瘤药物相比，香菇多糖几乎,无任何副作用,，对胃癌、鼻咽癌、直肠癌、乳腺癌和慢性粒细胞白血病等有抑制和防止术后微转移的作用，是目前已知最强的免疫增强剂之一。,香菇多糖的提取方法：,热水浸提法,超声波提取法,稀酸(碱)浸提法,微波法提取香菇多糖,深层发酵培养提取法,酶解法,酶解法：,酶解法就是指在浸提的过程中加入相应的酶来水解纤维素、果胶、蛋白质分子等，以使多糖从细胞中分离出来。,酶法提取较其他方法的优点,1.,其作用条件温和。,2.,通过酶法破壁去除杂质可以明显提高 提取率，缩短提取时间。,3.,可减少能源消耗。,4.,有效的保存多糖的生物活性。,复合酶提取香菇多糖：,复合酶,纤维素酶,+,木瓜蛋白酶,纤维素酶,+,中性蛋白酶,木瓜蛋白酶,+,纤维素酶,中性蛋白酶,+,纤维素酶,多糖得率（,%,）,12.90,7.02,9.46,6.34,香菇多糖的制备工艺,一,.,原料准备,二,.,提取,三,.,分离纯化,香菇的复合酶法提取,原料的准备和处理,香菇烘干,( 50),粉碎过筛多糖提取原材料。,香菇的复合酶法提取,主要实验试剂及仪器,真空干燥箱，离心机，恒温振荡器，紫外可见分光光度计，傅里叶变换红外光谱仪，纤维素酶，木瓜蛋白酶,实验方法与步骤,反应结束，将三角瓶放到沸水锅中，,10min,沸水浴灭酶。,称取木瓜蛋白酶和纤维素酶按一定比例混合，加入,5mL,蒸馏水溶解。,香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度，将酶液加入到香菇溶液中，在恒温振荡器上提取。,称取,80,目的香菇粉,2g,，放入到,250mL,的三角瓶中，加蒸馏水,35mL,混合均匀后置于,40,水浴锅中，水浴,30min,，调节,pH,值。,3,4,5,灭酶结束，冷却至室温，将酶提取液放入到离心管中，调至,4000 r/min,离心，取上清液，即得到酶提取多糖清液。,2,1,香菇的复合酶法提取,香菇的复合酶法提取,分离纯化,1.,分离提取,用,0.5%NaOH,初步提取，之后取清液，用透析袋透去除杂离子，透析后去除杂蛋白，用活性炭脱色,1 h,，加入,95%,乙醇，使溶液中乙醇的浓度达到,75%,进行醇沉醇沉过程中要将其保存在,4,冰箱中，保持,24 h,，离心,15 min,，取沉淀，置于真空干燥箱中干燥，即可得到香菇粗多糖。,2.,纯化,将香菇粗多糖水溶解后用色谱仪分离，,干燥获得纯香菇多糖。,影响香菇多糖得率的因素：,随着复合酶浓度的增加，多糖提取率也逐渐增加，酶浓度大于,0.4%,后提取增加率趋于平缓，因此，最佳复合酶的浓度为,0.4%,。,1.,复合酶的浓度对多糖得率的影响,2.,料液比,对多糖得率的影响,当料液比在,1,15,l25,之间多糖提取率增长较快，继续提高料液比多糖提取率仍有升高，但提高速率减小因此最佳料液比为,1,20,3.,酶解时间,对多糖得率的影响,由图可知,香菇多糖的提取率随酶促反应时间的延长增加。,酶法提取的应用前景：,酶法提取由于反应特异性强、条件温和易获得、提取时间短、提取率高、绿色节能等已引起广泛的关注，具有较大的应用潜力，且随着对酶法技术的不断研究，酶法与其他技术如超声波、超高压、微波等技术的联用也将成为另一个热点研究方向。,Thanks,