第十六章-唾液及唾液斑检验资料课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第十六章 唾液及唾液斑检验,Nsmc xdd,第十六章 唾液及唾液斑检验,罗卡定律,1910,年，法国警官艾德蒙罗卡,内容,：,所有接接触必留下痕迹,凡两个物体接触，必定会有所交换（转移）,意义,：,刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器,法医学的黄金法则。,2,罗卡定律1910 年，法国警官艾德蒙罗卡 2,打喷嚏不光,会传播疾病,还会,3,打喷嚏不光3,4,4,5,5,6,6,第一节 概述,一、唾液（斑）的特点,概念：,唾液（,saliva,）：,唾液腺,的分泌物,唾液斑（,saliva,stain,）：唾液干燥后形成的斑痕,唾液来源：,颌下腺约,70%,，腮腺约,25%,舌下腺约,5%,，其余小唾液腺,7,第一节 概述一、唾液（斑）的特点7,第十六章-唾液及唾液斑检验资料课件,成分：（水分占99.4%）,有机物-粘/球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、,唾液淀粉酶,、麦芽糖酶、,血型物质,无机物-钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、,硫氰酸盐，,其余为固形物（,口腔脱落上皮细胞,、大量细菌、食物残渣）,性状：,无色、无味、接近中性（,ph6.6-7.1）,分泌量：,正常成年人每日分泌唾液约,1.0,1.5,升，分泌量及性质受精神因素、刺激的强度和性质及食物种类有关系。,9,成分：（水分占99.4%）9,湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，便于吞咽,淀粉酶,可水解淀粉及糖原，起到消化作用；,防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中,硫氰酸盐,及蛋白质抗体可杀灭细菌。某些动物唾液中含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩，伤口愈合。,中和胃酸保护胃壁。,二、唾液的功能,湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，便于吞咽二、唾,应用价值：主要是,个人识别,和,亲子鉴定,方面。,目的要求：是否唾液（斑）；个人识别,三、唾液（斑）检验,能否正确,收集与保存,唾液（斑）是检材能否正确鉴定的关键所在。,应用价值：主要是个人识别和亲子鉴定方面。三、唾液（斑）检验能,第二节 唾液（斑）的提取,可能出现的地方：,现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、,嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、,乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑。,唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光,12,第二节 唾液（斑）的提取可能出现的地方：唾液斑在白色背景下呈,13,13,一、,中华人民共和国安全行业标准,中制定了血液及体液检材的提取标准，其中也包括了唾液（斑）的相关内容。,14,一、中华人民共和国安全行业标准中制定了血液及体液检材的提,1,、新鲜唾液的提取：应要求被鉴定人先漱口，再将纱布或棉拭子放人口中，浸湿后取出，立即置通风干燥处晾干，分别包装，作好有关的记录。也可将自然流出的唾液,1,2mL,，置干净容器内置冰冻保存,，或者立即放,水浴中煮沸,10min,，灭活唾液中的血型分解酶活性，然后置,4,冰箱保存。,常用的唾液（斑）提取方法,1、新鲜唾液的提取：应要求被鉴定人先漱口，再将纱布或棉拭子放,2,、,现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体上咬痕部位的可疑唾液斑，应用,生理盐水浸润,的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两份提取物应装入,同一,物证袋晾干后包好，备检（两步法擦拭）。,3,、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按不同提取部位分别装入物证袋，做好标记。,2、现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体上咬痕部位的可疑唾液,4.,对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件提取，如有湿润部位，应晾干后包装送检。