丙肝抗体检测的困惑与对策课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,丙肝抗体检测的困惑与对策,2,背景,1,我国,HCV,感染以,1,型为主,80%,其中以,1b,型多见,64%,慢性化率,60%-80%,肝硬化,10%-15%,肝细胞癌,1%-7%,无预防性疫苗,3,背景,2,最有效治疗方案：聚乙二醇长效,a-,干扰素（,PEG-IFN-a,）联合利巴韦林（,Ribavirin),持续免疫学应答（,SVR,）基因,1,型患者低于,50%,HCV,抗体阳性率随年龄增加而上升,男女间无明显差异,4,Nature.Reviews.March 2005 Volume 5,5,Nature.Reviews.March 2005 Volume 5,6,实验诊断,-2004,版丙型肝炎防治指南,一、常规指标,ALT AST,白蛋白 胆碱酯酶,PT,二、,HCV,抗体,以,EIA,法对高危人群筛查,免疫功能缺陷、自免病、易假阳性，,HCV RNA,有助于确诊,HCV,感染,第三代试剂敏感性、特意性高，,可不用重组免疫印迹法（,RIBA,）验证,7,2024/11/18,临界值、灰区概念,载自,应结合临床情况，慎重考虑灰区样本的检验结果,8,2024/11/18,HCV,抗体,S/CO,比值分布,载自,Clinical Chemistry,49:6 940944(2003),9,2024/11/18,举例：,HCV,抗体阳性标本做确认实验,S/CO,比值,阴性,n(%),不确定,n(%),阳性,n(%),1.0-4.0(n=98),69(70%),20(20%),9(9%),4.1-8.0(n=31),14(45%),13(42%),4(13%),8.1-12.0(n=32),5(16%),13(41%),14(44%),12.1-20.0(n=63),0(0%),3(5%),60(95%),载自,Clinical Chemistry,49:6 940944(2003),10,2024/11/18,HCV,抗体阳性标本做,HCV-RNA,检测,S/CO,比值,阳性,n(%),阴性,n(%),1.0-8.0(n=30),2(11%),28(89%),8.1-20(n=25),0(0%),25(100%),20.1-30(n=29),17(58%),12(42%),30.1-40(n=172),159(92%),13(8%),40(n=283),261(92%),22(8%),载自,Clinical Chemistry,49:6 940944(2003),11,举例,12,J Clini Hepatol,January 2011,Vol.27,No.1,13,J Clini Hepatol,January 2011,Vol.27,No.1,14,需要,HCV,检测的规范化流程,15,HCV,检测策略,16,筛查试剂,样品,阴性反应,初筛试验,阳性反应,复检试验,均阴性反应,一阴一阳,均阳性反应,补充试验,原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂,报告阴性,图,3 HCV,临床诊断筛查检测流程,以诊断为目的的检测策略,HCV,临床诊断筛查检测流程,17,复检阳性反应样品,阳性反应,免疫印迹试验,阴性反应,报告阴性,图,4 HCV,直接进行补充试验检测流程,可疑,核酸检测,阳性反应,阴性反应,报告可疑,报告阳性,以诊断为目的的检测策略,HCV,直接进行补充试验检测流程,18,复检阳性样品,可疑,免疫印迹试验,阴性反应,报告阴性,图,5 HCV,“,根据试剂,S/CO,比值,”,的确证检测流程,阳性反应,报告阳性,报告可疑,根据,S/CO,值判断,高,S/CO,值,低,S/CO,值,以诊断为目的的检测策略,HCV,考虑,S/Co,比值的确证检测流程,仅限于试剂给出了特定阈值时使用,19,根据补充试验结果报告抗,-HCV,检测结果的解释,抗,-HCV,筛查结果,补充试验,结果,报 告,解 释,筛查试验阴性,不需检测,抗,-HCV,阴性,未感染,HCV,，除非怀疑最近被感染或存在其它证据提示感染,HCV,。