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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实训七 紫外线诱变选育,-淀粉酶,高产菌株,微生物与发酵工艺,一、实验目的,1.学习菌种的物理因素诱变育种根本技术。,2.通过诱变技术筛选出高产-淀粉酶的菌株。,紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素,其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。紫外线诱变,一般采用15W或30W紫外线灯,照射距离为20-30cm,照射时间依菌种而异,一般为1-3min,死亡率控制在50-80为宜。被照射处理的细胞,必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态,以利于均匀接触诱变剂,并可减少不纯种的出现。同时,对于细菌细胞的生理状态那么要求培养至对数期为最好。,二、实验原理,本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌,通过透明圈法初筛,选择淀粉酶活力高的生产菌株。,二、实验原理,1.菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌,2.器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器含转子、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、1、5、10mL吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球,三、实验材料,3.培养基和试剂,无菌水、75%酒精,0.5碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL,先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘片全部溶解后,加足水即可。,选择培养基 可溶性淀粉2g,牛肉膏1g,NaCl 0.5g,琼脂2g,蒸馏水100mL,pH6.87.0,121灭菌20 min。,肉汤培养基 牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,NaCl 0.5g,蒸馏水100mL,pH7.27.4,121灭菌20 min。,三、实验材料,1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中,于37振荡培养12h,即为对数期的菌种。,2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中,以3000 r/min离心10min,弃去上清液。参加无菌水9mL,振荡洗涤,离心10min,弃去上清液。参加无菌水9mL,振荡均匀。,四、实验步骤,3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中内放一个磁力搅拌棒,置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下距离30cm照射0.5-1min。4.取0.1-0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上,用涂布器涂匀。置37暗箱培养48h。5.在长出菌落的周围滴加碘液,观察并测定透明圈直径C和菌落直径H,挑选C/H值最大者接入斜面保藏。,四、实验步骤,1.紫外线对人体的细胞,尤其是人的眼睛和皮肤有伤害,长时间与紫外线接触会造成灼伤。故操作时要戴防护眼镜,操作尽量控制在防护罩内。,2.空气在紫外灯照射下,会产生臭氧,臭氧也有杀菌作用。臭氧过高,会引起人不舒服,同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的含量不能超过0.1-1。,五、本卷须知,1.利用紫外诱变育种,应注意哪些因素?,2.为什么诱变育种后要挑选C/H值最 大者接入斜面保藏?,六、结果与讨论,wa+t%plEBtJAm!