沙门氏菌检验

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,沙门氏菌及其检验,一、概述,在微生物分类学中，沙门氏菌属（,Salmonella,）是肠杆菌科的一个大属，包括,2000,多个血清型，它们在形态结构、培养特性、生化特性和抗原构造方面都非常相似，是一类形态短小的革兰氏阴性杆菌，主要寄居于人和其它温血动物的肠道中，可引起多种性质的疾病，根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。,第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌,甲型、乙型、丙型副伤寒沙门氏菌。,第二类群：能引起人类食物中毒，称之为食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。,第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌，此类群中尽管很少感染人，但近年也有感染人的报道。,1,根据侵入机体沙门氏菌菌种的不同，在临床上引起四种不同的疾病,:,（,1,）伤寒、副伤寒,由沙门氏属中的伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。,（,2,）食物中毒,沙门氏菌属引起的食物中毒，主要以肠炎杆菌、鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌和汤普逊杆菌等最为多见。临床症状主要是胃肠炎。病程较短，一般,24d,可完全恢复。,（,3,）败血症,多为猪霍乱杆菌引起，甲、乙、丙型副伤寒杆菌和肠炎杆菌亦可引起败血症。,（,4,）慢性肠炎,沙门氏杆菌可引起慢性、持久性肠炎。,2,沙门氏菌广泛分布于自然界，,是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国各类细菌性的食物中毒中，沙门氏菌常居前列。因此，沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。,沙门氏菌不产生外毒素，但能产生毒力较强的内毒素。,沙门氏菌主要通过食物、饮水经口感染。可存在多种食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、虾、鱼和田鸡腿等。,3,二、沙门氏菌的生物学特性,1,、形态与染色特性：,革兰氏阴性短杆菌，无芽孢,一般无荚膜，周生鞭毛（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），大多数具有菌毛。,2,、培养特性：,需氧或兼性厌氧；普通营养琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明、圆形、光滑、湿润。,4,3,、生化特性：,大部分发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和山梨酸产气；,一般不发酵乳糖和蔗糖，不发酵侧金盏花醇；,一般不产吲哚，,V-P,反应阴性；,不分解尿素，苯丙氨酸不脱氨；,三糖铁琼脂斜面常产生,H,2,S,。,赖氨酸脱羧一般阳性,4,、抵抗力：,较弱，不耐热，最适温度,37,，最适,pH6.8-7.8,。,5,、毒素特征：,不产外毒素，产毒性很强的内毒素，这是致病的主要原因。,5,6,、血清学特性：,沙门氏菌具有复杂的抗原结构。虽然沙门氏菌具有,O,、,H,、,K,和其它表面物质,(,如菌毛,),四种抗原，但只有,O,抗原是每个菌株均有的成分。,1,）,O,抗原（菌体抗原）,*,存在于菌体表面，为脂多糖，多糖部分决定其特异性，,*,O,抗原耐热,(100,、,2.5h,或,121,、,2h,加热均不破坏其抗原性,),，其特异性不易丧失或变异。,*,一个菌体具有一种或多种不同的,O,抗原。,6,2,）,H,抗原（鞭毛抗原）,*,H,抗原存在于鞭毛中，不耐热，化学成分蛋白质，其抗原性可以被酒精所破坏。,*,H,抗原可分为两相,第,1,相：为特异相，用小写英文字母表示，,a,z,，,Z,以后则从,z,1,、,z,2,，已编到,z,83,。,第,2,相：为非特异相以阿拉伯数字表示，共,7,种。,具有第,1,相和第,2,相,H,抗原的细菌称为双相菌，大多数沙门氏菌属于此；,仅有一相者称单相菌，如肠炎沙门氏菌。,极少数无鞭毛菌两相抗原都不具有，称为无相菌，如鸡白痢沙门氏菌。,7,3,）,Vi,抗原（包膜抗原）,少数沙门氏菌中尚有一种表面包膜抗原，功能与大肠杆菌的,K,抗原类同，因一般认为它与毒力,(Virulence),有关，故称,Vi,抗原。,能阻止,O,抗原与相应抗体结合；,经过几次传代、,60,热处理或石炭酸处理后容易消失。,8,三、,生化反应,9,1,、吲哚试验,(,indol test),细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。,色氨酸 吲哚（无色）对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚（红色，,+,大肠杆菌）,不产吲哚（无色，,-,产气杆菌）,试验方法：取培养,24h,培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。,应用：用于肠道杆菌的鉴定,10,Indol test,吲哚试验,tryptophan,色氨酸,indole,吲哚玫瑰吲哚,Kovacs reagent,吲哚试剂,（对二甲,基,氨基苯甲醛）,-+,E.coli,蛋白胨水试管,11,2,、尿素酶（,Urease,，脲酶）试验,有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生,2,个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适,pH,为,7.0,。,酚红：黄色,红色,（,+,普通变形杆菌）,黄色（,-,大肠杆菌）,试验方法：挑取,1824h,待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于,361,培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养,24h,左右，观察结果，如阴性应继续培养至,4,天，作最终判定，变为粉红色为阳性。,12,Urease Test,尿素酶试验：,urea,尿素,ammonia,氨,13,3,、氨基酸脱羧酶的测定,有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于,37,培养,4,天观察。,当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。,14,15,4,、,三糖铁（,TSI,）琼脂试验,试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置,361,培养,1824h,，观察结果。,培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖,=10,：,10,：,1,；加有酚红,本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。,只能利用,葡萄糖的细菌，,葡萄糖被分解,产酸,可使斜面先,变黄,，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成,碱性,产物，故使斜面后来又,变红,，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。,16,17,5,、,-,半乳糖苷酶（,ONPG,）的测定,ONPG:,邻硝基酚,-D-,半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的,细菌，能使其水解，从而释放黄色的邻硝基酚,ONPG,试验,左为阳性（黄）,右为阴性对照,18,四、检测方法,19,从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通常采用的方法共分,5,个步骤：,前增菌：,食品样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。,加工食品均应经过前增菌。,（选择性）增菌：,此培养基允许沙门氏菌持续增菌，同时阻止大多数其他细菌的增殖。,未经加工的食品不必经过前增菌而直接增菌。,选择性平板分离：,采用固体选择培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。,生物化学筛选：,排除大多数非沙门氏菌，也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。,血清学技术鉴定培养物菌种,。,20,中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验,GB 4789.4-2003,冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品,鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品,前增菌法,25g,BPW225mL,36,1,一般,4h,，干蛋品,18h,24h,10mL,MM,（或,TTB,）,100mL,10mL,SC,100mL,直接增菌法,25g,灭菌生理盐水,25mL,检样匀液,25mL,MM,（或,TTB,）,100mL,检样匀液,25mL,SC,100mL,BS,DHL,（或,HE,、,WS,、,SS,）,TSI,（排除,A/A H,2,S,结果）,，靛基质，尿素，,KCN,，赖氨酸,H,2,S,靛 尿,KCN,赖（或一项不符）,沙门氏菌血清学试验,甘露醇,+,山梨醇,+,H,2,S,靛 尿,KCN,赖,H,2,S,靛 尿,KCN,赖,/,非如左述的各种反应结果,沙门氏菌血清学试验,ONPG,沙门氏菌,非沙门氏菌,42 18h,24h,36,1 18h,24h,42 18h,24h,36,1 18h,24h,36,1 40h,48h,36,1 18h,24h,21,22,23,24,反应序号,A2,：补做甘露醇和山梨醇试验，按下表判定结果：,反应序号,Bl,：补做,ONPG,。若,ONPG,（），为大肠埃希氏菌，若,ONPG,（），为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸（），但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸（）。,25,