,筛查试验阳性，,且,S/CO,比值高,未做,抗,-HCV,阳性,可能提示既往感染或现在感染了,HCV,；未做血清学补充试验。高,S/CO,比值的样品常被确证为阳性（,95,），但尚有,1,个月）重测抗,-HCV,或,HCV RNA,。,筛查试验阳性,NAT,阳性,抗,-HCV,阳性,HCV RNA,阳性,提示活动性,HCV,感染。,筛查试验阳性,NAT,阴性,免疫印迹阳性,抗,-HCV,阳性,HCV RNA,阴性,存在抗,-HCV,，提示既往感染或现在感染,HCV,；由于某些,HCV,慢性感染病人的,HCV RNA,间隙阳性，因此一次,HCV RNA,阴性结果不能排除活动性感染。,筛查试验阳性,NAT,阴性,RIBA,阴性,抗,-HCV,阴性,HCV RNA,阴性,未感染,HCV,。,筛查试验阳性,NAT,阴性,RIBA,可疑,抗,-HCV,可疑,HCV RNA,阴性,抗,-HCV,筛查结果可能是假阳性，在这种情况下，提示未感染,HCV,。,20,样品,阴性反应,初筛试验,阳性反应,复检试验,阴性反应,阳性反应,报告阴性,筛查试剂,（高敏感性）,报告阳性,筛查试剂,（高特异性）,图,7 HCV,感染疫情报告检测流程,21,另一种抗体筛查,试剂或,NAT,以血液筛查为目的的检测策略,样品,阳性反应,初筛试验,阴性反应,复检试验,阳性反应,阴性反应,报告阳性待确证,抗体筛查试剂,报告阴性,图,6 HCV,血液筛查检测流程,22,基本原则,1,对于筛查试验阴性样品，不需要做进一步检测，可报告,“,抗,HCV,阴性,”,对于筛查试验阳性样品，可选择,S/CO,比值进行补充试验，或非,S/CO,比值的补充试验,23,基本原则,2,2a,高比值,，可报告,“,抗,HCV,阳性,”,，不需要做补充试验；低比值，最好做,RIBA.,此方案适合,特定的筛查试剂,（已证实高比值,95%,补充试验阳性。,2b,所有筛查试验阳性标本，均进行,RIBA,；或先作,HCV RNA,检测，阴性标本再测,RIBA,24,丙肝病毒及丙肝抗体试剂,1,1989,年美国学者,Choo,等从感染输血后非甲非乙型肝炎（,PT-NonA,、,NonB,）病毒的黑猩猩肝组织中，首次获得病毒的全基因克隆,同年，第一代,EIA-1,实际问世（单一,NS4,重组抗原，即,C100-3,）,1992,年，第二代,EIA-2,（增加,Core,和,NS3,重组抗原）,25,丙肝病毒及丙肝抗体试剂,2,1995,年第三代,EIA-3,出现,核心抗原比例降低,重新构建,NS3,和,NS4,，使抗原活性提高,增加,NS5,抗原，诊断价值仍在探讨,缩短检测窗口期（,58,天）,26,假阳性问题,美国,CDC,报道在,HCV,低流行率人群，如无偿献血员（低于,10%,）,采用第二代,(Abbott),和第三代,(Ortho)EIA,试剂,假阳性率可达,30%,不能仅凭,EIA,结果判断,HCV,感染,以,RIBA,或,HCV RNA,进行验证,27,造成假阳性原因,高,IgG,血症：高浓度非特异性,IgG,可吸附到固相载体上或包被的抗原上,RF,干扰,SOD,超氧化歧化酶干扰,HCV,抗原不纯,28,我国情况,RIBA,试剂昂贵，我国试验室、采血机构目前不做为补充试验,假阳性结果引起部分就医者或献血员不必要的心理负担,不同试剂盒对弱阳性的检出率不同,同一厂家不同批次的试剂，质量有差异,我国,HCV,不同感染率的人群，,S/CO,阈值数据缺乏（美国主要,a,型；中国 主要,1b,型）,在我国，,S/CO,高低不能预示真阳性的可能性大小,29,对策,30,