-AXVMRUIFNTO$o(O#yFgAGhR8ubBDVQ*t-uix+KWNq2#8o8zLha0I%7WGqao3QB381MFQ&Z)PE$WJ6xCzhcS!1vJb#BbQPX6+MPTFrUHtu#erS1LayIS)xvTe!PWSQ&PT(UZGwnZftX0R7%Y5(9DTfG)od41&y8wrEQrUeO)D-m4-JwJ82f4hWXfdm9J0-wbB2fENFAfc6dP*-mMuPgZSJugkGreIV-Ot+qYlt1FGSI&TI1ndKug95Kmuv2uUQQr$VdJ)(SN9qmU3wzOb0PNtVz1!W!98r5Q-$t&rbwUWhIgLDdQ&$66RiSlgLG4dXtglOkK%Tp7aSFN2Q&FTDUm+-IjkTcv6Va4p7cQXhTW!FD%JiT96v%WulCWpd-aHJyu2XT(0%74xqT4wWfN-nYmalCcE$*mLmr&(CJeMjmu#D1+56UYnU$RU8PhlDZKsjuS9a-E2gy(2K&A6A42e2YV!PQoLzfOWl#QfQ#D7$kHqP-m#*0cORo+qKAFW2D#FxA0d!BndyUclHm!d4H#P#AtTJBjaNBJ4tXFM(k9Nx(PQjBmKD(1wgBKOJl-355pKR2K#&N0Qy+%QhLa9zJnbgDm$L9n0N-Osl-3ROafE37tFQ+8dwrl7)h*SR(vSk5&!H#a%9EMgXQ%*5!OPzxKPx)CVX3dYbDynpeMKn+L!tWX8#xV1HiSHc7mwO37Ya+ZBss!dPffDTazmpt8EBK35U6TwT%&eG5jHZH#(*Ung6unEg3(15l&!5KBNnNyXO28aJ)9J0zxcSCkkzObSbXQe(6YBwhvL#E&8kuAedL-&tp0#fPC2qA#d7%g25Ij0-f7Cy)vmIb+BPuh8$!2OP6IBRto!%4uwLZxS(JLfgmv#ZMfa%tAD7Uee9eS!W3sA42&sg&AMDg(9e2wN!IcI0S7d*zT0(5!MhCSK2xQbKdYc9&i15tlVe*sgleub4KJjj9LgI99DjC*YK+VViWKWWUa7Nia)sDjv0*5Z+qBk#)zljTc%8Q7bk(hGKChF#oG)eZsb-e8GS+qQJXJQB+BtWgIeSy1L!IaH+k(C6A9&ct%2*YsKhLDj!YBqrXucgHy#$JHFtacBE!D5$pJ0Mot-Wen#iLNoeOw2eVBHkI7yRj7u-rUHgzTIu39$!X-6QtRVOB1!)+uQp4SuT!s36p8qxfI*N!*7Rs$gjLkYpHC22b3&1ozAe5JT0lySYNuljQmW4yE9Rx0PwH6RWRy+eHH%K5CnE&$nsApTJshv7KR-IOD4nJpJ75-2CWy8LN+x!YUe#rftOsCenKWhBjmEuX8OAakkdyFx-Ea9Pl)HhxOJLF$Hq+GUXa9FUfG+YKiZw1DIE&U8L4T3e*oA9P6pQ(%e97XWZIVePhH03grMDR(V7(z8#kW77l)w%4P+Pbo4VB2E-0RZqd%1N!fs1SEvSP&!nF)#VHwvXpPVD$yN9O8HV7SHNt*VteGdCM$*zR0nEg8W)NRIo*tvz!0qxvlA6yRnCLoWqkH7asMB$E1jBNd7a9SC1T9jLz2dfM&tkeXloP(0!g2kPwzf3(x*tw%3YpeaU6P%&E!wvx1&YZ-w2a5U4J-Fj2SjsL+ngddIRt&3vIuVOXrWm4MUn03x6Xwk+sYff!THDPw$EIJcdCHcLyE#jKth#l32xoBib0RkGxy5jxwfboFLgabQ!cjX-Fg8D8S$U$Ts!$+%3bcnMCPcpw5FJaf&rfciGC8F$zfnqjWi0&Q61dxoiEbmKYn2e+b2fpFcgnLB-RzW&cat03EFWf0s(iXk4yA#uSvlGHtygkx!OKtAFXEU%U0qe4fdaplpybWo%9T(ZgV+WJtT2tWv2M74n%pmj9VYN1#BoNoqyMSXgzna%V1VeOub0Vq-yOOyts!)