,5.,犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用两步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检。,6.,信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对该信封和邮票整件提取，装物证袋，送检。,17,4.对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件提取，如有湿润部位,第三节 唾液（斑）的检测,1,、肉眼检验,2,、预实验,3,、确证实验,4,、个人识别,第三节 唾液（斑）的检测1、肉眼检验,1,、肉眼检验,唾液斑在白色背景下呈现,淡黄色,唾液斑在紫外线下发出,淡青色荧光,19,1、肉眼检验19,2,、预实验,（,1,）,淀粉,-,碘试验,（,2,）不溶性淀粉,-,染料复合物试验,（,3,）斑点法,20,2、预实验20,试验原理,：,淀粉遇碘呈,蓝色,。唾液中含有大量淀粉酶，能将淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。因此，将已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不显蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解。然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的存在，便可判断检材中含有淀粉酶,。,淀粉,-,碘试验,试验原理：淀粉-碘试验,主要试验材料：,0.01%,淀粉溶液、碘液、,1%,氯化三苯基四氮唑溶液、碱性铜试剂等,试验方法：,首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步,证明糖的存在。,22,主要试验材料：22,试验结果分析：,有无,蓝色变化,；有无,红色沉淀,试验注意事项：,本试验灵敏度较高，要注意所出现假阳性 如烟草浸出液；假阴性结果，如陈旧检材。,试验结果分析：,3,、确证实验,（,1,）口腔黏膜脱落上皮细胞检查,（,2,）三氯化铁试验,（,3,）其它（抗腮腺素血清、发射光谱法、叠氮钠法等）,24,3、确证实验24,唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞，将检材用生理盐水充分浸泡，弃去载体，离心，取沉淀物涂片，干燥后,HE,染色，显微镜下检查。如发现口腔粘膜脱落上皮细胞，结合淀粉酶试验阳性结果，可判断为唾液斑，如同时查见,食物残渣,，则更支持此结论。,口腔粘膜脱落上皮细胞的检查,唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞，将检材用生理盐水充分,三氯化铁试验,试验原理：,唾液中硫氰酸根离子在酸性条件下可与高价铁离子反应生成,红色,络合物。,试验材料：,40%,三氯化铁溶液，,2.9M,盐酸,三氯化铁试验试验原理：,试验方法：,将一滴可疑唾液或唾液斑浸液滴于白瓷板凹内，先加一滴,2.9M,盐酸溶液，再加一滴,40%,三氯化铁溶液，摇匀，观察结果,实验结果：,呈现浅红色者为阳性反应，证明是唾液斑。硫氰酸根离子浓度较高时，呈现棕红色或深红色，不变色或棕绿色则为阴性反应。,27,试验方法：27,注意事项：,本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度虽然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液斑而言，该法不受影响。,当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰酸盐、溴化钾、重铬酸钾等化学药品污染情况下，强阳性结果可以确证唾液斑。,28,注意事项：28,4,、个人识别,（,1,）唾液（斑）红细胞,血型检测,（,2,）唾液（斑）,多态性蛋白和酶,的检测,（,3,）唾液（斑）的,DNA,分析,（,4,）唾液,(,斑,),的,性别鉴定,29,4、个人识别29,中和试验（,测定原理及方法与精斑类似,）,免疫学方法：灵敏度高，适用于,非分泌型,和,中,和试验阴性,者，斑点,ELISA,、,ELISA-ABC,等,其它方法：解离试验、混合凝集试验,30,中和试验（测定原理及方法与精斑类似）30,唾液（斑）多态性蛋白：,唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、,唾液富含脯氨酸蛋白,、