G试验检测及内毒素检测的临床意义

Click to edit Master title,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,G,试验检测及内毒素检测的临床意义,Part III,临床评价,Part I,G,试验,-,深部真菌感染检测,内毒素检测,革兰阴性菌检测,Part II,侵袭性真菌感染（,IFI,）,的定义,定义,:,指致病性真菌侵犯皮 下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病，危害性较大。,条件致病性真菌,1.,念珠菌属,-,念珠菌血症,2.,曲霉菌属,-,侵袭性肺曲霉菌病（,IPA),3.,其他,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,侵袭性真菌感染的特点,1.,不产生内毒,素和外毒素,4.,早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高,2.,致病力一般,较弱，机体免,疫低下时发生,3.,感染菌种变化，白色念珠菌感染下降，曲霉菌感染增长趋势上升明显,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,1.,长期使用广谱抗生素,2.,抗肿瘤药物和免疫抑制剂治疗,5,.,AIDS,感染、基础类疾病,侵袭性真菌病（,IFD,）的诱因,4.,骨髓和实体器官移植,3,.,插管等侵袭性治疗,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,6,.,使用激素治疗的病人,侵袭性真菌感染（,IFI,）现状,IFI,诊断困难及漏诊情况严重,IFI,发生率不断增加,IFI,感染病死率居高不下,1,2,3,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,严重真菌感染迅速上升势头,危重病人的存活期,延长,延长了真菌感染的 高 危 期,使此类患者业已增加的人数进一步扩大,医学和相关科学的进步,是日益严重的威胁！,国内深部真菌感染不容忽视,引自北京协和医院王爱霞主任课件,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,20,年内院内,149,例真菌感染的变化,侵袭性真菌感染（,IFI,）现状,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,IFI,诊断困难及漏诊情况严重,IFI,发生率不断增加,IFI,感染病死率很高,1,2,3,美国四大医疗中心做的关于,IFI,的一项回顾性研究,Garey KW et al.Clin Infect Dis 2006,43:2531.,死亡率,(%),延迟治疗时间（,d,）,侵袭性真菌感染（,IFI,）现状,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,IFI,诊断困难及漏诊情况严重,IFI,发生率不断增加,IFI,感染病死率很高,1,2,3,尸检研究发现：,北京协和医院,1953-1993,年间,3447,例尸检，发现深部真菌感染,85,例，其中生前明确真菌感染诊断者仅,5,例，占,5.9,，,漏诊率高达,94.1,。,诊断困难的主要原因,：,-,临床表现不典型，易被基础疾病所掩盖,-,确诊常需侵入性手段获得组织标本，侵入性操作常因患者,的病情所限难以实施,-,真菌检测项目开展相对不足或滞后,IFI,诊断困难及漏诊情况严重,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,方 法,特 点,传 统,检 查,直接培养真菌法,耗时长,阳性率低，结果是定性的，有些标本采集困难。可以区分菌种。,辅助方法：临床表现，免疫学，病理学，影像学检查等,观察期不确定，费时费力，特征性不明显并对医师的专业水平要求高,非传统,检查,1.G,试验：,通过检测,(1-3)-D-,葡聚糖的含量，判断是否有真菌感染,耗时短，灵敏度高，特异性强，定量检测可判断感染严重程度,2.GM,试验：,曲霉属半乳甘露聚糖抗原检测。判断是否曲霉属真菌感染,3.PCR,技术：,真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查和真菌核酸检测,侵袭性真菌感染的临床检测方法对比,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,G,试 验,1-3-D,-,葡聚糖,可特异性激活鲎（,Limulus,）,变形细胞裂解物中的,G,因子，引起裂解物凝固，故称,G,试验。,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,（,1-3,）,-D-Glucan,LAL-RM(,反应物,),G,因子,活化,G,因子,凝固酶原,凝固酶,凝固蛋白原,凝固蛋白（凝胶）,试验反应机理图：,b,1,6,葡聚糖,磷脂双分子层,几丁质,麦角固醇,b,1,3,葡聚糖,合成酶,甘露糖蛋白,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,（,1,3,）,-D-,葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占真菌壁成分,50%,以上。,是真菌细胞壁上的特有成分,用于侵袭性真菌感染的早期诊断,1-3-D-,葡聚糖本质及特点,(1-3)-D-,葡聚糖特性,1.,2.,3.,对热极为稳定，高压,121,并不能使其灭活。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对,G,试验灵敏,。,当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，,(1-3)-D-,葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。,在浅部真菌感染中，,(1-3)-D-,葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,G,试验检测的特点,可检测多种致病真菌感染：,念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，毛孢子菌等,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,G,试验检测一般先于临床症状平均四天,BG,值升高平均早于发热,5 d,，,早于呼吸道症状平均,10,7 d,，,早于,HRCT,检查平均,9,3 d,。