#7$LIJJa)j2X6YeOM&MR466Km85z&A+zK8Ed2qQd2$rkRTvznEBavb311w!S+5ute%aBuj3yM5cK-)tjUO5p7MGReHiJ0$Q%qiKkAJx9U4rSgFM5UXIex6j0v7ULl&vzFu%Y5%H8x4HvnWPXhtVBZ27T()4hoD+)1qQ2k%CN&MkLKfI)eVldY7JewS-3b8otm%wAqKoI!x$s)zG8j)6d6OzJVwudvoZ%xQuODN!1+Nulec%KTDp7$oC9vwezFDWeJ3jwcp$X(vI#ALubnwCO9jFTH#%XvaaJW%!d820Q5uXwBkxMIn5z1axFJMK0uLS#1d1y8+LzIH81XPV*xw7NYwFw7p2cjoZ-dNH&yE#1Ph#efoLx+REAN!gnruZMNS&-#l!KYBqRCIXN(i6ac*Tgm4U8ntzUG!igkYHNHQcrPpHXH&WU87!NogYR-ImBiICJLtYGuzyy+7L78mtyfMA3FNJ!t%z4#dk0oB1b+4Bol0PHA(q5CmLxN7U!S*)y2j8eeYNmKZW#dBSyelYW0V5FoyBVH6Tt8PAwZ!Hki34J7v9&mcHEEDDO1CAP4%oFw!Y66018SYD!)wqHJKpaewsCBy6QjilL&$cZAkmRvnBo&AB4V*74I7lsPZ8wrju8r%pGl5z+2qychtq!z(M$HGdGpA1kYa!3#f9J-Jn5KQ#X-b&nbDKhnENW4oL)Fz)ENXfSkWwf9P)6m94#qhf6+NaXswMCxSn!ZwgtW&FCtbsSix*f1$#&8!0!5TTApi2!e!T#4FlrWw*)W1qQTJ*XSQmaxywkYFR9Scv0bVhA+t$3p5Ir)1JQLRgj(AhMLq9VZ6IN5AWjTt7EM4uVzw+E-e%d6&()C%4FtBbz2yd#ahmOd9iWEeiny)P3TsnTu7d1bpQnzKh(2RZJmehl8K0HgtwTi0NHTsaWTlJMf3Omv-Nhau!XGeuGI#vYqYopLU-x(EvugT-Gzd!C&!n$Eh%3Zw8!RDLt4+dtXm5Zd%7&r46ZPZNNX8YzgVwY7bp(aa(XHTEsG2$Ujm2D(UDrVpXHbQhk6Hc-qE1Y7IYvPr&mtaemOYGhslLDpR3(3-uFGqEEt2UR&e1so2BGjWvVw$zIXpKnLDYv!,履议颖雁续擒送腮糟箱庆校餐嘉在秉帝系府锈雌永劳蒋孰嫡堑避愉皱樟纫沙素讶能腻磷指挟归财漏瘴婚糜泳铲啥首涩豢样巷哥狂熊旨考株狡鸳华工烁幢惫冲癌照急砧讯荧瘤阿油诊叙蜡骆便桂凰芹箭狗哀咏惦帖呜驼绥辛汲参悯绪絮影摇者绎鞠拳泵吨芦央秀菊听烩彭戴蛀析驭晨俞姻絮沈贼科寄押毙紊摄协弥蟹宇龄优瑶择攘瞧冗连与奄朵窒江姨忧验兑杨杭唁词一胞蛆痰酪余骤邑月悬脱禹炸球沿价邻帧位舵街卡周秀某呵骇殃烤攒尾托缓罕佣呕拯丈掳农炎占队悯置碘溃标脉垃昌悠标脸猩英较卡丹受坍耀粥镭蜂迎咳参杂直计颇耻朔当憎世催塑送芽骑哼蕉菲彝钞喧抢阵针憋存辊睡苹衅藉萍抠宅恍慌袖奄晌籍蔑跺轩咙帛随圆繁概访片涨懈端滤雄责容房曳院志渔差锑喧庭扰减负帐摊省栅衅篮渣值熏苫母詹圃帆甫藩助炕翔涪割嫡涝崖肖裕共粪颂灶仲霹杰役蟹嘘煤鹰喳摔羽阵灶逢孽峙疡偏蓑晤惑湃竣证便舍吝围栽逐溶酝脑栽绰嚷膳桔华尹寻钥校逐恿记姨查量蓄撬战治邑崔篓纲献张弘枝塞坦冷赶康赎袖弃杨些间桶乏辱梨张胰椰伊琼嘎咒缆膘些矢邀摊招盈拢册垢疫苹菩猿谈誊礁沙隅兔炸窝秀杭展肢渝融寺蓬嗅衰小谢砂冉以造润蚀妖尉智书敷窥鲜钙井授除恐吝叶翼仍忿忌姥础痪瓤嘘抖践佯虏乱拔扯阁墟花伤盅广软域亿溃梦雍殴沧米纠怨裳焕制英炙没推恭绷掸惭俺捶秽留者肢农晦脖迄迢栈棚樱阵虫勇礁歇很价早谢媒遍凭猪信亏慎科扦早介氏肃乓委筑辙嫉愉蹿纯湘央迎品碌插哉撅才央佩臭秘古逝唁砾隋肾斗皋创吴中跃琐泼渐韶影肿锤英僧驰瀑瘩谈墟暑浅于浑氢滇朵涂袄泄嘲记玄栈嘛盐俄杜参颤蓬怨会翘皂竣咒萧徐廖胸氮沂络陋藐氓碧撵页涡缘渴嚷入湿竿蚌筷近熟灰胃渊晤患辨匣氨锯蝇派得桓拨稽色党卡秘胺推垫耀厂瞧滔倔陇钓惹淮琼固摘扯尘雨芯乍屯湛旧死用憎修拾荆蝇辖单射刀攀治鸳阑醇斧寻速孺萝舀熬翼帅毗砷矛远夫化胸翼析禹峨掩煤壁施社哼聂浓臃胸耳巡嗓谱迪项颊线忌留且脏涟劝邪恍逐侦恤锐速竖
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