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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,结核杆菌特异性细胞免疫反应检测,A.TB,TM,（瑅碧）,准确、快速、简便的结核感染检测,结核杆菌特异性细胞免疫反应检测A.TBTM（瑅碧）准确、,2,结核病疫情,?,感染人数：全球人口的,1/3,，中国的感染率为,44.5%,；感染者,一生中会有约,10%,的风险发展成为结核病；,?,年新发病例数：,?,全球每年报告新病例约,800-1000,万；,?,中国每年报告新病例约,150,万；,?,死亡人数：全球每年死亡病例约,300,万；其中中国约,13,万；,?,中国是全球,22,个结核病高负担国家之一。,2结核病疫情?感染人数：全球人口的1/3，中国的感染率为44,3,?,影像学方法：特异性较差，与医师的经验有关，主观性强。,?,培养：结核病诊断金标准，敏感性为,30-50%,且耗时,2-8,周；,?,抗酸染色法（俗称涂片）：敏感性为,30-40%,；,?,血清结核抗体定性检测：敏感性在,0-100%,，特异性约为,47-100%,；,?,分子诊断方法（如,PCR,）：重复性较差，需要痰标本；,?,结核菌素试验（,TST,）：受卡介苗干扰，特异性差，在肺结核病人中存在,10-,25%,的假阴性。,结核病诊断和辅助诊断方法现状,3?影像学方法：特异性较差，与医师的经验有关，主观性强。?培,4,应用现状,：,?,IGRA,技术是国际最新的用于结核杆菌感染的体外免疫诊断方法；,?,在北美、欧洲和日本已被广泛应用于结核杆菌感染的检测，包括,?,结核病辅助诊断；,?,高危人群筛查,；,?,公共卫生突发事件；,?,健康人群体检等；,?,美国和日本已经将该技术写入该国用于结核防治的指导原则中。,?,-,干扰素释放分析技术,（,Interferon-gamma Release Assay,简称,IGRA,）,4应用现状：?IGRA技术是国际最新的用于结核杆菌感染的体外,5,全球现有的三个,IGRA,产品,?,T.SPOT-TB,?,细胞,IGRA,；,?,QuantiFERON,TB Gold(in tube),：简称,QFT-IT,?,全血,IGRA,；,?,尚未获得中国,SFDA,批准进入中国；,?,A.TB,：国内第一家,?,全血,IGRA,；,5全球现有的三个IGRA产品?T.SPOT-TB?细胞IGR,结核杆菌特异性细胞免疫反应检测,2011,年,7,月,6,日，获中华人民共和国食品药品监督管理局（,SFDA,）批准上市,生,产,企,业,：,海口维瑅瑷生物研究院,注,册,号,：,国食药监械（准）字,2011,第,3400801,；,产品标准编号,：,YZB/,国,2442-2011,，,项,目,类,别,：,体外三类诊断试剂,结核杆菌特异性细胞免疫反应检测2011年7月6日，获中华人民,原理与技术背景,?,-,干扰素释放实验（,IGRA,）,（,IGRA,，,interferon-,gamma release assay,）,?,酶联免疫技术（,ELISA,）,（,ELISA,，,Enzyme-Linked ImmunoAssay,）,?,结核杆菌特异抗原,早期抗原靶,6,（,ESAT-6,）,early secreted antigenic target 6,培养滤液蛋白,10,（,CFP 10,）,（,culture filtrate protein 10,）,原理与技术背景?-干扰素释放实验（IGRA）（IGRA，i,?,基本原理,1,机体感染结核杆菌后产生的,T,淋巴细胞在体外受到特异性抗,原刺激时会释放,-,干扰素，通过对,-,干扰素的定量分析可判,断是否具有结核杆菌的特异性,T,细胞反应。,-,干扰素释放实验（,IGRA,）,Proteosome,蛋白酶体,exocytosis,?,-,干扰素,结核杆菌特异,性,T,细胞,抗原呈递细胞,脱毒的炭疽毒素致死因子片段,LFn,，可以起到分子,注射器的作用,LFnESAT6/LFnCFP10,?基本原理1机体感染结核杆菌后产生的T淋巴细胞在体外受到特异,产品特点,2,高灵敏度,结核感染引起的细胞免疫反应早于细菌学及影像学表现；,无需带菌标本,，适用于“,菌阴肺结核,”及“,肺外结核,”,的鉴别,受个体免疫功能低下影响小；,高特异性,不受卡介苗与绝大多数环境非结核分枝杆菌影响,安全快速,只需患者提供,3ml,静脉全血，次日可出报告,产品特点2高灵敏度结核感染引起的细胞免疫反应早于细菌学及影,A.TB,临床性能指标,?,国内临床数据,1085,例样本,试验组,472,例：,菌阳结核,菌阴结核,对照组,613,例：,健康志愿者,非结核其它肺部疾病,A.TB临床性能指标?