,高 蕾，周 新,.(1,，,3),一,D,葡聚糖检测在侵袭性真菌感染中的诊断意义,J.,中国感染与化疗杂志,2008,3,(2),123-125.,对于念珠菌血症,G,试验检测是首选检查,J.Clin.Microbiol.2008.46:10091013.,侵袭性真菌感染的诊断标准,EORTC/MSG2008,修订版,宿主因素,临床特征,病原学,真菌镜检,真菌培养,组织病理学检查,血清学检查方法（间接证据）,G-test,临床诊断,Clinical Infectious Diseases 2008;46,微生物学标准,:,（,1,）痰或支气管肺泡灌洗液培养呈霉菌,（,2,）鼻窦抽取液直接镜检或细胞学检查，或培养呈霉菌阳性；,（,3,）痰或支气管肺泡灌洗液经直接镜检或细胞学检查发现霉菌或隐球菌；,（,4,）支气管肺泡灌洗液、脑脊液或,2,份以上的血液样品呈曲霉菌抗原（半乳甘露聚糖检测、,GM,试验）阳性；,（,5,）血液中,(1,3)-D,葡聚糖检测（,G,试验）阳性；,（,6,）血中隐球菌抗原阳性；,（,7,）无菌体液中经直接镜检或细胞学检查发现真菌；,（,8,）未留置尿管的情况下，连续,2,份尿样培养均呈酵母菌阳性或尿检见念珠菌管型；,（,9,）血培养呈酵母菌阳性；,（,10,）肺部异常，与下呼吸道感染相关的标本中（血液、痰液和支气管肺泡灌洗液等）多次培养无任何致病细菌。,宿主,因素,临床,表现,+,组织,病理,+,微生,物学,+,Ascioglu,et al,2002,Clin Infect Dis,34 7-14,拟诊,临床诊断,确诊,侵袭性真菌感染的诊断标准,：,0,36,37,38,39,40,41,体温(,C),实验室检查指导临床诊断与治疗,组织培养,+,组织学检查,+,G,、,GM,试验,+,PCR,+,治疗策略,疾病疑似,程度,-7,0,7,14,21,28,35,42,49,56,63,-14,0.1,1,10,粒细胞(,log,10,x10,9,/L,),经验性治疗,拟诊,预防,低,特异治疗,确诊,抢先治疗,临床诊断,宿主因素,-,常平 南方医科大学珠江医院 重症医学科,Part III,临床评价,Part I,G,试验,-,真菌检测,内毒素检测,Part II,内毒素定量检测,在临床治疗中的重要意义,项目介绍：,定义,细菌内毒素,（,Endotoxin,）,是,G,-,菌细胞壁上的特有结构，为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为,脂多糖,（,LPS,）中的类脂,A,。,内毒素的代谢,目前实验研究认为：一般细菌内毒素在体内,1-1.5,小时达到最高峰值，,5-6,小时逐渐衰减下来。,体内内毒素的,来源,菌体死亡或人工裂解,革兰氏阴性菌的释放,肠道内毒素的吸收,败血症时血中细菌的释放,外源性输入,体内内,毒素的,来源,检测物质,:,脂多糖,(,内毒素主要成分,),脂多糖可特异性激活鲎（,Limulus）,变形细胞裂解物中的,C,因子，再激活,B,因子，经过一系列反应，最终引起裂解物凝固的过程。,实验原理,:,实验原理图,：,细菌内毒素,因子,C,活化因子,C,因子,B,活化因子,B,凝固酶原 凝固酶,凝固蛋白原 凝固蛋白（凝胶）,传统热原检测方法与,MB-80,方法比较,传统方法,MB-80,方法,实验方法,凝胶法,动态比浊法,性质,定性,定量,结果判读,肉眼观察,准确数值，打印检测报告,使用试剂,鲎试剂,革兰氏阴性菌脂多糖检测试剂盒,（具有,SFDA,颁发的注册证,),内毒素检测的临床应用,内毒素检测,的临床应用,革兰阴性菌败血症的诊断,呼吸道感染,肝脏感染及肝硬化,胆道疾病,急性胰腺炎,溃疡性结肠炎,细菌性感染的辅助性诊,断、治疗和预后判断,原因不明的发热,外源性输注的内毒素血症的诊断,体液内毒素水平是严重细菌性炎症的一个重要的特异性指标，而且也是脓毒症和多脏器衰竭的可靠指标。不仅可用于感染类别的鉴别诊断，也可用于感染控制和病情转归的判定。,内毒素检测的临床意义,1.,系统组成：,1,）仪器,MB-80,主机,（,MB-80(E),、,MB-80(D),、,MB-80(S),、,MB-80(V),、,MB-80(M),）,2,）,MB-80,软件系统,3,）试剂,(,配套真菌、内毒素试剂盒）,4,）配套无热原耗材,2.,系统功能：,快速定量检测,深部真菌和内毒素,，帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以确诊的侵袭性真菌感染、革兰氏阴性菌感染，便于临床医生的早期诊断、早期治疗及对治疗的疗效进行判定。,3.,可检测标本,：,血液,、尿液、脑脊液、胸腔积液、腹水等。,血液透析液，透析用水,-,（内毒素检测）,MB-80,系统,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,MB-80,优势,快速,-1,个小时完成检测,动态,-,动态检测,定量,-,定量检测,灵敏,-,真菌,（,1-3,）,-,-D,葡聚糖,最低检测量,5pg/ml,内毒素最低检测量,1pg/ml,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,适合服务,临床科室,呼吸科,血液科,肿瘤科,烧伤科,感染科,ICU,病房,器官移植部门等,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,仪器检测原理,动态比浊法：,动态定量检测真菌可溶性抗原（,1-3,）,-,-D,葡聚糖，革兰阴性菌可溶性抗原（脂多糖），系统通过测定生物试剂与检测样品中抗原抗体反应生成浊度，采用动态比浊法，连续检测浊度的变化,建立时间（,T,）与微生物含量（,C,）关系的标准曲线，通过光电转换原理，经软件系统分析得出具体检测值，得出检测样品中含真菌或内毒素含量,。,MB-80,系统简介,侵袭性真菌感染,G,试 验,临床阈值,Cut-off,：阴性,10 pg/ml,中介,1020 pg/ml,阳性,20 pg/ml,儿童阳性,50pg/ml,（真菌检测）,MB-80,系统定量测定,(1-3)-D-,葡聚糖的临床意义,深部真菌感染增多且复杂，早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断。,早期诊断,快速诊断,指导用药,评价效果,真菌感染就医的患者，往往病情严重，传统的微生物分离、培养与鉴定需要时间较长，患