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等,唾液（斑）多态性酶：,唾液淀粉酶,、唾液脂酶、唾液,6-,磷酸盐脱氢酶、唾液酸性磷酸酶等,检测方法：,酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性,PAGE,和等电聚焦电泳,31,唾液（斑）多态性蛋白：31,图,1,聚丙烯酰胺凝胶电泳,Pr,表型模式图,等电聚焦电泳：,唾液淀粉酶,6,种表型,PAGE,：,唾液脂酶,3,种,唾液过氧化物酶,3,种唾液富含脯氨酸蛋白,3,种（图,1,）,唾液糖蛋白,11,种,32,图1聚丙烯酰胺凝胶电泳Pr表型模式图等电聚焦电泳：32,口腔粘膜脱落上皮细胞：,据报道，每,15ml,唾液及漱口水、每,5cm,2,的唾液拭子与唾液斑,DNA,平均含量分别为,12g,、,22g,、,1.3g,及,0.8g,。测定,10,个烟头，每个烟头,DNA,的平均含量是,12,120ng,。,基因组和线粒体,DNA,分析,DNA,提取方法：,Chelex-100,法,、有机溶剂法及其它,准确、有效地从唾液（斑）中提取,DNA,，是进行,DNA,分析的关键。,口腔粘膜脱落上皮细胞：准确、有效地从唾液（斑）中提取DNA，,分析血痕、精斑,DNA,多态性的方法，均能应用于唾液。好的唾液斑检材，只要能提取出大分子,DNA,，可进行,DNA,指纹图分析；陈旧唾液斑，,DNA,部分降解，可用,PCR,法分析。所以分析,DNA,多态性是目前进行唾液,(,斑,),个人识别的有效手段。,分析血痕、精斑DNA多态性的方法，均能应用于唾液。好,形态学分析,X,、,Y,染色质,DNA,分析,1.,染色体特异性片段：,DXS454,2.X-Y,同源序列：牙釉基因,(Amelogenin),、,ZFY,ZFX,基因,3.Y-STR,或,X-STR,形态学分析,36,36,案例分析一,某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男尸。经法医检验，确定为他杀。死因是棍棒致颅脑损伤死亡。现场勘验提取到的主要法医物证为,2,根带血迹的木棒、,5,处血迹、,4,堆瓜子壳、,8,枚烟蒂案。,37,案例分析一 某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男尸,物证检验结果：,现场,5,处血迹、,2,根木棒上血迹均为死者所,留；现场,8,枚烟蒂和,3,堆瓜子壳上唾液斑分别,为不同于死者的另外,4,名男性所留，另,1,堆瓜,子壳上唾液斑未检出,STR,分型数据。,通过,D N A,数据库比对，直接认定案犯。,38,物证检验结果：38,瓜子壳上唾液斑,D N A,提取的特点：,按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大，所以在现场提取瓜子壳时应注意按照,不同方位分堆提取,，不能全部集中在一块提取。在,D N A,检验时可以在同一堆内,选择,2,至,3,枚,瓜子壳放入同一离心管中进行检验。由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比较新鲜的瓜子壳，要注意挑选,相对潮湿,的含唾液成分较多的进行检验，这样检验成功的概率比较高。,瓜子在加工时一般加入糖、盐、味精等佐料，这些成分对,DNA,扩增有一定的抑制作用，所以用,Chelex-100,法提取后要进一步,纯化处理,。,39,瓜子壳上唾液斑D N A提取的特点：39,案例分析二,2 0 0 6,年某日，在一出租房内，发现龙某,(,女，,2 0,岁，,),下身裸露倒在床上，已死亡。现场位于一砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取到有价值的痕迹物证。死者龙某颈部勒有一条撕破的短裤，死因系机械性窒息。提取死者阴道拭子、地上水迹等相关物证。考虑到死者有被性侵犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行提取。,40,案例分析二2 0 0 6 年某日，在一出租房内，发现龙某(女,物证检验结果：,龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精斑，均为龙某男友曾某所留；,龙某口唇部擦拭物检出唾液斑成分，为龙某和曾某两人混合；,龙某右乳擦拭物检出唾液斑成分，为排除龙某男友曾某外的另一名男性,A,所留；,龙某左乳擦拭物检出唾液斑成分，为龙某、曾某和男性,A,混合。,通过排查把目标锁定在案发后失踪的郭某身上。对郭某暂住房进行勘查，提取地,3,枚烟蒂，经,DNA,检验，该,3,枚烟蒂均为男性,A,所留。侦查人员成功抓获郭某，经检验郭某与男性,A,基因型相同。,41,物证检验