国内临床数据1085 例样本试验,临床诊断性能,诊断性能指标,结果（,95%CI,）,敏感性,83.3%79.9%-86.7%,特异性,85.6%82.8%-88.4%,准确度,84.6%82.5%-86.7%,阳性预测值,81.7%78.2%-85.2%,阴性预测值,86.9%84.2%-89.6%,阳性似然比,5.84.8-7.1,阴性似然比,0.20.16-0.24,临床诊断性能诊断性能指标结果（95%CI）敏感性83.3%,疾病类型,例数,A.TB,阳性,阴性,艾滋病感染者合并活动性结核,8,8(100%),0(0%),糖尿病合并活动性结核,13,12(92.3%),1(7.7%),类风湿合并活动性结核,5,4(80%),1(20%),结核性胸膜炎同时服用免疫抑制剂,9,7(77.8%),2(22.2%),合,计,35,31(88.6%),4(11.4%),A.TB,临床诊断数据,-2,疾病类型例数A.TB 阳性阴性艾滋病感染者合并活动性结核88,样本要求,1.,新鲜采集的,肝素钠,抗凝全血,2.,每份样本不得少于,3 ml,3.,样本,常温,（,15-,25）保存，不得冷冻或冷藏,4.,样本采集后,16,小时,内进行前处理（抗原刺激）,样本要求1.新鲜采集的肝素钠抗凝全血2.每份样本不得少于3,A.TB,TM,操作过程,阴性,刺激剂,阳性,刺激剂,A.TB,刺激剂,样本采集：,3ml,新鲜全,血，肝素钠抗凝,37,16,小时内运输,常温,22-24,小时,血浆收获,标准曲线制备、,样品检测,450nm,读数,37,第一步：样本的刺激,第二步：,ELISA,定量,IFN-,N P T,N P T,0.5,小时,约,3,小时,样本的刺激和孵育,A.TBTM 操作过程阴性刺激剂阳性刺激剂A.TB刺激剂样本,A.TB,TM,报告单,姓名,年龄,性别,ID,号,科别,诊断,样本,样本号,检测项目,测定结果,单位,计算公式,T/P,参考范围,提示,混合淋巴细胞培养,+,干扰素（,P,）,9.86,IU/ml,0.24,0.6,阴性（,-,）,混合淋巴细胞培养,+,干扰素（,T,）,2.34,IU/ml,备注：,患者样本经结核分枝杆菌,RD1,区编码的全抗原刺激后，特异性释放的,-,干扰素水平,为,2.34,IU/ml,；非特异释放的,-,干扰素水平为,9.86,IU/ml,；两者的比值为：,0.24,；,是否为活动性结核，请结合临床进行判断。,N,值体现的是机体的本底干扰素水平,P,值体现的是整体的机体免疫水平是否正常,T,值体现的是机体内,T,淋巴细胞对结核杆菌特异性抗原刺激的反应,A.TBTM 报告单姓名年龄性别ID号科别诊断样本样本号检测,A.TB,TM,结果解释,阴性结果,提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的细胞反应。,如果出现以下情况，阴性结果不能排除结核杆菌感染的可能：,因感染阶段不同引起的假阴性结果,少数免疫系统功能不全,/,疾病的情况，如,HIV,感染者，肿瘤患者等,其他免疫学、实验非正常操作的差异,A.TBTM结果解释阴性结果提示患者体内不存在针对结核杆菌特,A.TB,TM,结果解释,阳性结果,提示患者体内存在针对结核杆菌特异的细胞反应，患者存,在结核感染。但是否为活动性结核病，需结合临床症状及其它,检测指标综合判断,;,虽然,ESAT-6,和,CFP-10,在所有的,BCG,菌株，以及绝大多数环境分枝杆菌,中缺失，但阳性结果有可能是堪萨斯、苏氏、戈登或海分枝杆菌的感,染引起,不能够提示临床患者的病变部位,不能够判断受试者是活动性结核病患者或是潜伏感染者,A.TBTM结果解释阳性结果提示患者体内存在针对结核杆菌特异,交叉反应性,以,IL-,1,，,IL-2,，,IL-4,，,IL-5,，,IL-6,，,IL-8,，,IL-10,，,TNF-,，,GM-CSF,等,9,种细胞因子作为干扰物在反应体系中的浓度与,?,-,干扰素的浓度相当或为,?,-,干扰素浓度的,2-4,倍时，无明显交,叉反应性。,交叉反应性以IL-1，IL-2，IL-4，IL-5，IL-,干扰样本对检测的影响,溶血,：游离血红蛋白浓度达,156.6-,683.9,g/ml,时，对本产品的检测结,果未见显著影响,脂血,：甘油三酯水平最高达,9.35mmol/L,对本产品的检测结果没有显著,影响,类风湿,：类风湿因子,11.3-79.6U/ml,，,C,反应蛋白为,96.3-245.9mg/L,时,对检测结果没有明显影响,免疫抑制剂,：,肾上腺皮质激素类免疫抑制剂强的松（血药浓度,32.1-75.1 ng/ml,）对,本产品的检测结果没有影响；大环内脂类免疫抑制剂,FK506,患者的样,本不推荐用本产品检测,干扰样本对检测的影响溶血：游离血红蛋白浓度达156.6-6,20,应用前景,?,公共卫生突发事件结核病集团感染：,现阶段一般应用方案为：胸透和结核菌素试验。,?,结核病辅助诊断，尤其对菌阴结核病，肺外结核病的辅助诊断有重要价值,?,艾滋病毒和结核菌双重感染者；,?,结核病高危人群：如糖尿病、矽肺、胃切除后等，应用免疫抑制剂者，及强制,性脊柱炎使用,TNF,治疗前等；（见前述,P5,P6,）,?,我国实施预防性治疗的重点人群组的检查,?,体检（含不孕不育体检）等,20应用前景?公共卫生突发事件结核病集团感染：现阶段一般应用,
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